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1 VII Foro INIA. Lérida/Lleida, 16 de mayo, 2013 Adaptación al cambio climático en la producción frutícola de hueso y pepita Oferta Tecnológica / IVIA Laboratorio de Virología e Inmunología Departamento de Patología Vegetal Centro de Protección Vegetal y Biotecnología Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA). Moncada, Valencia Antonio OLMOS, Edson BERTOLINI, M. Teresa GORRIS, M. Carmen MARTÍNEZ, Alfonso HERMOSO de MENDOZA, Mariano CAMBRA

2 Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA). Centro de Protección Vegetal y Biotecnología Laboratorio de Virología e Inmunología Experiencia: -Desarrollo y validación de métodos y protocolos serológicos y moleculares para la detección y diagnóstico de patógenos de plantas. - Control de virus, viroides y fitoplasmas de especies leñosas mediante métodos convencionales (con base epidemiológica) y biotecnológicos (plantas transgénicas que expresan genes de anticuerpos).

3 CARACTERÍSTICAS DE LAS VIROSIS DE VEGETALES FRECUENTES (Fácil infección, tiempo exposición largo especialmente en plantas leñosas...) GRANDES POBLACIONES HOMOGÉNEAS DE PLANTAS CULTIVADAS (Inmóviles) INCURABLES (No sistema inmune) E IMPOSIBLE CONTROL QUÍMICO TRANSMISIBLES: vegetativamente (injerto, multiplic. vegetativa), semilla, polen, vectores... PREVENCIÓN / ERRADICACIÓN / SELECCIÓN SANITARIA

4 IVIA LABORATORIO DE BIOSEGURIDAD (nivel de contención P2) Centro de Protección Vegetal y Biotecnología

5 Laboratorio Nacional de Referencia del MAGRAMA para diagnóstico de virus, viroides y fitoplasmas de especies leñosas, patata, batata y fresa IVIA Invernadero de Bioseguridad (P2) Miembro de la Red Nacional RE-LAB de Laboratorios de Alerta Biológica de Presidencia de Gobierno coordinada por Instituto Carlos III de Salud.

6 OFERTA: 1) Producción de reactivos de diagnóstico y diseño y validación de protocolos y kits de detección y diagnóstico simples, robustos y precisos.

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9 Tissue print real-time PCR

10 Immobilized samples can be stored until use or mailed to a laboratory without biological risks.

11 Se recortan trozos de membrana conteniendo las muestras impresas o escachadas y se introducen en un tubo Eppendorf

12 Transferir 3 µl del extracto directament para la amplificación por PCR a tiempo real Añadir 100 μl de agua destilada u otro tampón

13 OEPP/EPPO oficial protocol for PPV diagnosis Host plant with symptoms or suspected Biological indexing Serological tests Molecular tests Screening tests Inoculation of woody indicator plants (GF 305 or Nemaguard peach seedlings, or Prunus tomentosa DASI-ELISA with 5B- IVIA universal monoclonal antibody or DAS-ELISA with 5B- IVIA or polyclonal antibodies IC-RT-PCR (using P1/P2 primers) or Co-PCR (using P10/P20/P1/P2 primers) and hybridisation with universal probe Typical symptoms Confirmation by serological or molecular screening tests No symptoms Serological and molecular screening tests IC-RT-PCR (using P1/P2 primers) or Co-PCR (using P10/P20/P1/P2 primers) and hybridisation with universal probe DASI-ELISA with 5B- IVIA universal monoclonal antibody or DAS-ELISA with 5B- IVIA or polyclonal antibodies Positive results in both tests Positive results by one of the confirmation tests HOST PPV INFECTED Bull. OEPP/EPPO Bull. (2004) 34, (

14 OFERTA: 2) Control de virosis y sus vectores con bases epidemiológicas y diseño de sistemas de producción de plantas libres de virus en viveros. Control biotecnológico de virosis mediante plantas transgénicas que expresan genes de anticuerpo.

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17 Muchas gracias por su atención

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