Palabras clave: caballos; enfermedades emergentes; Leptospira; reservorios; serovares; zoonosis.

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1 REDVET - Revista electrónica de Veterinaria - ISSN Los animales domésticos como reservorios de la Leptospirosis en Camagüey; papel de la especie equina - Domestic animals as reservoirs of Leptospirosis, role of equines Rodríguez Torrens, Herlinda de la Caridad (1) ; Barreto Argilagos, G. (2) ; García Casas, Tatiana (3) ; Vázquez Montes de Oca, R. (1). (1) Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Camagüey, Cuba. (2) Facultad de Ciencias Aplicadas a la Industria, Universidad de Camagüey, Cuba. (3) Laboratorio Territorial de Diagnóstico Veterinario de Camagüey, Cuba. Contacto: guillermo.barreto@reduc.edu.cu Resumen Los animales pueden actuar como hospederos de mantenimiento de Leptospira, contribuyendo a su persistencia, distribución y transmisión. Para evaluar la participación de reservorios de la Leptospirosis en Camagüey, con énfasis en el equino, mediante ensayo de microaglutinación se estableció la presencia de reactores a los serovares Icterohaemorrhagiae, Canicola, Ballum, Australis, Pomona, Tarassovi, Hebdomadis y Sejroe en una población constituida por bovinos, equinos, porcinos, 75 ovinos y caprinos y 69 caninos de esta provincia, desde enero de 2004 a diciembre de La variable estudiada fue proporciones de reactores por especie. La investigación puso de manifiesto que vacunos, cerdos, perros y caballares prevalecieron como hospederos de la espiroqueta, con un comportamiento similar que se diferenció significativamente de los pequeños rumiantes, las especies con menor número de positivos a la entidad analizada. Se concluye que el resultado equipara a los équidos con tres fuentes importantes de transmisión al humano. Dada la elevada cifra de caballos dedicados a la transportación de personas en áreas urbanas de la región, el resultado alerta en cuanto a un riesgo potencial de contagio al humano. Es conveniente actualizar la selección de serovares para los estudios de reactores a Leptospira en estos animales domésticos. Palabras clave: caballos; enfermedades emergentes; Leptospira; reservorios; serovares; zoonosis. 1

2 Abstract Animals could act as maintenance hostages of Leptospira, contributing to its persistence, distribution and transmission. In order to evaluate the reservoirs of Leptospirosis in Camagüey, emphasizing equines, by means of microagglutination technique was established the presence of reactors to Icterohaemorrhagiae, Canicola, Ballum, Australis, Pomona, Tarassovi, Hebdomadis, and Sejroe serovars in a population conformed by bovines, equines, porcinis, 75 ovine-caprines and 69 canines belonging to the formal province from January 2004 till December The variable studied was proportion of reactors by specie. The research revealed that cattle, swine, dogs and horses prevail with a similar behavior which differs significantly from small ruminants, which showed the minor number of positive reactors to the entity analyzed. It s concluded that the results locate horses at the same level with three relevant species in transmitting Leptospirosis to humans. Taking account the great deal of equines involved in the transportation of people across urban areas of the city the results alerts about its potential risk of contagious for human beans. It is suitable to actualize the selection of serovars for studying reactors to Leptospira into domestic animals. Keywords: emergent disease; horses; Leptospira; reservoirs; serovars; zoonoses. Introducción Anualmente se han notificado casos humanos severos de Leptospirosis en el planeta, cifra inferior a la realidad; su efecto en los animales, menos preciso, alarma por las cuantiosas pérdidas económicas en diversas especies domésticas (1). En Cuba, según refiere el Ministerio de Salud Pública (MINSAP) tiene un comportamiento endemo-epidémico con características epidemiológicas cambiantes (2) y clasifica entre las 35 primeras causas de muertes; los principales reservorios son: la rata, el cerdo, el perro y los bovinos, (3) su impacto no se cuantifica, o se ofrece sin un respaldo estadístico que lo valide. La presencia de Leptospira en la orina de equinos sero-reactivos, confirmada por PCR en Río de Janeiro, Brasil, constituye el primer reporte oficial de las potencialidades de esta especie para la transmisión del agente etiológico en áreas urbanas (4). Se ha notificado la presencia de los serovares Australis, Canicola e Icterohaemorrhagiae en caballos destinados a la transportación de pasajeros en Villa Clara (5). 2

3 En la provincia de Camagüey, no existe una información actualizada sobre las potencialidades de las especies domésticas como reservorios de la Leptospirosis. Aunque el empleo de caballos para el transporte en áreas urbanas es cada vez más extenso aún no se les contempla en las encuestas epidemiológicas rutinarias realizadas por el MINSAP ni a los casos sospechosos de la enfermedad. Esta investigación ha tenido el propósito de evaluar la participación de los animales domésticos como reservorios de la Leptospirosis en Camagüey, con énfasis en el equino. Materiales y métodos La investigación se desarrolló en el Laboratorio Territorial de Diagnóstico Veterinario (LTDV) de la ciudad de Camagüey y abarcó un período de diez años que inició en enero de 2004 y finalizó en diciembre de Determinación del papel de las especies animales como reservorios de Leptospirosis Durante el período declarado se investigaron los sueros provenientes de bovinos, equinos, porcinos, 75 ovinos y caprinos y 69 caninos, todos de la provincia de Camagüey. Las muestras se colectaron acorde a la Norma Ramal del Ministerio de la Agricultura (6) La presencia de reactores a Leptospira, se estableció mediante la técnica de microaglutinación. Los serovares utilizados como antígeno fueron: a) para las especies equina, porcina y canina: Icterohaemorrhagiae, Canicola, Ballum, Australis, Pomona y Tarassovi; b) para bovino y ovino caprino: Icterohaemorrhagiae, Canicola, Ballum, Pomona, Hebdomadis y Sejroe (7) Se asumieron como positivos los reactivos a títulos 1/100 en todas las especies, excepto en bovino cuyo valor fue 1/200. Las reglas para la nomenclatura utilizada en todo el artículo, tanto de la especie como para los serovares, ha sido la sugerida por Levett. 8 Análisis estadístico Se utilizó el sistema estadístico IBM-SPSS-Statistics Versión 21. Se realizó un análisis de varianza simple y la prueba múltiple de diferencias entre las medias, al comparar la variable proporciones de reactores por especie. Resultados y discusión La prueba de comparación entre las proporciones de reactores de cada especie demostró que bovino, equino, porcino y canino tuvieron un comportamiento similar, que los diferenció significativamente de ovino caprino, que reflejaron el menor porcentaje de positivos a Leptospira (Gráfico 1). 3

4 Gráfico 1. Comportamiento de las especies como reactores a Leptospira. Letras diferentes en cada columna difieren significativamente (P 0,01). Este resultado guarda correspondencia con el grueso de la bibliografía consultada en cuanto a la importante participación de vacunos, cerdos y perros como reservorios de la espiroqueta, en sentido general, y su mayor o menor significación como hospederos de mantenimiento según la influencia de factores geográficos, sociales, eficiencia de los sistemas de diagnósticos y la capacitación del personal involucrado, entre otros; el que equinos se les (9). equipare, constituye una novedad A continuación se acotan consideraciones en lo pertinente a cada especie animal y los serovares señalados por otros investigadores. Según Carole A. Bolin (10) los serovares de mayor importancia en ganado vacuno son Hardjo y Pomona para América del Norte, América del Sur, Australia y Nueva Zelandia; en tanto que para Europa lo es el inicial en exclusiva. En Estados Unidos la seroprevalencia de Hardjo, Pomona, Icterohaemorrhagiae y Canicola ha correspondido a porcentajes conformes a 29, 23, 19 y 11, respectivamente. Esta autora puntualiza que el primero provoca la mayoría de las infecciones de los vacunos en todo el mundo, convirtiéndolos en sus reservorios. Sin embargo, el Programa para la Prevención y Control de la Leptospirosis en Cuba (7) no lo contempla, razón por la que tampoco se incluyó en esta investigación. Su omisión podría haber 4

5 enmascarado el impacto real de los reactores bovinos en el contexto camagüeyano, algo que sería prudente sondear en ulteriores estudios. Leptospira interrogans (serovares Pomona, Icterohaemorrhagiae, Canicola, Hardjo, y Bratislava), Leptospira borgpetersenii (serovares Sejroe y Tarassovi) y Leptospira kirschneri (serovar Grippotyphosa) ocasionan infecciones en cerdos. Pomona y Bratislava están adaptados exclusivamente a esta especie, en tanto que los otros pueden usar diferentes reservorios e infectan a los porcinos de forma ocasional (11). En la propuesta a discusión se incluyó al serovar Australis, ausente en lo sugerido anteriormente (11) no así Hardjo, Bratislava, Sejroe ni Grippotyphosa, por lo que sería oportuno valorar su inclusión en las pesquisas a porcinos, en particular en provincias como Camagüey con un total de cerdos, (66,06 %) de los cuales pertenecen al sector privado y buena parte se concentran en las denominadas crías de traspatios (12) constituyendo un serio riesgo al humano, máxime cuando en estas producciones participan personas que no cuentan con la debida preparación y sus instalaciones tampoco reúnen un mínimo de los requisitos (13). Los perros actúan como hospederos de mantenimiento para Leptospira interrogans serovar Canicola. Antes de las campañas de vacunación contra el mismo e Icterohaemorrhagiae eran los más comunes en estos animales. Fruto de la presión selectiva ejercida por las inmunizaciones se ha producido una renovación en la prevalencia de otros, destacando Grippotyphosa, Pomona y Bratislava (14). Un colectivo de investigadores (7) al analizar el papel de diversos animales domésticos como reservorios de la Leptospirosis en Cuba, señalan que los serovares Canicola, Tarasovi, Pomona, Ballum y Copenhageni se presentan con frecuencia en los perros, quizás sea la razón por la que, exceptuando a este último, sean los serovares utilizados como antígenos en los estudios enfocados a esta especie. En la actual propuesta, no se incluyeron Grippotyphosa, Bratislava ni Sejroe, por las razones ya mencionadas. Quizás resulte de interés valorarlos en lo adelante, tanto en los esquemas de diagnóstico como para la toma de decisiones al sugerir el tipo de vacuna más acorde para esta especie doméstica en el territorio. De hecho, se comercializan bacterinas que utilizan como antígenos vacunales los serovares Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa y Pomona que, además de proteger contra la enfermedad, reducen la eliminación del agente etiológico a través de la orina (14) fenómeno que, sin esta medida, puede prolongarse por espacio de tres años, lo cual constituye una importante fuente de infección para las personas y el resto de los animales. Por ello, al igual que las dos especies discutidas, figura en los planes nacionales de vacunación (7). 5

6 La prevalencia real de la Leptospirosis en la especie equina se desconoce. No obstante, las evidencias serológicas apuntan hacia una incidencia superior a la reflejada en los informes clínicos. En Estados Unidos y Canadá, Pomona y Grippotyphosa constituyen la mayor causa de la enfermedad en estos animales. En el primero de estos países, al igual que en Europa, con frecuencia se confirma la presencia de anticuerpos contra Bratislava en las pesquisas de reconocimiento. Existe el criterio de que los caballos actúan como su hospedero de mantenimiento, de ahí que no manifiesten signos clínicos. Cuando se emplea la microaglutinación como herramienta diagnóstica (lo más frecuente), sucede que las infecciones agudas provocadas por Pomona dan reacción cruzada con Bratislava e Icterohaemorrhagiae, y es la razón por la que en múltiples investigaciones se refieran títulos tan elevados contra el primero de este binomio (15). La mayoría de las infecciones en el equino, transcurren de forma inaparente, por ello, quizás, al revisar la literatura publicada llama la atención la reducida atención que se le ha prestado cuando se le compara con las anteriormente comentadas. No obstante, existen comunicaciones sobre la elevada seroconversión (28 %) detectada en caballos iraníes, en especial frente a los serovares Icterohaemorrhagiae, Ballum y Pomona (16). En Nueva Caledonia, también se ha señalado una alta prevalencia de Leptospirosis en equinos (72 %), así como el papel hegemónico de los serovares Icterohaemorrhagiae y Australis (17). Sin embargo, al igual que en lo antes referido (16) carecen del respaldo de valoraciones estadísticas. Una investigación pionera, que comprendió a caballos (18), tuvo como objetivos: 1) comprender la etiología de la enfermedad; 2) sugerir estrategias para la prevención y control de la Leptospirosis equina. Aunque no declarado, hubo un tercero no explícito: demostrar que esta especie, al estar expuesta a L. interrogans, podía comportarse como hospedero de mantenimiento y afectar al humano. Se puso de manifiesto que: a) el suelo y el agua estaban significativamente asociados con el riesgo a la exposición a Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa y Canicola; b) el manejo se vinculaba positivamente a los serovares Icterohaemorrhagiae y Canicola; c) la densidad de la masa equina guardaba relación con el riesgo de exposición a Grippotyphosa. Los autores puntualizaron que la modificación en las prácticas de manejo podría reducir los riesgos de esta especie a contraer infecciones por estos serovares, así como minimizar su transmisión al humano. El subrayado no aparece en el artículo original. Un colectivo brasileño (4) demostró la presencia de las espiroquetas en la micción de equinos sospechosos de Leptospirosis, luego de una fuerte inundación en Río de Janeiro. La muestra estuvo compuesta por 276 animales de dos a cinco años de edad; 132 resultaron reactores, y Copenhageni fue el serovar más frecuente (88,8 %). A partir de los casos positivos se seleccionaron al azar 35 especímenes de micción para determinar la presencia del agente mediante cultivo y PCR. Aunque no se obtuvo crecimiento alguno, 6

7 12 resultaron positivas al ensayo molecular, prueba de la eliminación de Leptospira por la orina; también de la necesidad de emplear herramientas de ese tipo en paralelo a las técnicas clásicas. En el presente estudio, se contemplaron los serovares Icterohaemorrhagiae, Canicola, Ballum, Australis, Pomona y Tarassovi, que se corresponden con los más comunes a equinos, como evidencia la literatura discutida, pero no se tuvo en cuenta a Copenhageni, el cual podría considerarse en próximas investigaciones. No obstante, y pese a esta ausencia en la batería utilizada, la especie mostró un comportamiento similar a bovino, porcino y canino; si a ello se suma que en Camagüey existen caballos en manos de particulares (19) buena parte de los cuales se emplean la transportación de pasajeros en áreas urbanas, existen sobradas razones para que sean tomados en consideración al momento de efectuarse las encuestas epidemiológicas llevadas a efecto por el MINSAP, tanto en las pesquisas de rutina como ante sospecha de casos de Lesptospirosis. Existe el criterio que las epizootias en ovino - caprinos resultan poco frecuentes en general, e incluso que muestran una cierta resistencia a las infecciones por Leptospira (20). Una prueba al respecto lo constituye una investigación que abarcó una amplia muestra en la que todas las ovejas, investigadas mediante tres ensayos diferentes, resultaron negativas a la espiroqueta (16) Incluso, la Organización Mundial de la Salud, en su guía para la vigilancia y control de la enfermedad no las contempla entre los animales domésticos de mayor riesgo a la salud humana (21). No obstante, y pese a la proverbial fama de resistentes, el patógeno figura entre los agentes etiológicos de control obligatorio en las pesquisas que se realizan a la leche y derivados lácteos procedentes de ambas especies, para evitar el contagio, por esta vía, a los consumidores (22). El conocimiento de los serovares circulantes es un elemento crucial para comprender la epidemiología de la enfermedad, (23) identificar las fuentes de contagio y establecer las medidas preventivas para reducir los brotes. (24) Así, algunos de los más notificados en ambas especies en la actualidad son: Hardjo, Wolffi, Grippotyphosa, Canicola, Icterohaemorrhagiae, Copenhageni, Australis, Bratislava y Pomona (25). En Cuba, se ha informado que los serovares más comunes en cabras y carneros son Pomona, Copenhageni, Canicola y Hebdomadis (7) aunque las epizootias en estos animales son poco frecuentes. Tal como se ha comentado al respecto de las anteriores especies domésticas, sería conveniente valorar lo sugerido en fuentes más recientes (24) al realizar estos estudios serológicos, máxime cuando se trata de crianzas que ganan cada día mayor terreno en el país. 7

8 Conclusión La investigación pone de manifiesto la participación elevada y similar de bovino, porcino, canino y equino como reservorios de la Leptospirosis en Camagüey. Este resultado equipara a caballares con tres especies claves en la transmisión de la enfermedad al humano. Resulta prudente actualizar las baterías utilizadas en los ensayos de microaglutinación con serovares cuya presencia es elevada en otras áreas del planeta. Agradecimientos Los autores desean expresar su gratitud al personal del Laboratorio Territorial de Diagnóstico Veterinario (LTDV) de la ciudad de Camagüey que colaboró con el desarrollo de esta investigación. Bibliografía 1- Wasiński B, Dutkiewicz J. Leptospirosis current risk factors connected with human activity and the environment. REVIEW ARTICLE. Annals of Agricultural and Environmental Medicine 2013; 20: Ministerio de Salud Pública. Anuario Estadístico de Salud en Cuba. [internet]. La Habana: MINSAP [acceso 5 de enero de 2017]. Disponible en: 3- Suárez Conejero AM, Otero Morales JM, Cruillas Miranda S, Otero Suárez M. Prevención de leptospirosis humana en la comunidad. ARTÍCULO DE REVISIÓN. Rev Cubana Med Mil. [revista en Internet] [acceso 2 de enero de 2017]. 44(1) Disponible en: php? script= sciarttext & pid=s &lng=es&nrm=iso 4- Hamond C, Martins G, Lawson-Ferreira R, Medeiros MA, Lilembaum W. The role of horses in the transmission of leptospirosis in an urban tropical area. Epidemiology and Infection 2013; 141 (01): Castillo Cuenca J. C, Cepero Rodríguez O, Silveira Prado EA, Casanova Pérez R, González Pérez A, Gutiérrez Aguiar EI. Prevalencia de leptospirosis en equinos de tracción en la ciudad de Santa Clara, Cuba. REDVET [acceso 2 de enero de 2017]. VIII (6). Disponible en: veterinaria.org/revistas/recvet/n / pdf 6- NC 632: Norma Ramal. Ministerio de la Agricultura. La Habana. Cuba. 7- Puentes T, Encinosa A, Pérez G, Urquiaga R. Programa para la Prevención y Control de la Leptospirosis en Cuba. Instituto de Medicina Veterinaria. Ciudad de La Habana Levett, PN. Systematics of Leptospiraceae. Curr Top Microbiol Immunol. 2015; 387: Lunn KF. Overview of Leptospirosis. The Merck Veterinary Manual. [revista en Internet]. 2015a. [acceso 2 de enero de 2017]. Disponible en: overview of_leptospirosis.html 10- Bolin CA. Leptospirosis in cattle: disease review and update. Proceeding of the NAVC. North American Veterinary Conference. Jan. 8-12, 2005, Orlando, Florida. [acceso 5 de enero de 2017]. Disponible en: 8

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