MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio APENDICE C PREPARACION DE SOLUCIONES Y REACTIVOS
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- María Teresa Moreno Benítez
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1 APENDICE C PREPARACION DE SOLUCIONES Y REACTIVOS 200
2 1. AGUA DE DILUCION CON SOLUCION BUFFER. Solución I Disolver 34 g de fosfato monobásico de potasio (KH 2 PO 4 ) en 500 ml de agua destilada. Ajustar el ph a 7.2 con NaOH 1N. Aforar a un litro con agua destilada. Solución II Disolver 50 g de sulfato de magnesio (MgSO 4.7H 2 O) en 1000 ml de agua destilada. En un matraz volumétrico añadir 1.25 ml de la solución I y 5 ml de la II. Aforar a un litro con agua destilada. 2. VOGES PROSKAUER. A. Solución de alfa naftol α-naftol g Alcohol etílico (95%)... cbp 100 ml Disolver el alfa naftol en el alcohol. B. KOH Hidróxido de potasio químicamente puro g Creatina g Agua destilada... cbp 100 ml 201
3 Agregar el hidróxido de potasio a 75 ml de agua destilada, agitando y enfriando constantemente. Cuando la solución está más ó menos a temperatura ambiente (25 C) agregar la creatina y suficiente agua destilada para obtener un volumen final de 100 ml. 3. REACTIVO DE ROJO DE METILO. Rojo de metilo g Alcohol etílico (95%) ml Agua destilada ml Disolver el colorante en el alcohol. Agregar el agua destilada. Filtrar la preparación. 4. REACTIVO DE KOVAC. Para-dimetil-amino-Benzaldehído... 1 g Alcohol amílico ó butílico ml Acido clorhídrico químicamente puro ml Disolver el para-dimetil-amino-benzaldehído en alcohol butílico ó amílico. Añadir el ácido clorhídrico. Conservar en un frasco ámbar con tapón de vidrio, en sitio oscuro. También se sugiere que esta solución se refrigere. El reactivo debe tener una coloración amarillo claro ó café claro. 5. MEZCLA CROMICA. Dicromato de potasio g Agua destilada ml 202
4 Acido sulfúrico ml Disolver el dicromato en agua. Calentar la solución ligeramente y dejar enfriar. Agregar el ácido poco a poco, mezclando con cuidado. 6. SOLUCION SALINA DE PEPTONA. Peptona... 1 g Cloruro de Sodio g Agua destilada... cbp 1000 ml Disolver los componentes hirviéndolos en aproximadamente 950 ml de agua. Ajustar el ph con solución de Hidróxido de Sodio 1 mol/l o Acido Clorhídrico 1 mol/l de modo que después de la esterilización sea de 7.0 ± 0.1. Aforar a 1000 ml con agua destilada. Distribuir en volúmenes convenientes. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presión (121 C). 7. SOLUCION SALINA. (Isotónica) Cloruro de Sodio g Agua destilada ml Disolver el reactivo en el agua destilada. 8. PIROGALOL ALCALINO. Usado para conseguir condiciones de Anaerobiosis. Pirogalol... 3 g Tierra de infusorios g Carbonato de Potasio... 3 g 203
5 Mezclar el pirogalol y la tierra de infusorios y adicionar el carbonato de potasio en un mortero. Mezclar al momento de usarse, después de 5 horas pierde actividad. Para su uso se pone una pequeña porción en un saquito de papel filtro. 9. SULFATO DE ZINC, GRAVEDAD ESPECIFICA DE 1.3. Sulfato de zinc g Agua Destilada ml Disolver 800 g de Sulfato de Zinc en 1000 ml de agua destilada y agitar en la parrilla eléctrica hasta homogeneizar. Medir la densidad con un hidrómetro. Para alcanzar la densidad deseada, agregar reactivo ó agua según el caso. 10. REACTIVO PARA OXIDASA. Clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina g Agua destilada... cbp 1000 ml Disolver el reactivo en el agua destilada. Este reactivo no es estable y por consiguiente debe prepararse para utilizarlo en pequeñas cantidades cada vez que se necesite. 11. REACTIVO PARA OXIDASA. (Alternativa). N, N-Clorhidrato de dimetil-p-fenilendiamina g Agua destilada... cbp 100 ml ph =
6 Disolver el reactivo en el agua destilada. Este reactivo deber ser preparado al momento de usarse. 12. REACTIVO PARA LA PRUEBA DE CITOCROMO-OXIDASA. Solución al 1% de Oxalato de p-aminodimetilanilina. 13. ONPG. Prueba de b -Galactosidasa. O-nitrofenil β--d-galactopiranósido g (0.0003M) Agua destilada ml Disolver el reactivo en el agua destilada. 14. REACTIVO PARA LA PRUEBA DE LA CATALASA. Solución acuosa de Peróxido de Hidrógeno de 10 volúmenes %. 15. ACIDO TRICLOROACETICO. Reactivo para la prueba de la hidrólisis de gelatina. Acido tricloroacético químicamente puro... Agua destilada... 5 g 100 ml Disolver el ácido, agitando constantemente. También existen preparaciones comerciales de ácido tricloroacético al 5%. 205
7 16. SOLUCION DE (á) NAFTILAMINA. Reactivo para la reducción del nitrato. á- naftilamina... 5 g Acido sulfúrico concentrado y Q. P... 8 ml Agua destilada ml Agregar el ácido al agua destilada y mezclar perfectamente; luego, introducir el á-naftilamina y agitar hasta que el ingrediente se disuelva. 17. ACIDO SULFANILICO. Reactivo para la prueba del nitrito. Acido sulfanílico químicamente puro...8 g Acido sulfúrico químicamente puro...48 ml Agua destilada...cbp 1000 ml Agregar el ácido sulfúrico en 500 ml de agua destilada agitando y enfriando constantemente. A continuación, añadir el ácido sulfanílico, agitando y enfriando también de un modo constante. Por último, agregar agua destilada hasta obtener un volumen final de 1000 ml. 18. PRUEBA PARA LA REDUCCION DE NITRATO. (general). Disolución A Acido sulfanílico... 8 g Acido acético 5N ml Disolución B Alfa-naftilamina... Acido acético 5N... 5 g 1000 ml Fíltrese a través de algodón absorbente lavado. 206
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