LES INSULINES DELS INSECTES

Tamaño: px

Comenzar la demostración a partir de la página:

Download "LES INSULINES DELS INSECTES"

José Antonio García Saavedra
hace 5 años
Vistas:

1 LES INSULINES DELS INSECTES Institut de Biologia Evolutiva (IBE) MARTA RUIZ GRAU Setembre 2017 Memòria Estades de Recerca Segona Fase de Joves i Ciencia

1. Introducció Durant la segona fase del programa Joves i Ciència he tingut l oportunitat d anar dues setmanes al Institut de Biologia Evolutiva (IBE), el qual és un Institut de recerca mixt entre el

2 1. Introducció Durant la segona fase del programa Joves i Ciència he tingut l oportunitat d anar dues setmanes al Institut de Biologia Evolutiva (IBE), el qual és un Institut de recerca mixt entre el Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) i la Universitat Pompeu Fabra (UPF). Allà vaig estudiar colze a colze amb el Dr. José Luis Maestro, amb ell he treballat amb diferents metologies de biologia molecular (extracció de RNA, síntesi de DNA complementari, PCR quantitativa en temps real, etc). El projecte que he dut a terme ha consistit en estudiar l insulina de Blatella germànica, insecte molt utilitzat en l experimentació genètica i evolutiva. 2. Fitxa tècnica Centre: Institut de Biologia Evolutiva (IBE) (UPF-CSIC) Adreça: Passeig Marítim de la Barceloneta 37-49, 08003, Barcelona Línies d investigació: Fisiologia d'insectes Area o departament: Biologia Evolutiva Científic al càrrec: Dr. José Luis Maestro Projecte: Les insulines dels insectes Període de realització de l estada: del 26 al 30 de juny, del 18 al 21de juliol i del 6 al 8 de setembre. 3. Objectius del projecte L objectiu principal de la meva estada va ser realitzar una quantificació de com canvien els nivells d insulina (Insulinelikepeptide, ILPs) quan reduïm els nivells de receptor d insulina a través d una doble cadena del receptor d insulina (dsinr).

3 4. Activitats desenvolupades en el projecte Durant l estada vaig realitzar molts processos diversos que els podem agrupar en tres grans blocs molt diferenciats: obtenció de dsrna, viviseccionar els teixits i quantificació per PCR. Blatella germànica Els experiments i estudis realitzats els vam dur a terme amb la blatella germànica, que és un insecte que s estudia perquè és un animal fàcil de tractar i de cuidar, ja que només necessita aigua i pinso. En segon lloc, perquè està en plaga i per tant ens interessa tractar-la i en últim lloc perquè té un cicle de vida curt. Obtenció de dsrna Durant els primers dies, vam estar preparant el RNA que posteriorment els hi vam injectar en les femelles de Blatella germànica. Vam utilitzar 5 tubs de dspolymedrina, que la vam fer servir com a control, i 4 tubs de Insuline Receptor, que va ser el nostre tractament. Primer de tot, vam preparar les miniprep amb l objectiu de treure el plàsmid de dspolyh i dsinr. En segon lloc, vam realitzar una digestió, per tal de que es pogués començar a sintetitzar la cadena i vam extreure els àcids nucleics amb l ajut de l alcohol, que és un compost que ajuda molt a precipitar les diferents substàncies. A continuació, vam començar la síntesi de cada una de les cadenes de RNA senzilles, una va començar a sintetitzar des del promotor SP6, i l altre des de T7 i vam dur a terme un procés anomenat annealing per tal de ajuntar les cadenes sense i antisense. Més tard, vam tornar a precipitar els acids nucleics i vam efectuar la digestió de DNAsa i RNAsa. Punxar Vam punxar les femelles adultes que feia menys de 24 hores que tenien la ooteca. Era molt important que totes tinguessin aquesta característica, ja que

4 sinó podrien haver sortit resultats diferents, degut a que no totes haguessin sigut tractades sota les mateixes condicions. Vam dur a terme l experiment amb 17 femelles. A 8 d elles els hi vam punxar dspolyh (control) i a les altres 9, els hi vam injectar el tractament de InR. El motiu pel qual vam punxar 8 femelles amb dspolyh va ser degut a que una d elles va perdre la ooteca a causa del estrès que li va suposar que la punxéssim. En les femelles que tenien dspolyh els hi vam injectar: 8,66 micro litres de dsrnapolyh (29/06/2017) + 11,34 micro litres de H2O DEPC. En les femelles que tenien dsinr: 4.02 micro litres de dsrnainr (29/06/2017) + 15,98 H2O DEPC. Posteriorment, vam extreure el RNA dels cervells amb els quals després vam fer la transcripció inversa, és a dir, vam generar una cadena de àcid desoxiribonucleic (ADN) a partir del àcid ribonucleic (ARN). Quantificació per PCR Vam utilitzar la PCR quantitativa en temps real, que és una variant de la reacció en cadena de la polimerasa (PCR). El protocol consistia en 95ºC de desnaturalització durant 3 minuts, 95ºC d alineament durant 10 segons i 1 minut d elongació de la cadena a 57ºC, es van realitzar fins a 50 cicles. Posteriorment, vam preparar diferents mixts: mix actines x 26 (260 micro litres de itaquniversal, 15.6 micro litres de BgActinFwd 1, 15.6 micro litres de BgActinR, micro litres de H2O; Mix ILP 5 x 26( 260 micro litres de itaquniversal, 15.6 micro litres de ILP5- F4, 15.6 micro litres de ILP5-R4, micro litres de H2O); Mix ILP 3 x 26 (260 micro litres de itaquniversal, 15.6 micro litres de ILP3- F3, 15.6 micro litres de ILP3-R3, micro litres de H2O); InR x 26 (260 micro litres de itaquniversal, 15.6 micro litres de IR-F- 13,15.6 micro litres de IR-R-24, micro litres de H2O); Mix ILP 1 x 26 ( 260 micro litres de itaquniversal, 15.6 micro litres de ILP1- F3,15.6 micro litres de ILP1-K3, micro litres de H2O; Mix ILP 2 x 26 (260 micro litres de itaquniversal, 15.6 micro litres de ILP2- F3, 15.6 micro litres de ILP2-R3, micro litres de H2O; Mix ILP 4 x 26 (260 micro litrtes de itaquniversal,15.6 micro litres de ILP4-F3, 15.6 micro litres de ILP4-R3, micro litres de H2O)

5 5. Valoració personal L estada a l Institut de Biologia Evolutiva ha sigut una de les experiències més increïbles que he tingut mai. Penso que he crescut molt tant a nivell personal com a futura científica. He après a treballar amb aparells i tècniques d investigació que desconeixia totalment i als quals no hagués pogut tenir accés de no ser per aquest programa. Durant l estada vaig aprendre moltes tècniques i tasques que es duen a terme en un laboratori d alt nivell, que em van deixar impressionada. Estic profundament agraïda a tots els meus companys de l Institut de Biologia Evolutiva, per la seva paciència i per tot el seu suport i ajuda que he rebut en tot moment, però especialment al José Luis Maestro. Ell m ha transmès la passió que té per la seva feina, i gràcies a això ara estic convençuda que en un futur em vull dedicar a la recerca científica. Finalment voldria donar les gràcies al Programa Joves i Ciències per donar-me l oportunitat a mi i a tots els meus companys de viure durant unes setmanes el somni de qualsevol jove científic.

Documentos relacionados

Instituto de Astrofísica de Canarias (IAC) - Asociación Shelios

Instituto de Astrofísica de Canarias (IAC) - Asociación Shelios L UNIVERS OBSERVABLE: ASTEROIDES, COMETES, PLANETES NANS I EXOPLANETES Àlex Munté Pérez Segona fase del programa Joves i Ciència Memòria