SITUACIÓN ACTUAL DE LEPTOSPIROSIS CANINA Y SUS IMPLICACIONES EN SALUD PÚBLICA ANTECEDENTES

Transcripción

1 SITUACIÓN ACTUAL DE LEPTOSPIROSIS CANINA Y SUS IMPLICACIONES EN SALUD PÚBLICA ANTECEDENTES La leptospirosis es una enfermedad zoonotica reemergente distribución mundial, esta enfermedad no sólo implica problemas a nivel epidemiológico sino también de tipo económico y social. Esta zoonosis es diagnosticada en pocas ocasiones, debido a la falta de conocimiento de la enfermedad o ausencia de métodos diagnósticos (Buitrago, 2014). La Leptospirosis es una enfermedad transmisible tanto de los animales como del hombre (OIE, 2008; Adler y de la Peña Moctezuma, 2010; DGE, 2012), es una enfermedad zoonotica de amplia distribución, producida por una espiroqueta Gram negativa del género Leptospira spp (Vado-Solís et al., 2002; Campos et al., 2004; Weese y Fulford 2011). Las leptospiras son espiroquetas que pertenecen al orden Spirochaetales y a la familia Leptospiraceae (Gamarra, 2009). En cuanto a su taxonomía, en el 2007, el Subcomité de Taxonomía de Leptospiraceae, decidió a dar el estado de especies a las especies genómicas 1, 3, 4 y 5, lo que resulta en una familia que comprende de 13 especies patógenas de Leptospira: L. Alexanderi, L. alstonii (especie genómica 1), L. borgpetersenii, L. inadai, L. interrogans, L. fainei, L. kirschneri, L. licerasiae, L. Noguchi, L. santarosai, L. terpstrae (especie genómica 3), L. weilii, L. loboifi, con más de 260 serotipos. Las especies saprofitas de Leptospira incluyen L. exaflbi, L. meyeri, L. yanagawae (especie genómica 5), L. kmetyi, L. vanthielii (especie genómica 4), y L. wolbachii, y contienen más de 60 serotipos (Adler y de la Peña Moctezuma 2010). Desde el punto de vista clínico y epidemiológico es más practico utilizar una clasificación basada en diferencias en pruebas serológicas. Sin embargo, las pruebas serológicas sólo nos indican que el hospedero estuvo en contacto con el agente infeccioso. Así mismo, las leptospiras patógenas se dividen en serovariedades, según su composición antigénica. Más de 200 serovariedades integran 25 grupos serológicos (serogrupos) (OIE 2008; Gamarra 2009; Weese y Fulford 2011). Una característica de la bacteria Leptospira spp es que se considera muy sensible a la desecación, a la exposición directa de rayos solares y a los cambios de ph (vive en ph entre 6 y 8), pero sobrevive hasta tres meses en suelos húmedos, aumentando este tiempo en aguas estancadas. Por esto, la tasa de incidencia de la leptospirosis se incrementa en épocas lluviosas en regiones de clima sub tropical y tropical (DGE, 2012; Tuemmers et al., 2013). Los animales son considerados hospederos de mantenimiento de la enfermedad y los distintos serovariedades tienen predilección por algunas especies, entre los que podemos nombrar: Canicola asociada al

2 perro, Hardjo para bovinos, Pomona para bovinos y cerdos, Bratislava para los cerdos e icterohaemorrhagiae a roedores y perros, siendo ésta la que produce con mayor frecuencia infección grave en humanos (OIE, 2008; Adler y de la Peña Moctezuma, 2010; DGE 2012, Tuemmers et al., 2013). La leptospirosis se puede transmitir de forma directa o indirectamente, entre animales, o de los animales a las personas, y de personas a los animales. Sin embargo, a veces la infección ocurre en sentido inverso, por lo que el médico humano o veterinario debe tener presente esta posibilidad (Gamarra, 2009; Velasco y Rivas, 2010). La leptospirosis canina por su gran variación de signos clínicos que la caracterizan hacen que el diagnóstico se confunda con mucha facilidad con otras enfermedades de tipo febril (Hernández, 2009; Navarrete-Espinosa et al., 2013). Se ha descrito que el perro padece dos formas de leptospirosis, una semejante a la enfermedad de Weil, con una presentación ictérica aguda, y, otra no ictérica denominada tifus canino o enfermedad de Stuttgart (Hernández, 2009). La leptospira tiene un tiempo de duplicación de 6 a 16 horas, teniendo un periodo de incubación de dos semanas aproximadamente (Campos et al., 2004). Debe sospecharse de leptospirosis aguda en perros cuando se presente fallo renal agudo o ictericia, y de leptospirosis crónica cuando existan casos de aborto, nacimiento de animales débiles (pueden ser prematuros), infertilidad, fallo renal crónico o hepatitis crónica activa (OIE, 2008). Los animales infectados crónicamente pueden ser portadores durante toda la vida y servir de reservorios de la infección para otros animales y para los humanos (OIE 2008; Tuemmers et al., 2013). En cuanto a los procedimientos de diagnóstico, las pruebas de laboratorio para la leptospirosis son esenciales en perros, ya que varían según la historia clínica, la duración de la infección y el serotipo infectante (OIE, 2008; Monti, 2014). Los reservorios naturales de las leptospiras son los animales silvestres, en especial los roedores, de igual forma son considerados reservorios los animales domésticos, los cuales pueden ser actuar como hospedadores accidentales o de mantenimiento, y así participar en la transición de diferentes serovariedades de leptospira (Navarrete- Espinosa et al., 2006). Es importante destacar que, en los ambientes urbanos, son las ratas y los perros los principales reservorios, así como en el campo lo son los bovinos, porcinos y equinos (Dammert, 2005). En el caso de los perros son considerados reservorios primarios de L. interrogans Canicola y la Bataviae, además los perros también pueden infectarse de varios serovares mas como, L. interrogans Icterohaemorrhagiae, Georgia, y así servir como hospederos accidentales. Existen pocos estudios en la zona urbana relacionados a

3 leptospirosis canina, y algunos propietarios sólo vacunan en contra de rabia, por lo que los perros que son mascotas quedan expuestos a la enfermedad y a ser diseminadores de la bacteria, lo cual incrementa el riesgo en humanos que están en contacto con ellos. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Determinar la presencia de leptospirosis canina y su impacto en la Salud Pública en el municipio de Veracruz, México. OBJETIVOS ESPECIFICOS -Determinar la seroprevalencia de leptospirosis canina en el municipio de Veracruz, México. -Identificar los factores de riesgo asociados a leptospirosis canina en el municipio de Veracruz, México. METAS Desarrollar al 100% el proyecto de investigación con la participación de profesores de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia campus Veracruz, así como la participación de investigadores de la Universidad Estatal de Texas (Texas State University) y el USDA. METODOLOGÍA Área de estudio El estudio se realizará en las localidades pertenecientes al municipio de Veracruz, México, ubicado en las coordenadas geográficas N, W (localización de la estación de monitoreo climático) en el estado del mismo nombre. Colinda al norte con el Municipio de La Antigua, al noroeste con el municipio de Paso de Ovejas, al Oeste con el municipio de Manlio Fabio Altamirano, al sur con el municipio de Medellín de Bravo, al Sureste con el Municipio de Boca del Río y al este con el Golfo de México. El clima es cálido subhúmedo, con temperatura media anual de 25.4 C, precipitación media anual de 1564 mm, a una altura de 19.4 msnm (CONAGUA, 2015).

4 Diseño de estudio El estudio epidemiológico será de tipo observacional transversal, en las localidades pertenecientes al municipio de Veracruz. Tamaño de muestra Se realizará un muestreo aleatorio por conglomerados, tomando como tales las 106 localidades activas en el municipio de Veracruz (INEGI, 2010), con una población canina media por localidad de 2907 perros, una prevalencia del 50%, y un nivel de confianza del 95%, el tamaño de muestra calculado es 384, las cuales se tomarán en 30 localidades, con una fracción de muestreo de 13 perros por localidad. Los datos para calcular la población media por localidad, son proporcionados por la información del Departamento de Zoonosis del SESVER, tomando en cuenta encuestas para medir cobertura de vacunación, donde la población media de perros por casa habitada es 2, con una población total media aproximada de 308,162 perros en el municipio de Veracruz. La fórmula utilizada para calcular el tamaño de muestra es: nc=n[1+(m-1)ρ] Donde: n= tamaño de muestra aleatoria simple con precisión definida M = Tamaño medio de los conglomerados Ρ = Coeficiente intraconglomerado La fórmula para calcular el número de conglomerados a muestrear es: n=d((z 2 pq)/d 2 ) Donde: p: prevalencia q= 1-p d= precisión deseada Z= valor crítico de la distribución normal estándar

5 Para calcular el número de animales a muestrear por conglomerado se divide nc por M (Vivanco, 2005). Elección de los conglomerados La elección de las localidades se realizará utilizando la función aleatoria de Excel en la base de datos del INEGI disponible y seleccionando las primeras 30. Elección de las unidades elementales (perros) Se utilizará un muestreo sistemático, calculando k = tamaño de la población del conglomerado / tamaño de muestra (Jaramillo y Martínez, 2010). Por ejemplo, si una localidad elegida aleatoriamente fue El Renacimiento, con una población aproximada de 1138 perros y una fracción de muestreo de 13 perros; aplicando la fórmula k= 1138/13=87.53, es decir, se debe tomar una muestra cada 88 perros aproximadamente. Si por cada casa hay dos perros en promedio, entonces 88/2= 44. La primera muestra se toma en una casa determinada aleatoriamente, y de ahí cada 44ava casa, se toma la muestra. Si en esa casa no hay perro o el dueño se niega a cooperar, se tendrá que pasar a la siguiente, es decir a la 45ava esto es aproximado. Captura de ratas En cada una de las casas de procederá a capturar aproximadamente 2 ratas por casa, y se procederá a realizarles una necropsia y extraer los riñones para conservarlos en alcohol al 70% y así poder identificar la especie de Leptospira spp. presente en el municipio. Criterios de inclusión Se incluirá cualquier perro aparentemente sano mayor de 3 meses, el animal debe vivir en poblaciones pertenecientes al municipio de Veracruz, y con una persona responsable para autorizar la toma de muestra. Criterios de exclusión Perros menores de dos meses, que no vivan en el municipio de Veracruz, que sean pertenecientes a la perrera municipal, ferales, callejeros o sin una persona que firme como responsable, o que por cuestiones fisiológicas sea inviable la extracción de una muestra suficiente de sangre.

6 Diseño de la encuesta epidemiológica Se aplicará una encuesta recabando información concisa y codificada para su manejo por programas estadísticos, aplicada al propietario de la mascota después de su consentimiento firmado para la toma de muestra. Los datos serán procesados de forma inmediata en una base de datos con el programa Microsoft Excel versión Ejemplos de variables a considerar son Ubicación GPS o georreferenciación, edad, sexo, raza, viajes recientes de la mascota, lugar de habitación, presencia de roedores, presentación de signos clínicos (ictericia, uveítis, abortos) historia clínica del animal, etc. Toma de muestra sanguínea Con el previo consentimiento firmado por el responsable de la mascota y realización de encuesta epidemiológica, la toma de muestras será por punción cefálica o yugular, previa asepsia; obteniendo 2 ml de sangre por tubo, identificándolas y dejando en reposo por 5 minutos. Las dos muestras de sangre se guardarán en refrigeración y se trasladarán al Laboratorio de Parasitología de la Unidad de Diagnóstico de la Posta Zootécnica Torreón del Molino de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Veracruzana, donde se centrifugarán las muestras de sangre a 1000 g durante 15 minutos para separar el suero. Todas las muestras se depositarán en tubos para microcentrífuga de 0.5 ml de capacidad, y se almacenarán a -20 C hasta su utilización. Diagnóstico de laboratorio Los sueros de perros serán procesados y analizados en el Laboratorio de Parasitología de la Posta Zootécnica Torreón del Molino ; el diagnostico se realizará por medio de la prueba de aglutinación microscópica (MAT) la cual se considera como la prueba estándar de oro (Dammert, 2005, DGE, 2012). Esta prueba consiste en enfrentar el suero diluido, en este caso de los animales muestreados, con un cultivo de leptospiras, para poder evaluar el grado de aglutinación, por medio de un microscopio de campo oscuro y así determinar el tipo de serovariedad, en donde el punto de corte de la dilución más alta donde se observe el 50% de leptospiras aglutinadas y el otro 50% libres (Adagio et al., 2000, Dammert, 2005). Las ratas capturadas serán sacrificadas y se procederá a realizarles una necropsia para extraer los riñones, los cuales serán conservados en alcohol al 70% para posteriormente realizar PCR y saber que especie de Leptospira spp. es la que está presente en el municipio.

7 Análisis estadístico Los datos obtenidos serán capturados en una hoja de Excel y se analizarán con el programa estadístico STATA versión 11 y se estimará la seroprevalencia general y específica, para la significancia estadística entre variables se utilizará la prueba de Chi cuadrada. Así mismo, con el mismo programa se realizará un análisis univariado, multivariado y regresión logística para así poder identificar los factores de riesgo asociados a leptospirosis canina. LITERATURA CITADA Adler, B. y de la Peña Moctezuma, A., Leptospira and leptospirosis. Veterinary Microbiology, 140(3-4), pp Buitrago, L.A.C., Prevalencia de Leptospirosis en Colombia ; Revisión Sistemática de Literatura. Campos, a. a E., Guajardo, G.T. y Castrejón, O.V., Identificación de leptospira en la patogénesis de la uveítis crónica en la ciudad de México. Revista Mexicana de Oftalmologia, 78(4), pp CONAGUA, Normales climatológicas, Veracruz, Ver, Dammert, N., Leptospirosis: una revisión bibliográfica: pp Gamarra, R., Sistema de Revisiones en Investigación Veterinaria de San Marcos: Leptospira. Sirivs, 2, pp Navarrete-Espinosa, J. et al., Prevalencia de anticuerpos contra dengue y leptospira en la población de Jáltipan, Veracruz. Salud Publica de Mexico, 48(3), pp OIE,., Leptospirosis. Manual de las Pruebas de Diagnóstico y de las Vacunas para los Animales Terrestres, pp Tuemmers, C. et al., Prevalencia de leptospirosis en perros vagos capturados en

8 la ciudad de Temuco, 2011., 30(3), pp Vivanco, M Muestreo Estadístico. Diseño y Aplicaciones. Editorial Universitaria, Santiago de Chile. INFRAESTRUCTURA DISPONIBLE EQUIPO ACTIVIDAD INSTITUCIÓN Laboratorio con Dx de las muestras infraestructura Termociclador PCR Cámara de Electroforesis Estufas de cultivo Mantenimiento del cepario Jaulas Captura de ratas y Texas State University ratones Potenciómetro ph de soluciones Autoclave Esterilización de material El proyecto tiene incidencia en la formación de Recursos humanos, principalmente a nivel licenciatura. Debido a que los estudiantes tendrán participación activa en el área de la Medicina Veterinaria, estudiantes de diferentes Experiencias Educativas tales como Enfermedades Infecciosas, Bacteriología, Patología Clínica y otras serán beneficiados en prácticas en el laboratorio, desde la toma de muestra y el procesamiento. Lo anterior, se realizará con apoyo de equipo comprado con recursos del PIFI. INFRAESTRUCTURA DISPONIBLE EQUIPO ACTIVIDAD INSTITUCIÓN

9 Laboratorio con infraestructura Termociclador Cámara de Electroforesis Estufa de cultivo Jaulas Dx de las muestras PCR Mantenimiento del cepario Captura de ratas y ratones Texas State University Potenciómetro ph de soluciones Autoclave Esterilización de material MONTO A EJERCER RUBRO CANTIDAD JUSTIFICACIÓN MONTO Beca estudiante Materiales y Consumibles a 1 becario El estudiante Gerardo Gabriel Ballados González será el estudiante que se le asignará la beca durante el periodo correspondiente, el estudiante realizará una tesis para titularse de la Licenciatura como uno de los productos del proyecto de investigación. 1. Puntas para pipetas 2. 2 cajas de swinex 3. Filtros de 0.22 micras 4. Kit de extracción de ADN. 5. Reactivos 6. Solventes 7. Agua destilada 8. Primers 9. Cebos para las ratas y ratones 10. Placas para ELISA 11. Enriquecimiento para leptospira. Estos reactivos se utilizarán para el diagnóstico de leptospirosis, es necesario adquirir materiales de laboratorio, solventes y productos químicos para aplicar metodologías correctas y así poder llegar a un diagnóstico definitivo. $26, $180,000.00

10 Estancias cortas Equipo para experimentación 12. Otros Tres semanas en Texas State University con el Dr. Iván Castro Arellano. Microscopio de Campo Oscuro y contraste de fases. Dicha estancia servirá para la capacitación de técnicas moleculares y así poder montar dichas técnicas en esta Institución y así reforzar la vinculación entre la Universidad del extranjero. El Microscopio de Campo Oscuro y contraste de fases, el cual servirá para hacer el diagnóstico de leptospirosis y es necesario para mantener el cepario de Leptospira spp. y verificar el crecimiento de las bacterias. $30, $90, TOTAL $326,660.00