REPRODUCCIÓN ASISTIDA EN EL VACUNO DE LECHE Obtención y Evaluación

Transcripción

1 REPRODUCCIÓN ASISTIDA EN EL VACUNO DE LECHE Obtención y Evaluación J. De la Fuente INIA Reproducción Animal y Conservación Recursos Zoogenéticos jfuente@inia.es Máster Interuniversitario en Zootecnia y Gestión Sostenible: ganadería ecológica e integrada. Instituto de Estudios de Postgrado Universidad de Córdoba Córdoba, Marzo 2012

2 TRANSFERENCIA DE EMBRIONES BOVINOS SELECCIÓN DE DONANTES SUPEROVULACIÓN MANIPULACIÓN: OBTENCIÓN EVALUACIÓN CONSERVACIÓN TRANSFERENCIA

3 OBTENCIÓN DE EMBRIONES - Dilatador de cervix de acero inoxidable - Catéteres de diferentes grosores: De 2 vías De 3 vías - Sondas de obtención: De caucho De silicona - Vainas sanitarias de IA - Aislamiento de embriones: Por decantación Por filtración - Posterior traslado a placas Petri de plástico - Manipulación embrionaria con diferentes útiles de plástico o de vidrio - Introducción en pajuelas de plástico para su congelación o TE

4 LOCALIZACION FISIOLOGICA DE LOS EMBRIONES EN EL UTERO

5 ESQUEMA DE LA RECOLECCION: INTRODUCCION DEL PBS CON JERINGA Bolsa con PBS Jeringa para Introducir PBS Válvula anti reflujo Conexión en Y Filtro Em-Con Jeringa para aire Sonda Rush o Foley

6 ESQUEMA DE LA RECOLECCION INTRODUCCION DEL PBS POR GRAVEDAD ANESTESIA EPIDURAL SONDA DE RECOLECCION CON BALON DE SUJECCION UTERO PBS PARA LA RECOLECCION EMBRIONES OVARIO AIRE CERVIX (Cuello del Utero) FILTRO DE RECOLECCION Fuentes S. y De la Fuente J.

7 ELABORACIÓN DE MEDIOS MEDIO BASE (LAVADO)= PBS ph = 7,3+0,4; OSMOLARIDAD = miliosmoles/kg. COMPOSICIÓN (D-PBS) para colectas: 1 L H 2 O (Bidestilada) ó (Desionizada y Desmineralizada) gr/l ClNa. 8 ClK.. 0,200 Cl 2 Ca (2H 2 O).. 0,1325 PO 4 KH ,200 Cl 2 Mg (6H 2 O).... 0,100 PO 4 Na 2 H. 1,150 Piruvato Na ,36 Glucosa Penicilina / Estreptomicina ui/100mg o Sulfato de Kanamicina... 25mg/li. OTROS: *Suero Fetal % * ó BSA. 0,2%

8 TRANSFERENCIA DE EMBRIONES BOVINOS SELECCIÓN DE DONANTES SUPEROVULACIÓN MANIPULACIÓN: OBTENCIÓN EVALUACIÓN CONSERVACIÓN TRANSFERENCIA

9 6 VALORACIÓN MORFOLÓGICA SEGÚN IETS: ESTADO DE DESARROLLO CODIGO ESTADO DIAS 1 2 NO FERTILIZADO DE 2 A 12 CELULAS MORULA MORULA COMPACTADA BLASTOCISTO TEMPRANO 7 6 BLASTOCISTO BLASTOCISTO EXPANDIDO 8 8 BLASTOCISTO ECLOSIONADO 8-10

10 TRANSFERENCIA DE EMBRIONES: OBTENCIÓN Y CLASIFICACIÓN DE EMBRIONES

11 CRONOLOGIA DEL DESARROLLO EMBRIONARIO 1 DIA 2 DIA 3-4 DIA 5-6 DIA (2) (2) (3)

12 CRONOLOGIA DEL DESARROLLO EMBRIONARIO 7 DIA 7 DIA 7 DIA (4) (4) (5-6) 8 DIA 8-9 DIA 9-10 DIA (7) (8) (8-9)

13 VALORACIÓN MORFOLÓGICA SEGÚN IETS ESFERICIDAD E INTEGRIDAD ZONA PELÚCIDA FORMA GENERAL OPACIDAD ESTRUCTURAS VISIBLES: TROFOBLASTO BOTÓN EMBRIONARIO BLASTOCELE ESTADO DE AGREGACIÓN DE LAS CÉLULAS DIFERENCIAS DE TAMAÑO ENTRE CÉLULAS PRESENCIA DE CÉLULAS SEPARADAS EN EL ESPACIO PERIVITELINO INTEGRIDAD DE LAS CÉLULAS

14 CARACTERISTICAS DEL EMBRION DE 7 DIAS MORULA COMPACTADA BLASTOMEROS = 40 ZONA PELUCDA PERIMETRO = ESPESOR = 25 ESPACIO PERIVITELINO

15 CARACTERISTICAS DEL EMBRION DE 7 DIAS BLASTOCISTO (joven blastocisto) BLASTOMEROS = ZONA PELUCDA PERIMETRO = ESPESOR = 25 BLASTOCELE ESPACIO PERIVITELINO TROFOBLASTO

16 VALORACIÓN MORFOLÓGICA SEGÚN IETS: CLASIFICACIÓN POR CALIDAD CODIGO ESTADO OBSERVACIONES 1 EXCELENTE 2 BUENOS 3 REGULARES/ MALOS 4 NO FECUNDADOS APTOS PARA CONGELAR NO APTO PARA CONGELAR

17

18 CALIDAD EMBRIONARIA

19 CALIDAD EMBRIONARIA

20 EMBRIONES INVIABLES

21 EMBRIONES INVIABLES

22 VALORACION EMBRIONARIA

23 ETIQUETADO DE EMBRIONES EN LA PROPIA PAJUELA CON JUNCOS IDENTIFICADORES CON OTRA PAJUELA RAZA IDENTIFICACIÓN DONANTE X SEMEN UTILIZADO Nº EMB. E0101 // 11 // IZTUETA BLAC X MERRY // // ETGS // EQUIPO DE TE FECHA DE LA RECOLECCIÓN CRIOPROTECTOR EDAD CALIDAD

24 MANIPULACIÓN Y VALORACIÓN DE EMBRIONES RECOLECCION Fin LOCALIZACION INTRODUCCION PBS+0.4% BSA VALORACION MORFOLOGICA SEGUN IETS TE 10 LAVADOS EN PBS+ 0.4% BSA + TRATAMIENTO CON TRIPSINA 0.25% INTRODUCCION EN MEDIO DE CONGELACION: 10% GLICEROL Ó 1.5M ETILENGLICOL (TD) CONGELACION