Inoculación n de fitopatógenos

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Lidia Soler Vera
hace 8 años
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1 Objetivos Inoculación n de fitopatógenos Conocer las principales técnicas que se usan para inocular hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenos. Curso: Diagnósticos en Fitopatología. Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc. 24 de setiembre de 2015 Inóculo Hongos: Bacterias: Virus: Nematodos: trozos de micelio esporas esclerotos unidades formadoras de colonias (UFC) partículas en macerado y/o buffer. larvas, huevos, quistes Calidad del inóculo Viable en activo crecimiento (micelio, bacterias), esporas capaces de germinar Potencial infectivo depende también de nutrientes en suspensión y en medio en el que se produce inóculo Homogéneo: siembra de hongo en centro de placa vs. suspensión de esporas Acostumbramiento a crecer en medio de cultivo: pérdida de patogenicidad (Ralstonia) pérdida de producción de esporas (Septoria, Cercospora) Cuantificación del inóculo Métodos: Hematocitómetro Turbidez Unidades formadoras de colonias Cuantificación del inóculo en hematocitómetro Rayado Neubauer: 2 porciones c/u con 9 cuadrados principales de 0,1 mm 3 divididos en 16 cuadrados menores de 0,05 mm 3 1

Cuantificación de inóculo Turbidez - bacterias Escala de McFarland: BaCl 2 + H 2 SO 4 Cuantificación de inóculo Recuento de colonias unidades formadoras de colonias (UFC) Densidad óptica: colorímetro

Mayoría de hongos que penetran por estomas o epidermis 24 hs. en condiciones adecuadas de humedad y 20-24ºC 1. Pulverización 2. Espolvoreo con talco 3. Rozar o colocar hojas esporuladas sobre sanas 4.

2 Cuantificación de inóculo Turbidez - bacterias Escala de McFarland: BaCl 2 + H 2 SO 4 Cuantificación de inóculo Recuento de colonias unidades formadoras de colonias (UFC) Densidad óptica: colorímetro o espectrofotómetro a mµ Métodos de inoculación Hongos y bacterias - Virus - Nematodos Al follaje, al tallo, a raíces, a órganos carnosos Inoculación al follaje Con o sin heridas, humedad. Mayoría de hongos que penetran por estomas o epidermis 24 hs. en condiciones adecuadas de humedad y 20-24ºC 1. Pulverización 2. Espolvoreo con talco 3. Rozar o colocar hojas esporuladas sobre sanas 4. Inmersión en suspensión de inóculo infiltración 5. Colocar trozo de micelio 6. Transmisión mecánica (o por jugos) de virus 7. Transmisión por vectores 8. Transmisión por propagación vegetativa Métodos de inoculación al follaje 1. pulverización: 0,5% Tween o 0,1% jabón cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen mejor 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar adhiere esporas y mantiene humedad aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden infectividad. Métodos de inoculación al follaje 2. espolvoreo con talco royas: humedecer hojas 1º (aspersión) oidios seco 3. rozar o colocar hojas esporuladas sobre sanas (previamente rociadas) inmersión en suspensión de inóculo 2

3 Métodos de inoculación al follaje 4. infiltración Transmisión mecánica de virus 1. Macerado de planta enferma 2. Abrasivo (carborundum) 3. Planta sana 5. colocar trozo de micelio = Transmisión por jugos Transmisión por pulgones Transmisión por injerto Inoculación al suelo o raíces efecto del suelo: microflora conducente o supresivo reducir variación sin suelo humedad muy alta para Pythium spp., Phytophtora spp. + síntomas a > temp. hasta 28ºC en gral. Inoculación al suelo o raíces infestación de suelo hidroponia cut and dip inoculación sin herir raíces (tubos en suelo) ost/continuing-compost-research.shtml 3

Inoculación al suelo o raíces infestación de suelo

(tubos en suelo) Inoculación al tallo o rama

inmediatamente cubrir para evitar deshidratación.

Patógenos vasculares: axila - pinchar a través de gota

inyección al tallo evita stress de transplante

Corte Un ejemplo de prueba de patogenicidad en hoja A.

Heridas D. Inóculo en contacto con hoja E.

http://www.pnas.org/content/104/12/4979/f3.expansion.

Pseudomonas fuscovaginae in rice Síntomas de P.

4 Inoculación al suelo o raíces infestación de suelo hidroponia cut and dip inoculación sin herir raíces (tubos en suelo) Inoculación al tallo o rama Generalmente con heridas Corte longitudinal inocular inmediatamente cubrir para evitar deshidratación. (gel, algodón mojado) Inoculación al tallo o rama Patógenos vasculares: axila - pinchar a través de gota o con aguja o escarbadiente contaminado. inyección al tallo evita stress de transplante Inoculación en órganos carnosos Pinchazo Sacabocado Corte Un ejemplo de prueba de patogenicidad en hoja A. Patógeno creciendo B. Inóculo en tapa de criovial C. Heridas D. Inóculo en contacto con hoja E. Daño por heridas (resistente) F. Necrosis (susceptible) G. Hoja 7 ddi. Gilbert G S, and Webb C O PNAS 2007;104: Epidemiology, pathogenicity and diversity of Pseudomonas fuscovaginae in rice Síntomas de P. fuscovaginae Técnica de inoculación con pinchazo (Pin-prick) /research/pseudomonas-fuscovaginae.html 4

Planta u órgano a inocular Condiciones para la infección - De la planta o del órgano - Ambientales Considerar: Si es huésped Órgano susceptible Edad Por qué está tan sana? Si yo la inoculé!

5 Planta u órgano a inocular Condiciones para la infección - De la planta o del órgano - Ambientales Considerar: Si es huésped Órgano susceptible Edad Por qué está tan sana? Si yo la inoculé!!! Condiciones ambientales Antes de inocular: Patógenos que penetran por estomas HR Virus oscuridad Post-inoculación: Alta humedad para bacterias y hongos Virus enjuague después de inoculación mecánica BIBLIOGRAFÍA DHINGRA, O.D.; SINCLAIR, J.B Basic plant pathology methods. FRENCH, E.R. y HERBERT, T Métodos de investigación fitopatológica. KIRÁLY, Z Methods in plants pathology with special reference to breeding for disease resistance. LELLIOTT, R.A.; STEAD, D.E Methods for the diagnosis of bacterial diseases of plants. THE COMMONWEALTH MYCOLOGICAL INSTITUTE Plant pathologist's pocketbook. 5

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