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1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : A61K 38/46, A61K 3/74 A61P 1/00, A61P 17/00 A61P 2/00, A61P 3/00 12 k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 86 knúmero de solicitud europea: k Fecha de presentación: k Número de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Composición que comprende esfingomielinasa alcalina para uso como preparación dietética, complemento alimenticio o producto farmacéutico. kprioridad: IT RM k Titular/es: ACTIAL Farmaceutica Lda. Rua Dos Ferreiros, 2 Funchal, Madeira, PT k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Simone, Claudio de k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: k 74 Agente: Carpintero López, Francisco ES T3 Aviso: En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 DESCRIPCION Composición que comprende esfingomielinasa alcalina para uso como preparación dietética, complemento alimenticio o producto farmacéutico. La presente invención se refiere al uso de la esfingomielinasa alcalina para la preparación de composiciones dirigidas a uso nutricional, dietético o estrictamente terapéutico, junto con las composiciones realizadas de este modo. Por consiguiente, estas composiciones pueden estar en la forma y actuar como complementos alimenticios, bases dietéticas o preparaciones medicinales propiamente dichas, según si están dirigidas a actuar como bases o tratamientos profilácticos o como preparaciones terapéuticas propiamente dichas, dependiendo de los individuos concretos a los que se dirige la composición. Se han identificado tres tipos diferentes de esfingomielinasa (SMasa) hasta ahora. Existe una esfingomielinasa acídica, que es una enzima lisosomal (con un ph óptimo de 4,-), la ausencia de la cual causa la enfermedad de Niemann-Pick, y existe una esfingomielinasa neutra, con un ph óptimo de 7,, para la que se han descrito dos isoformas. Una de estas isoformas se ubica en la membrana citoplasmática y es magnesio dependiente, mientras que la otra está contenida en el citosol y es independiente de cationes. Tanto la esfingomielinasa acídica como la neutra se encuentran en muchos tejidos y células y son enzimas ubicuas, que regulan numerosas funciones celulares. El tercer tipo se denomina esfingomielinasa alcalina, porque es principalmente activa a ph 9. Es independiente de magnesio y se ha encontrado tanto en las vellosidades intestinales fronterizas como en la bilis. La esfingomielinasa alcalina no se produce en el estómago, duodeno o páncreas pero se encuentra en el intestino, especialmente en la parte distal del yeyuno. Se ha observado una notable actividad esfingomielinasa alcalina también en el colon y en el recto. Se han encontrado también niveles elevados de esfingomielinasa alcalina en la bilis, pero esto parece ser propio de los seres humanos. Esta doble fuente de esfingomielinasa hace que los seres humanos sean muy eficaces en comparación con otras criaturas con respecto a la hidrólisis de la esfingomielina (SM) introducida a través de la dieta. Hasta ahora se ha pensado que la esfingomielinasa alcalina no puede ser producida por una bacteria intestinal, porque no se han encontrado diferencias entre los animales convencionales y los libres de bacterias (véase R.D. Duan, Scand. J. Gastroenterology, 33 (1998) pgs ). Aparte de la esfingomielinasa alcalina que está presente en el intestino y que está presente en la bilis, no se conocen otras esfingomielinasas alcalinas que pudieran usarse para producir composiciones dirigidas a uso nutricional, dietético o estrictamente terapéutico. Además, la esfingomielinasa acídica y la neutra no pueden emplearse debido a sus características diferentes (véase la tabla a continuación). TABLA SMasa Neutra SMasa alcalina SMasa acídica Membrana Intestino Ubicación Lisosomas Citoplasmática humano y bilis ph óptimo, 7,4 9 Dependencia No Sí No Mg ++ Resistencia No No Sí atripsina Estabilidad < C - <0- C térmica Substrato SM endocítica SM membrana SM en alimentos Ya se conoce el uso de la esfingomielinasa con fines cosméticos y dermatológicos. La Patente Japonesa N ,813 describe composiciones cosméticas que contienen esfingomielinasa y que están dirigidas a contrarrestar la disminución fisiológica de esta enzima que se produce en la piel al envejecer, y a promover su transformación en ceramida la cual, por su parte tiene un efecto 2

3 hidratante beneficioso sobre la epidermis La Solicitud de Patente Internacional PCT WO 98/22,082 describe el uso de la esfingomielinasa para la preparación de composiciones dermatológicas adecuadas para tratar alteraciones de la piel tales como dermatitis, soriasis, ictiosis y dolencias similares. Además, la Solicitud PCT describe la preparación de esfingomielinasa a partir de cepas de bacterias Gram-negativas, bacterias Gram-positivas y bacterias del ácido láctico, con claras ventajas sobre los procedimientos previamente conocidos, que usan como materiales de partida los órganos de animales mayores, tales como el cerebro y el hígado. Se ha encontrado, sorprendentemente, que algunas bacterias poseen niveles elevados de esfingomielinasa alcalina, y que su ingestión puede ser beneficiosa para el huésped. Estas bacterias pueden ingerirse vivas o en forma de extractos, siempre que éstas sean enzimáticamente activas, posiblemente en combinación con otras bacterias tales como las bacterias del ácido láctico, con SM y/o con alimentos que contengan SM. Uno de los objetivos de la presente invención es por tanto proporcionar una composición dietética, nutritiva, o farmacéutica que comprenda esfingomielinasa alcalina en una cantidad que sea suficiente para ejercer un efecto dietético, nutricional o terapéutico en un individuo que lo necesite. En particular, esta composición es adecuada para la prevención y/o tratamiento de alteraciones relacionadas con el desarrollo intestinal, procesos cancerosos, alteraciones de la respuesta inmune, procesos inflamatorios y apoptósicos del intestino y sus estructuras asociadas, alteraciones relacionadas con la síntesis del colesterol, alteraciones debidas a la naturaleza hidrófoba de las superficies del tracto gastrointestinal, alteraciones alérgicas del tracto gastrointestinal, alteraciones relacionadas con procesos digestivos, enfermedades intestinales inflamatorias, poliposis, poliposis familiar, hipercolesterolemia, infecciones con Helicobacter pylori, alteraciones del crecimiento neonatal, alteraciones relacionadas con homeostasis intestinal y enfermedades de los sistemas nerviosos central y periférico. La composición también es útil para uso en dietas pediátricas y/o alimentación enteral. En dietas pediátricas la composición puede administrarse, por ejemplo, en combinación con leche artificial, leche condensada, leche de soja, leche en polvo, leche parcialmente humanizada, y alimentos para bebés en general. La composición preferiblemente contiene esfingomielinasa alcalina de origen bacteriano, y las bacterias que contienen la esfingomielinasa alcalina se eligen de entre bacterias Gram-positivas, bacterias Gram-negativas y bacterias del ácido láctico, o de mezclas de las mismas. Más especialmente, la esfingomielinasa alcalina de la composición se obtiene de las bacterias del ácido láctico, y éstas se eligen del grupo que comprende Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus catenaforme, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus leichmannii, Lactobacillus minutus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rogosae, Lactobacillus salivarius, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium angulatum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium eriksonii, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium plantarum, Bifidobacterium pseudocatenulatum, Bifidobacterium pseudolongum, Streptococcus lactis, Streptococcus raffinolactis y Streptococcus thermophilus. La cepa particularmente preferida entre estas bacterias del ácido láctico es Lactobacillus brevis CD2, presentada el 6 de febrero de 1998 bajo N. de acceso DSM 11,988 en la Colección alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares (DSM) en Braunschweig, Alemania ( Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GMBH ) bajo el Tratado de Budapest, o mutantes o derivados de la misma. Según una forma de realización preferida de la invención, las bacterias del ácido láctico se usan en la composición como bacterias vivas, liofilizadas o sonicadas. La composición preferiblemente contiene de 1 x 2 a1x 13 UFCs de bacterias del ácido láctico por gramo de composición. Una composición particularmente preferida contiene 0 x 9 Streptococcus thermophilus, x 9 Bifidobacteria y4x 9 Lactobacillus acidophilus por gramo de composición. 3

4 La composición según la invención puede también contener ácidos biliares, en particular ácido ursodesoxicólico, pectina, esfingomielina o sus compuestos, medicamentos o alimentos que contengan esfingomielina, arginina deiminasa, ácidos grasos, ácidos grasos poliinsaturados, azúcares no fermentados, en particular lactulosa, inhibidores del colesterol, inhibidores de ceramidasa, inhibidores de proteasa, inmunomoduladores, agentes anticarcinogénicos, vitaminas, factores de crecimiento, estructurantes, cereales, fibra, emulsionantes, estabilizantes, lípidos, antioxidantes, conservantes, neutralizantes de radicales libres y/o vasoprotectores. La composición de la invención se puede administrar por vía oral como complemento alimenticio o por vía oral o parenteralmente como medicamento. La invención también se refiere al uso de esfingomielinasa alcalina para la preparación de una composición dietética, nutritiva o farmacéutica adecuada para la prevención y/o tratamiento de alteraciones relacionadas con el desarrollo intestinal, procesos cancerosos, alteraciones de la respuesta inmune, procesos inflamatorios y apoptósicos del intestino y sus estructuras asociadas, alteraciones relacionadas con la síntesis de colesterol, alteraciones debidas a la naturaleza hidrófoba de las superficies del tracto gastrointestinal, alteraciones alérgicas del tracto gastrointestinal, alteraciones relativas a procesos digestivos, enfermedades intestinales inflamatorias, poliposis, en particular poliposis familiar, hipercolesterolemia, infecciones con Helicobacter pylori, alteraciones del crecimiento neonatal, alteraciones relacionadas con homeostasis intestinal y enfermedades de los sistemas nervioso central y periférico. Esta composición es también útil para uso en dietas pediátricas y/o en alimentación enteral. En dietas pediátricas la composición puede administrarse, por ejemplo, en combinación con leche artificial, leche condensada, leche de soja, leche en polvo, leche parcialmente humanizada y alimentos para bebés en general. La esfingomielinasa alcalina que se usa es preferiblemente de origen bacteriano, y las bacterias que la contienen se eligen de entre las bacterias Gram-positivas, bacterias Gram-negativas y bacterias del ácido láctico, o de mezclas de las mismas. Más especialmente, las bacterias del ácido láctico que se usan se eligen del grupo que comprende Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus catenaforme, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus leichmannii, Lactobacillus minutus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rogosae, Lactobacillus salivarius, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium angulatum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium eriksonii, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium plantarum, Bifidobacterium pseudocatenulatum, Bifidobacterium pseudolongum, Streptococcus lactis, Streptococcus raffinolactis y Streptococcus thermophilus. La cepa particularmente preferida entre estas bacterias del ácido láctico es Lactobacillus Brevis CD2, presentada el 6 de febrero de 1998, bajo N. de acceso DSM 11,988 en la Colección alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares (DSM) en Braunschweig, Alemania ( Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GMBH ) bajo el Tratado de Budapest, o mutantes o derivados de la misma. Según una forma de realización preferida de la invención, las bacterias del ácido láctico se usan en la composición como bacterias vivas, liofilizadas o sonicadas. La composición usada preferiblemente contiene de 1 x 2 a1x 13 UFCs de bacterias del ácido láctico por gramo de composición. Una composición particularmente preferida contiene 0 x 9 Streptococcus thermophilus, x 9 Bifidobacteria y 4 x 9 Lactobacillus acidophilus por gramo de composición. Los experimentos siguientes se llevaron a cabo para confirmar la presencia y eficacia de la esfingomielinasa alcalina en las bacterias según la presente invención. Estos experimentos implicaron la detección de esfingomielinasa alcalina, la enzima responsable de la formación de ceramida en la piel humana. Procedimientos Ensayo de esfingomielinasa acídica, neutra y alcalina en bacterias del ácido láctico y en material de biopsia intestinal 4

5 1 2 3 Se suspendieron mg de bacterias Streptococcus thermophilus liofilizadas en 00 µl deuntampón que contenía Tris-HCl 0 mm, ph 7,4, MgCl 2 mm, EDTA 2 mm, DTT mm, Na 3 VO 4 0,1 mm, Na 2 MoO4 0,1 mm, p-nitrofenil fosfato mm, β-glicerofosfato mm, ATP 70 mm, PMSF 1 µm, leupeptina µm, Pepstatina µm (de Sigma Chemical Co.) y Triton X-0 0,2 % (para ensayar la actividad de la SMasa neutra) o 00 µl de Triton X-0 0,2 % (para ensayar la actividad de la SMasa acídica). Para ensayar la SMasa alcalina, las bacterias y el material de biopsia intestinal (homogeneizado) se suspendieron en tampón de sacarosa 0,2 M que contenía MgCl 2 mm,kcl0,1m,kh 2 PO 4 0 mm, PMSF 1 mm y benzamidina 1 mm (ph 7,4). Las muestras preparadas de esta forma se sometieron entonces a lisis por sonicación (durante min durante los cuales, se alternaron periodos de segundos de encendido con periodos de segundos de apagado ), usando un sonicador Vibracell (Sonic and Materials Inc., Danbury, CT). Las muestras sonicadas se centrifugaron entonces durante min a rpm a 4 C, se extrajo el sobrenadante, y se determinó la concentración de proteína con un kit creado por Bio-Rad Laboratorios, (Richmond, CA). Para determinar la SMasa neutra, se incubaron 0 µg delamuestradurante2horasa37 Cen un tampón (volumen final: 0 µl) que contenía Tris-HCl 0 mm, MgCl 2 1 mm, ph 7,4, y 2,2 µl de [N-metil- 14 C]-esfingomielina (SM) (0,2 µci/ml, actividad específica: 6,6 mci/mmol, Amersham). Para determinar la actividad de la esfingomielinasa acídica, se incubaron 0 µg de lisado bacteriano durante 2 horas a 37 Cenuntampón (volumen final: 0 µl) que contenía acetato de sodio mm, EDTA 1 mm, ph,0, y 2,2 µl de [N-metil- 14 C]-SM. Para ensayar la SMasa alcalina, las muestras se añadieron a 37 µl de tampón Tris-EDTA (ph 9) hasta un volumen final de 0,4 ml, que contenía Tris 0 mm, NaCl 0,1 M, EDTA 2mM y una mezcla de sales biliares 3 mm con una proporción molar TC:TDC:GC:GCDC de 3:2:1,8:1. Se ha encontrado que esta mezcla de sales biliares posee el efecto estimulatorio más elevado sobre la SMasa alcalina. La adición del EDTA al tampón sirvió para inhibir la actividad de la SMasa neutra, la cual es Mg ++ dependiente conunphóptimo de 7,. La C 14 -SM se disolvió en etanol, se secó connitrógeno y se suspendió enel tampón ensayo, que contenía una mezcla de Triton X-0 3 % y sales biliares 3 mm. La reacción se terminó con la adición de 2 ml de una mezcla 2:1 de cloroformo y metanol. Se extrajeron los fosfolípidos y se analizaron en placas TLC, mientras que la hidrólisis de la SM se cuantificó por autoradiografía y contaje de centelleo líquido. La SMasa presente en las bacterias sonicadas y en el material de biopsia intestinal se expresó como pool de SM hidrolizada por hora por miligramo de proteína. Actividad de la SMasa de Streptococcus thermophilus 4 0 La figura 1 muestra los niveles de actividad de la esfingomielinasa en bacterias del ácido láctico sonicadas. No se encontró actividad debida a la SMasa acídica, pero se observaron niveles apreciables tanto de la SMasa neutra como de la alcalina en las muestras bacterianas probadas bajo las condiciones experimentales usadas (varios valores de ph y con y sin MgCl 2 ). SMasa alcalina encontrada en material de biopsia intestinal La figura 2 muestra que el análisis de la actividad SMasa en las muestras de biopsia intestinal mostró una actividad elevada de SMasa alcalina del tipo dependiente de sales biliares, la cual no se pudo detectar en ausencia de sales biliares. Los niveles de actividad enzimática en los tejidos de un paciente que sufría enfermedad de Crohn mostraron un nivel inferior de SMasa alcalina que la muestra control. Efecto del Streptococcus thermophilus sobre la SMasa alcalina intestinal Como se muestra en la figura 3, el ensayo de la actividad de la SMasa en las muestras de Streptococcus thermophilus, bajo las condiciones experimentales usadas para la determinación de la SMasa intestinal, mostró que la enzima bacteriana no se veía afectada por la presencia o ausencia de sales biliares. Además, cuando la actividad SMasa bacteriana y la actividad SMasa intestinal se probaron simultáneamente, la hidrólisis de SM aumentó aditivamente. Se obtuvieron resultados similares (no mostrados) con la cepa de Lactobacillus brevis CD2, presentada el 6 de febrero de 1998, bajo N. de acceso DSM 11,988 en la Colección alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares en Braunschweig, Alemania ( Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GMBH ) bajo el Tratado de Budapest, o mutantes o derivados de la misma.

6 1 REIVINDICACIONES 1. Composición dietética, nutritiva o farmacéutica, caracterizada porque comprende esfingomielinasa alcalina en una cantidad que es suficiente para ejercer un efecto dietético, nutricional o terapéutico en un individuo que lo necesite. 2. Composición según la Reivindicación 1, adecuada para la prevención y/o tratamiento de alteraciones relacionadas con el desarrollo intestinal, procesos cancerosos, alteraciones de la respuesta inmune, procesos inflamatorios y apoptósicos del intestino y sus estructuras asociadas, alteraciones relacionadas con la síntesis del colesterol, alteraciones debidas a la naturaleza hidrófoba de las superficies del tracto gastrointestinal, alteraciones alérgicas del tracto gastrointestinal, alteraciones relacionadas con procesos digestivos, enfermedades intestinales inflamatorias, poliposis, en particular poliposis familiar, hipercolesterolemia, infecciones con Helicobacter pylori, alteraciones del crecimiento neonatal, alteraciones relacionadas con la homeostasis intestinal y enfermedades de los sistemas nerviosos central y periférico. 3. Composición según la Reivindicación 1 ó 2, adecuada para uso en dietas pediátricas. 4. Composición según la Reivindicación 1 ó 2, adecuada para uso en alimentación enteral Composición según la Reivindicación 3, caracterizada porque la composición se administra, en combinación con leche artificial, leche condensada, leche de soja, leche en polvo, leche parcialmente humanizada y alimentos para bebés en general. 6. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque la esfingomielinasa alcalina es de origen bacteriano, y las bacterias que contienen la esfingomielinasa alcalina se eligen de entre bacterias Gram-positivas, bacterias Gram-negativas y bacterias del ácido lácticoode mezclas de las mismas. 7. Composición según la reivindicación 6, caracterizada porque las bacterias del ácido láctico se eligen del grupo que comprende Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus catenaforme, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus leichmannii, Lactobacillus minutus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rogosae, Lactobacillus salivarius, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium angulatum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium eriksonii, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium plantarum, Bifidobacterium pseudocatenulatum, Bifidobacterium pseudolongum, Streptococcus lactis, Streptococcus raffinolactis y Streptococcus thermophilus. 8. Composición según la Reivindicación 7, caracterizada porque se usa la cepa Lactobacillus brevis CD2, lacualsepresentó el 6 de febrero de 1988, bajo N. de acceso DSM en la Colección alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares (DSM) en Braunschweig, Alemania ( Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH ), o mutantes o derivados de la misma a tenor del Tratado de Budapest. 9. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque las bacterias del ácido láctico se usan en la composición como bacterias vivas, liofilizadas o sonicadas.. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque contiene de 1 x 2 a1x 13 UFCs de bacterias del ácido láctico por gramo de composición. 11. Composición según una cualquiera de las Reivindicaciones 7 a 9, caracterizada porque contiene 0 x 9 Streptococcus thermophilus, x 9 Bifidobacteria y 4 x 9 Lactobacillus acidophilus por gramo de composición. 12. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizada porque también contiene ácidos biliares, en particular ácido ursodesoxicólico, pectina, esfingomielina o sus composiciones, arginina deiminasa, ácidos grasos, ácidos grasos poliinsaturados, azúcares no fermentados, en particular lactulosa, inhibidores del colesterol, inhibidores de ceramidasa, inhibidores de proteasa, inmunomoduladores, agentes anticarcinogénicos, vitaminas, factores de crecimiento, tensioactivos, cereales, fibra, emulsionantes, estabilizantes, lípidos, antioxidantes, conservantes, neutralizantes de radicales libres y/o vasoprotectores. 13. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que se puede administrar por vía oral como un complemento alimenticio. 6

7 14. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, que se puede administrar por vía oral o parenteralmente como un medicamento Uso de la esfingomielinasa alcalina para la preparación de una composición dietética, nutritiva o farmacéutica adecuada para la prevención y/o tratamiento de alteraciones relacionados con el desarrollo intestinal, procesos cancerosos, alteraciones de la respuesta inmune, procesos inflamatorios y apoptósicos del intestino y sus estructuras asociadas, alteraciones relacionadas con la síntesis de colesterol, alteraciones debidas a la naturaleza hidrófoba de las superficies del tracto intestinal, alteraciones alérgicas del tracto gastrointestinal, alteraciones relacionadas con procesos digestivos, enfermedades intestinales inflamatorias, poliposis, en particular poliposis familiar, hipercolesterolemia, infecciones con Helicobacter pylori, alteraciones del crecimiento neonatal, alteraciones relacionadas con la homeostasis intestinal y enfermedades de los sistemas nerviosos central y periférico. 16. Uso según la Reivindicación 1 en dietas pediátricas. 17. Uso según la Reivindicación 1 en alimentación enteral. 18. Uso según la Reivindicación 16, caracterizado porque la composición se administra, en combinación con leche artificial, leche condensada, leche de soja, leche en polvo, leche parcialmente humanizada y alimentos para bebés en general. 19. Uso según una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 18, en el cual la esfingomielinasa alcalina es de origen bacteriano, y las bacterias que la contienen se eligen de entre bacterias Gram-positivas, bacterias Gram-negativas y bacterias del ácido láctico, o de mezclas de las mismas.. Uso según la Reivindicación 19, caracterizado porque las bacterias del ácido láctico se eligen del grupo que comprende Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus buchneri, Lactobacillus casei, Lactobacillus catenaforme, Lactobacillus cellobiosus, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus curvatus, Lactobacillus delbrueckii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus leichmannii, Lactobacillus minutus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rogosae, Lactobacillus salivarius, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium angulatum, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium eriksonii, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium plantarum, Bifidobacterium pseudocatenulatum, Bifidobacterium pseudolongum, Streptococcus lactis, Streptococcus raffinolactis y Streptococcus thermophilus. 21. Uso según la Reivindicación, caracterizado porque se usa la cepa Lactobacillus brevis CD2, la cual se presentó el 6 de febrero de 1988, bajo N. de acceso DSM en la Colección alemana de Microorganismos y Cultivos Celulares (DSM) en Braunschweig, Alemania ( Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH ) a tenor del Tratado de Budapest, o mutantes o derivados de la misma. 22. Uso según una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 21, caracterizado porque las bacterias del ácido láctico se usan en la composición como bacterias vivas, liofilizadas o sonicadas Uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 21, caracterizado porque se usan de 1 x 2 a1x 13 UFCs de bacterias del ácido láctico por gramo de composición. 24. Uso según una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 21, caracterizado porque se usan 0 x 9 Streptococcus thermophilus, x 9 Bifidobacteria y 4 x 9 Lactobacillus acidophilus por gramo de composición. NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté onoincluída en la mencionada reserva. 7

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