Nodo Interactivo Ciencia y conocimiento al alcance de todos! juanherrera@nodointeractivo.com www.nodointeractivo.com Validación de métodos analíticos fisicoquímicos según los requerimientos definidos en la guía ICH/FDA JUAN PABLO HERRERA SIERRA Químico Farmacéutico - Universidad de Antioquia Especialista en Desarrollo de Aplicaciones Móviles
Escenario El departamento de validaciones de un laboratorio farmacéutico, según el cronograma de implementación definido en el plan maestro de validación, debe validar de forma prospectiva el método analítico fisicoquímico del producto piloto XYZ jarabe por 100 ml, con el propósito de iniciar los estudios de estabilidad acelerada y natural.
Mantenimiento Metrología Preventivo Correctivo Calibración Verificación Plan Maestro de Validación Calificaciones [DQ, IQ, OQ, PQ] Limpieza y Desinfección Métodos Analíticos Procesos de Fabricación Sistemas Computarizados Sistemas de Apoyo Crítico Monitoreos
Protocolo calificación / validación Criterios de Aceptación Metodología Experimental Estimación Estadística
Ensayos Tipo de Análisis Identificación Impurezas Cuantificación *C *I Linealidad N/A SI N/A SI Especificidad SI SI SI SI Precisión N/A SI N/A SI Precisión intermedia N/A SI N/A SI Exactitud N/A SI N/A SI Estabilidad de la muestra SI SI SI SI Límite de detección N/A N/A SI N/A Límite de cuantificación N/A SI N/A N/A Robustez: Opcional. *C: Cuantificación. *I: Identificación.
Fórmula Maestra Componente Analito XYZ Excipiente 1 Excipiente 2 Excipiente 3 Agua c.s.p Cantidad 100 mg 25 mg 30 mg 30 mg 100 ml
Linealidad Criterios de aceptación: Coeficiente de variación de los factores de respuesta (f) 5%. Coeficiente de correlación (r) 0.990. Coeficiente de determinación ajustado con g.l (r 2 ) 98.01%. Prueba de hipótesis para la pendiente (b) 0. Prueba de hipótesis para el intercepto (a) = 0.
Linealidad Metodología experimental: 80%-90%-100%-110%-120% (Triplicado). Concentración del 100%: Pesar exactamente cerca de 20.0 mg de Analito XYZ materia prima y transferir a un balón volumétrico de 100.0 ml, adicionar 50 ml de solución diluente y 20 ml de SM, agitar hasta completa disolución, ajustar volumen con solución diluente, homogenizar y filtrar por membrana de 0.45 µm.
Linealidad Estimación estadística: Relaciones de proporción atípicas. Modelos de calibración. Pruebas de hipótesis.
Especificidad Criterios de aceptación: No se presenta interferencia por componentes de la matriz, productos de degradación o compuestos relacionados para cinéticas de primer orden con relación al analito (degradaciones mayores al 5% y menores al 30%).
Especificidad Metodología experimental: 1 Matriz, 5 Matriz, 5 Analito y 5 Analito Matriz Evaluar cada muestra durante cuatro veces el tiempo de retención obtenido para el Analito XYZ, para interferencia de la matriz, degradaciones con hidrólisis ácida, hidrólisis básica, termólisis, fotólisis y agentes oxidantes, para matriz, el analito y la mezcla de matriz con analito.
Especificidad Estimación estadística: Gráficos de comportamiento.
Precisión Criterios de aceptación: Coeficiente de variación 2%. Metodología experimental: 100% (Seis réplicas). Concentración del 100%: Pesar exactamente cerca de 20.0 mg de Analito XYZ materia prima y transferir a un balón volumétrico de 100.0 ml, adicionar 50 ml de solución diluente y 20 ml de SM, agitar hasta completa disolución, ajustar volumen con solución diluente, homogenizar y filtrar por membrana de 0.45 µm.
Precisión Estimación estadística: Pruebas de normalidad. Análisis descriptivo. Datos atípicos.
Precisión Intermedia Criterios de aceptación: No existe diferencia estadística significativa entre analistas con relación a los estimados obtenidos entre las muestras evaluadas en el estudio R&R.
Precisión Intermedia Metodología experimental: Preparar tres concentraciones con tres réplicas cada una (50% - 100% - 150%). Concentración del 100%: Pesar exactamente cerca de 20.0 mg de Analito XYZ materia prima y transferir a un balón volumétrico de 100.0 ml, adicionar 50 ml de solución diluente y 20 ml de SM, agitar hasta completa disolución, ajustar volumen con solución diluente, homogenizar y filtrar por membrana de 0.45 µm.
Precisión Intermedia Estimación estadística: Estudio R&R por el método de ANOVA.
Exactitud Criterios de aceptación: El porcentaje de recuperación promedio para las tres concentraciones debe ser de 100% ± 2 %, para un factor de protección del 95%, equivalente a un k=1.96. El estadístico t-student calculado experimentalmente debe ser menor que el t- student teórico, para n-1 grados de libertad.
Exactitud Metodología experimental: Preparar tres concentraciones con tres réplicas cada una (80% - 100% - 120%). Concentración del 100%: Pesar exactamente cerca de 20.0 mg de Analito XYZ materia prima y transferir a un balón volumétrico de 100.0 ml, adicionar 50 ml de solución diluente y 20 ml de SM, agitar hasta completa disolución, ajustar volumen con solución diluente, homogenizar y filtrar por membrana de 0.45 µm.
Exactitud Estimación estadística: Pruebas de normalidad y bondad de ajuste. Límites de tolerancia e índices de capacidad. Pruebas de hipótesis.
Estabilidad de la muestra Criterios de aceptación: Al tiempo t la muestra es apta para análisis si la respuesta obtenida no ha variado en más del 2% frente a la respuesta inicial.
Estabilidad de la muestra Metodología experimental: Pesar exactamente cerca de 20.0 mg de Analito XYZ y transferir a un balón volumétrico de 100.0 ml, adicionar 50 ml de solución diluente y 20 ml de SM, agitar hasta completa disolución, ajustar volumen con solución diluente, homogenizar y filtrar por membrana de 0.45 µm. Evaluar la misma muestra al inicio, a la hora, tres horas, cinco horas, siete horas, nueve horas, once horas, trece horas, quince horas, diecisiete horas, diecinueve horas, veintiuna horas, veintitrés horas y veinticinco horas.
Estabilidad de la muestra Estimación estadística: Modelos de correlación y predicción.
Límite de detección y cuantificación Criterios de aceptación: El método analítico es sensible, si el valor establecido para la respuesta de especificación del analito es mayor al límite de cuantificación.
Límite de detección y cuantificación Metodología experimental: Para la valoración de analitos principales (Respuestas altas) estimar la respuesta promedio de 10 lecturas de blanco (Ruido, solución diluente) y multiplicar dicho valor por 3 para LD y por 10 para LC. Para valoración de compuestos relacionados y/o impurezas realizar una curva de calibración para cinco concentraciones con tres réplicas cada una (0.08% - 0.09% - 0.1% - 0.11% - 0.12%) de la concentración especificada para dicho compuesto y/o impureza
Límite de detección y cuantificación Metodología experimental: Preparar una solución de estándar de compuesto relacionado (SCR) pesando exactamente cerca de 20.0 mg de Analito XYZ estándar de compuesto relacionado y transferir a un balón volumétrico de 100.0 ml, adicionar 50 ml de solución diluente y 20 ml de SM, agitar hasta completa disolución, ajustar volumen con solución diluente, homogenizar y filtrar por membrana de 0.45 µm.
Límite de detección y cuantificación Metodología experimental: Concentración del 0.1%: Medir una alícuota de 10 ml de SCR y transferir a un balón volumétrico de 100.0 ml, ajustar volumen con solución diluente, homogenizar y transferir una alícuota de 1.0 ml a un balón volumétrico de 100.0 ml, homogenizar y filtrar por membrana de 0.45 µm.
Límite de detección y cuantificación Estimación estadística: Calibración de modelos de relación.
Robustez Criterios de aceptación: Si el valor absoluto de la diferencia entre el resultado en el nivel alto y el resultado en el nivel bajo para cada factor experimental estudiado, es mayor que el producto de la desviación estándar obtenida en la prueba de precisión por la raíz cuadrada de dos, se dice que el parámetro tiene influencia significativa sobre el resultado obtenido en la variable respuesta.
Robustez Metodología experimental: Realizar un diseño experimental Plackett and Burman sin aleatorizar para la variable respuesta contenido % Ensayo Factores experimentales Columna Fase Móvil Flujo Temperatura Detección Buffer: MeOH ml/min C nm 1 RP8 30:70 0.8 40 235 2 RP18 30:70 0.8 34 215 3 RP8 40:60 0.8 34 235 4 RP18 40:60 0.8 40 215 5 RP8 30:70 1.2 40 215 6 RP18 30:70 1.2 34 235 7 RP8 40:60 1.2 34 215 8 RP18 40.60 1.2 40 235
Robustez Estimación estadística: Diseño de experimentos.