ELABORÓ: Biól. Mar. Francisco Antonio Flores Higuera. Supervisor Técnico CSABCS Moluscos. 1. Introducción:

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1 PROTOCOLO PARA LA TOMA DE MUESTRA DE FITOPLANTON EN LAS UNIDADES DE PRODUCCION DE MOLUSCOS BIVALVOS DE BAJA CALIFORNIA SUR, SU FIJACIÓN PARA LA OBSERVA CIÓN EN CAMPO Y ENVIO A LA PAZ. ELABORÓ: Biól. Mar. Francisco Antonio Flores Higuera. Supervisor Técnico CSABCS Moluscos 1. Introducción: Existe una gran preocupación por el impacto de las Florecimientos Algales Nocivos (FAN), en el medio ambiente y en la salud de los consumidores de organismos marinos, la oportuna detección puede significar importantes ahorros en costos de tratamientos tanto para organismos marinos afectados (Depuración), como en impactos negativos en pesquerías y en la acuacultura. El Comité de Sanidad Acuicola de Baja California Sur desde su creación ha trabajo muy de cerca con los productores de Moluscos Bivalvos para la detección oportuna de FAN en los cuerpos de agua donde se realizan actividades acuicola por que se han establecido estrategias de monitoreo en los cuerpos de agua consistente en toma de muestra y el análisis in situ y en laboratorio 2. Objetivos: 2.1 Objetivo General: Estandarizar la forma en la que se realiza los muestreos de fitoplancton en las unidades de producción acuícola de Moluscos Bivalvos del estado de Baja California Sur para que los productores estén en capacidad de responder ante contingencias ocasionas por FAN y así proteger la salud humana así como el rendimiento de la industria acuicola en Baja California Sur, mediante muestreos oportunos de agua de mar así como para la identificación, clasificación y cuantificación de especies fitoplanctónicas tóxicas, a fin de poder implantar acciones preventivas de manera oportuna. 2.2 Objetivos Particulares Uniformizar u homologar los criterios relacionados con el muestreo de fitoplancton en toda las unidades de producción de Moluscos Bivalvos en Baja California Sur. Obtener información rápida y confiable sobre la incidencia de FAN en las granjas de Moluscos Bivalvos del estado de BCS. Establecer una base de datos históricos por UPA a fin de obtener las básales de las especies fitoplanctónicas por regiones y microregiones del estado de BCS

2 3. Materiales y Métodos. 3.1 Material y equipo necesarios para la toma de muestra de fitoplancton y observación en campo de la misma (Arrastre): a) Frascos de plástico para el trasporte de las muestras hasta el sitio de observación. b) Capilares planos (microslides), porta objetos de vidrio, o câmara de conteo Sedwing-Rafter. c) Red para fitoplancton, de 20 micras de luz de malla. d) Microscópio de campo. e) Etiquetas. f) Marcadores a prueba de agua (en tinta negra o azul) g) Geoposicionador (gps) Procedimiento para la observación in situ de fitoplancton a) Se localiza el punto de muestreo mediante un gps o a través de las referencias en tierra, previamente establecidos (Boca y Cultivo). b) Se enjuaga la red con agua de mar, c) Se introduce la red en el cuerpo de agua a una profundidad de aproximadamente 1 metro, asegurando que no quede ninguna burbuja de aire en la misma. d) Se realiza un arrastre con la panga en forma circular durante 5 minutos aproximadamente a una velocidad de 1 nudo o bien hasta que se observe la presencia de biomasa dentro de la red. e) Se extrae la red del agua, dejando únicamente la cantidad de agua necesaria a efecto de que la muestra no se encuentre muy concentrada y tenga medio de disolución. g) Se introduce una pequeña cantidad del sobrenadante en el capilar plano (microslides) o sobre el porta objetos h) Se coloca la muestra en el microscopio. i) Se procede a la observación de la muestra en vivo y al registro de los datos.

3 3.2 Toma de Muestras para el envió a La Paz para análisis cualitativo Material mínimo requerido para la toma de muestra para el envió a La Paz para análisis cualitativo (Conteo de microalgas). a) 2 Frascos transparentes con capacidad de 950 ml con tapa de rosca. b) Cinta Maskin Tape o Etiquetas y marcadores a prueba de agua (en tinta negra o azul). c) Acetato de lugol Procedimiento para la toma y fijación de muestra de Arrastre para el análisis cualitativo en laboratorio, (Observación de la composición del fitoplancton). a) Se localiza el punto de muestreo mediante un gps o a través de las referencias en tierra, previamente establecidas (Boca y Cultivo). b) Se enjuaga la red con agua de mar, c) Se introduce la red en el cuerpo de agua a una profundidad de aproximadamente 1 metro, asegurando que no quede ninguna burbuja de aire en la misma. d) Se realiza un arrastre con la panga en forma circular durante 5 minutos aproximadamente con la marcha mínima del motor fuera de borda bien hasta que se observe la presencia de biomasa considerable dentro de la red. e) Se extrae la red del agua, dejando únicamente la cantidad de agua necesaria a efecto de que la muestra no se encuentre muy concentrada y tenga medio de disolución. f) se coloca la muestra en los frascos de 250 ml (Color ámbar), uno se llena por completo dejando solo espacio para unas 10 gotas de Acetato de lugol, otro se llena a 1/3 de su capacidad y se rellena con alcohol.

4 3.3 Muestras Superficial de Agua Directa para el análisis cualitativo (Conteo de microalgas) Material mínimo requerido para la toma de las Muestras Superficial de Agua Directa para el análisis Cualitativo (Conteo de microalgas). a) 4 Frascos color ámbar con capacidad de 250 ml con tapa de rosca b) Cinta Maskin Tape o Etiquetas y marcadores a prueba de agua (en tinta negra o azul). c) Alcohol de caña d) Acetato de lugol Procedimiento para la toma de las Muestras Superficial de Agua Directa para el análisis Cualitativo (Conteo de microalgas). a) Localizar el punto de muestreo de acuerdo a lo señalado anteriormente. b) Enjuagar el frasco al menos tres veces con agua del lugar, c) Sumergir el frasco aproximadamente 30 cm del espejo de agua, tratando de llenar el frasco dejando espacio para unas 20 gotas de acetato de lugol 3.4. Equipo para la toma de Parámetros Ambientales. f) Oxímetro y/o Termómetro. g) Potenciómetro (ph) a) Refractómetro. a) Disco de Secchi

5 4. Consideraciones: 4.1 Todas las muestras se etiquetan con la siguiente información: 1. Fecha 2. Sitio 3. Estación (boca o cultivo) 4. Fijador (lugol o alcohol) 5. Hora de la toma de la muestra 6. Nombre del colector 7. Condiciones de marea Subiendo o Bajando NOTA: Cuando se presente un evento de FAN es necesario realizar un muestreo aun fuera de calendario sobre la mancha del Florecimiento, y a partir de ese momento un monitoreo constante hasta que desaparezca la mancha. Tabla I. Límites máximos permisibles de fitoplancton tóxico en Agua de mar FITOPLANCTON (BIOTOXINA) Alexandrium spp (PSP) Pyrodinium bahamenses var. compressum (PSP) Gymnodinium catenatum (PSP) Dinophysis spp (DSP) Prorocentrum spp (DSP) Pseudonitzchia spp (ASP) Karenia brevis (NSP) LÍMITES 1000 cél/l 5000 cél/l 5000 cél/l 200 cél/l 200 cél/l 50,000 a 100,000 cél/l 5,000 cél/l Este protocolo esta basado en el anexo 9b de la Guía Técnica del PMSMB INSTRUCCIÓN DE TRABAJO PARA EL MUESTREO DE FITOPLANCTON Y DETECCIÓN DE BIOTOXINAS.

6 Procedimientos del Muestreo de Fitoplancton Seguimiento 2010 Lectura disco sechii, temperatura, Oxígeno disuelto, ph, Salinidad.(Todas las muestras fitoplancton y agua se conservaran en un lugar fresco y protegido del sol hasta su envió a la paz) Toma de Muestra Muestra de Agua Directa (Superficie). Arrastre vertical (5 min), dependiendo productividad puede ser 2-5 minutos. Etiquetado de Muestra Fijación y Preservación Envió a La Paz Todas las muestras se etiquetan con la siguiente información: 1. Fecha. 2. Sitio. 3. Estación (boca o cultivo). 4. Fijador (lugol o alcohol). 5. Hora de la toma de la muestra. 6. Nombre del colector. 7. Condiciones de marea (Subiendo o Bajando). Al igual que se anotan estos datos en una bitácora. Fijado con Acetato de lugol. Frascos transparentes de 620 ml. Alícuota 1: Fijada con 10 gotas de acetato de lugol Frascos Ámbar de 120 ml de capacidad. Alícuota 2 etanol al 70% (un volumen de muestra y dos volúmenes de etanol al 96%) (4 C en obscuridad) Las muestras ya fijadas se enviaran a La Paz por paquetería de preferencia uno o dos días después de la toma, es importante avisar al CSA del envió y proporcionar el No. de Guía para la recuperación de la muestra. Durante un evento de FAN los muestreos se debe realizar sobre la mancha fijándola con acetato de lugol y alcohol como se indica arriba, DIARIO hasta que la mancha se haya disipado, sin dejar de muestrear sobre las estaciones de CULTIVO Y BOCA.