Introducción Objetivo Procedimiento Trabajo Práctico Nº 3 TRANSFERENCIAS ASÉPTICAS Resultados Observaciones Bibliografía INTRODUCCIÓN La inoculación de medios de cultivo y la manipulación de cultivos microbianos en el laboratorio de microbiología, son procedimientos fundamentales e importantes que deben realizarse tomando una serie de precauciones para evitar la contaminación de la preparación con la que estamos trabajando y a la vez para evitar la contaminación del ambiente y del operador. Esta serie de precauciones se conoce como técnica aséptica; entre las principales podemos citar: Trabajar siempre cerca del mechero. Pasar la punta de los tubos que contienen el cultivo a través de la llama del mechero, a este procedimiento se le conoce como flameado. Esterilizar el filamento o el asa colocándola en la llama hasta que esté al rojo vivo.
OBJETIVO Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de: Ejecutar las técnicas básicas para la manipulación de cultivos microbianos en forma aséptica. PROCEDIMIENTO TRANSFERENCIAS DE MEDIO LÍQUIDO A MEDIO LÍQUIDO 1. Marcar el tubo de caldo nutritivo estéril con su número equipo y fecha. 2. Agitar el cultivo para resuspender la suspensión microbiana. Evitar mojar la tapa del tubo con el cultivo. 3. Esterilizar el asa a la llama. 3.2
4. Destapar el tubo que contiene el cultivo y flamear su punta. No dejar que la 5. Insertar el asa estéril en el cultivo y tomar un asa llena para transferirla al otro tubo que contiene el medio de cultivo estéril. 6. Flamear nuevamente la boca del tubo que contiene el cultivo, tapar y colocar 7. Destapar el tubo que contiene el caldo nutritivo estéril y flamear su punta. No dejar que la 3.3
8. Introducir el asa que contiene el cultivo en el tubo de caldo nutritivo estéril. Antes de sacar el asa del tubo tocar las paredes del mismo para eliminar cualquier exceso de caldo. 9. Flamear nuevamente la punta del tubo y tapar. 10. Esterilizar nuevamente el asa. 11. Colocar los tubos en su gradilla e incubarlos a 32,5 +/- 2,5 C por 24 horas. 3.4
TRANSFERENCIAS DE MEDIO LÍQUIDO A MEDIO SÓLIDO 1. Marcar el tubo de agar nutritivo estéril con su número de equipo y fecha. 2. Agitar el cultivo para resupender la suspensión microbiana. Evitar mojar la tapa del tubo con el cultivo. 3. Esterilizar el asa a la llama. 4. Destapar el tubo que contiene el cultivo y flamear su punta. No dejar que la 5. Insertar el asa estéril en el cultivo y tomar un asa llena (la suspensión forma una película en el asa) para transferirla al otro tubo que contiene el medio de cultivo estéril. 6. Flamear nuevamente la boca del tubo que contiene el cultivo, tapar y colocar 7. Destapar el tubo que contiene agar nutritivo estéril y flamear su punta. No dejar que la 8. Para inocular el medio sólido estéril introducir el asa que contiene el cultivo en el tubo de agar nutritivo estéril hasta el fondo del tubo donde comienza el bisel y diseminar el inóculo sobre la superficie del mismo moviendo de lado a lado y hacia arriba hasta llegar a la punta del bisel. 9. Flamear nuevamente la punta del tubo y tapar. 10. Esterilizar nuevamente el asa. 11. Colocar los tubos en su gradilla e incubarlos a 32,5 +/- 2,5 C por 24 horas. TRANSFERENCIAS DE MEDIO SÓLIDO A MEDIO SÓLIDO 1. Marcar el tubo de agar nutritivo estéril con su número de equipo y fecha. 2. Esterilizar el filamento a la llama. 3. Destapar el tubo que contiene el cultivo y flamear su punta. No dejar que la 4. Introducir el filamento estéril en el tubo, tocar el cultivo con la punta del filamento para tomar una porción y transferir a otro tubo que contenga el medio de cultivo estéril. 3.5
5. Flamear nuevamente la boca del tubo que contiene el cultivo, tapar y colocar 6. Destapar el tubo que contiene el agar nutritivo estéril y flamear su punta. No dejar que la 7. Para inocular el medio sólido estéril introducir el filamento que contiene el cultivo en el tubo de agar nutritivo estéril hasta el fondo del tubo donde comienza el bisel y diseminar el inóculo sobre la superficie del mismo moviendo de lado a lado y hacia arriba hasta llegar a la punta del bisel. 8. Flamear nuevamente la punta del tubo y tapar. 9. Esterilizar nuevamente el filamento. 10. Colocar los tubos en su gradilla e incubarlos a 32,5 +/- 2,5 C por 24 horas. TRANSFERENCIAS DE MEDIO SÓLIDO A MEDIO LÍQUIDO 1. Marcar el tubo de caldo nutritivo estéril con su número equipo y fecha. 2. Esterilizar el asa a la llama. 3. Destapar el tubo que contiene el cultivo y flamear su punta. No dejar que la 4. Insertar el asa estéril en el cultivo y tomar un asa llena (la suspensión forma una película en el asa) para transferirla al otro tubo que contiene el medio de cultivo estéril. 5. Flamear nuevamente la boca del tubo que contiene el cultivo, tapar y colocar 6. Destapar el tubo que contiene el caldo nutritivo estéril y flamear su punta. No dejar que la 7. Para inocular el medio líquido estéril agite el asa dentro del tubo de caldo nutritivo estéril. Antes de sacar el asa del tubo tocar las paredes del mismo para eliminar cualquier exceso de caldo. 8. Flamear nuevamente la punta del tubo y tapar. 9. Esterilizar nuevamente el asa. 10. Colocar los tubos en su gradilla e incubarlos a 32,5 +/- 2,5 C por 24 horas. 3.6
RESULTADOS Luego de la incubación, observar el crecimiento en cada uno de los tubos inoculados. Anotar lo observado. OBSERVACIONES BIBLIOGRAFÍA Benson H. J. 1979. Microbiological Application. A Laboratory Manual in General Microbiology. Third edition. Wm. C. Brown Company Publishers. Dubuque, Iowa Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales. Segunda edición. Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela. Seeley, H.W.I, Jr and P.J. Van Demark 1972. Microbes in Action. W.H. Freeman and Company. Prof. Magaly Pedrique de Aulacio Prof. Sofía Gutiérrez de Gamboa Noviembre 2001 Revisión 2008 3.7