PRÁCTICO Nº7 Montevideo, 2 de octubre de GUÍA DE CLASE PRÁCTICA BACTERIAS FITOPATÓGENAS

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1 PRÁCTICO Nº7 Montevideo, 2 de octubre de GUÍA DE CLASE PRÁCTICA BACTERIAS FITOPATÓGENAS Objetivos: Reconocer síntomas de enfermedades producidas por bacterias, familiarizarse con algunas formas de detección y diagnóstico. MESA 1: SÍNTOMAS Y SIGNOS Observe las muestras frescas y las fotos. Describa por lo menos dos de los síntomas característicos de las enfermedades producidas por bacterias y observe si hay presencia de signo (zooglea). Puede utilizar el glosario de síntomas. Síntoma 1: Nombre del síntoma:... Síntoma 2:... Nombre del síntoma:... Otros síntomas de interés:... Pregunta: Cuáles son los síntomas más comunes de las enfermedades causadas por bacterias?... 1

2 MESA 2: PRUEBA RÁPIDA PARA DETECCIÓN DE BACTERIAS EN ÓRGANOS VEGETALES Materiales: Imágenes de microcorrida, test de flujo y cámara húmeda. 1. Observe las imágenes y responda: a. Qué órgano del vegetal se utilizó en cada uno de los procesos observados? Microcorrida... Test de flujo... Cámara húmeda... b. Puede ser utilizado el test de flujo para confirmar la presencia de bacterias en hojas? y en el fruto? AISLAMIENTO MESA 3: TÉCNICAS PARA IDENTIFICACIÓN Materiales: Video con la metodología de aislamiento de bacterias, placas de Petri con colonias de bacterias en las diferentes etapas del aislamiento. a. Identifique las placas que corresponden al aislamiento y al cultivo puro. b. Por qué se hacen estriados para el aislamiento de una bacteria? HIPERSENSIBILIDAD EN PLANTA NO HUÉSPED Materiales: Lámina con la secuencia de la inoculación de plantas de tabaco y de plantas de tabaco inoculadas con diferentes bacterias. Cuál es el objetivo de esta prueba? TEST DE GRAM Materiales: Láminas con resultados de la tinción de Gram, foto con resultados del test de Gram indirecto, Placas de Petri con colonias de bacterias, KOH 3%, ansa, portaobjetos. Realice el test de Gram indirecto utilizando KOH al 3%, vea la diferencia entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas. 2

3 TEST DE OXIDO / FERMENTACIÓN (O/F) O DE HUGH & LEIFSON Materiales: Lámina con la secuencia de la realización del test de O/F, gradilla con tubos en los que observa la reacción de distintas bacterias en esta test. Observe los tubos en los que se realizó el test de Oxido/Fermentación. Tubo 1 = Testigo (medio sin inocular) Tubo 2 = Bacteria A Tubo 3 = Bacteria B a. Qué puede concluir de cada bacteria? b. De acuerdo a la "Clave para la identificación de algunos Géneros de bacterias fitopatógenas" (Anexo) Cuál es la utilidad de este test? FLUORESCENCIA DE COLONIAS EN MEDIO B DE KING Materiales: Colonias de bacterias en placas de Petri con medio B de King y foto con resultado de prueba de fluorescencia. Observe la fluorescencia de las bacterias en las distintas placas de Petri. Qué se necesita para observar la fluorescencia de una bacteria? COLORACIÓN DE COLONIAS EN MEDIO YDC Materiales: Fotos con bacterias sembradas en medio YDC, colonias de bacterias en placas de Petri con medio YDC. Observe y describa la coloración de las bacterias en las distintas placas de Petri. MESA 4: METODOLOGÍA DE DIAGNOSTICO En la clínica de diagnóstico de la Unidad de Fitopatología se recibieron hojas y frutos de zapallo con síntomas de una enfermedad cuyo agente causal se sospecha que es una bacteria. Para realizar el diagnóstico se debe seguir una secuencia de pasos: 1. Observación de la muestra y análisis de información complementaria 2. Revisión bibliográfica 3. Procesamiento de la muestra en laboratorio a. Aislamiento b. Identificación a nivel de género 4. Conclusiones 3

4 PASO 1: Observación de la muestra e información complementaria Materiales: Fotografías de los síntomas de la enfermedad y formulario que completó el técnico al ingresar la muestra a la clínica de diagnóstico. 1. Observe los síntomas, lea el formulario con los datos brindados por el técnico y responda a. Qué características de la sintomatología, información de campo y climática le hacen pensar que el agente causal de la enfermedad es una bacteria? PASO 2: Revisión bibliográfica Utilizando la bibliografía disponible, realice un diagnóstico presuntivo de la enfermedad. PASO 3: Procesamiento de la muestra en laboratorio Luego de realizados los pasos 1 y 2, se realizó un procedimiento para poder aislar la bacteria desde el tejido vegetal enfermo. Se obtuvieron dos bacterias en cultivo puro: una de color amarillo y otra de color crema. Solamente la bacteria de color amarillo dio positivo en la prueba de hipersensibilidad en hoja de tabaco. Qué concluye de esta prueba? Con el cultivo puro de la bacteria amarilla, se realizaron tres pruebas bioquímicas clásicas para identificación de bacterias fitopatógenas. Prueba Bacteria A Test de Gram Gram - Coloración de la colonia en medio YDC Amarilla Test de Oxido/fermentación Oxidativa (no crece en anaerobiosis) Utilizando la "Clave para la identificación de algunos Géneros de bacterias fitopatógenas" (Anexo), responda: A qué género pertenece ésta bacteria? 4

5 PASO 4: Conclusiones del diagnóstico a. En base a las pruebas realizadas en el laboratorio, qué puede concluir sobre el agente causal? b. Los técnicos que realizaron el diagnóstico llegaron a determinar la especie y el patovar del organismo causal. En qué se basaron? MESA 5: POSTULADOS DE KOCH Materiales: Cabin con diapositivas, separata del artículo: PÉREZ FAGGIANI E.; SILVERA PEREZ, E., GEPP, V. "Pseudomonas viridiflava (Burkholder) Dowson: agente causal de manchas necróticas en hojas de cebolla y ajo (Allium spp.) en Uruguay". En el año 1998 en Uruguay fueron observados síntomas similares a los producidos por Pseudomonas viridiflava en plantas de ajo y de cebolla dulce. No se encontraron antecedentes de esta enfermedad en aliáceas en Uruguay y los técnicos responsables del diagnóstico debieron realizar los Postulados de Koch antes de reportar la enfermedad en el país. 1. Qué pasos habrán seguido los investigadores para cumplir con los postulados de Koch? El hecho de cumplir con los postulados de Koch, qué aporta al conocimiento de la enfermedad?... 5

6 MESA 6: CICLO DE LA ENFERMEDAD 1. Elabore el ciclo de la sarna común de la papa con la información proporcionada. 2. Observe las láminas con distintos ciclos de enfermedades y conteste las siguientes preguntas Cuál es la fuente de inóculo y la forma de dispersión de la bacteria en cada uno de los casos? Ciclo 1... Ciclo 2... Ciclo 3... Qué estrategia de sobrevivencia utilizan las bacterias en cada uno de los casos? 6

7 Anexo: Clave para la identificación de algunos Géneros de bacterias fitopatógenas Erwinia Agrobacterium Pseudomonas no fluorescentes 7