Ensayo de anfetaminas DRI
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- Andrea Rojas Padilla
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1 Ensayo de anfetaminas Para uso diagnóstico in vitro (3 x 18 ml) 0017 (100 ml Kit) 0018 (500 ml Kit) Indicaciones El ensayo de anfetaminas está cebido para la determinación cualitativa y semicuantitativa de anfetamina y metanfetamina en la orina humana. El ensayo tiene niveles s de 500 y. El ensayo ofrece un procedimiento analítico de detección sencillo y rápido para la detección de anfetamina y metanfetamina en la orina en analizadores clínicos automáticos. El ensayo se calibra metanfetamina. Este ensayo únicamente ofrece un resultado analítico cualitativo preliminar. Es necesario utilizar un método químico alternativo más específico el fin de obtener un resultado analítico firmado. El método de firmación preferente es la cromatografía de gases/ espectrometría de masas (). 1,2 Se han de aplicar las sideraciones clínicas y el buen juicio profesional ante cualquier resultado de una prueba de drogas duras, en particular cuando los resultados preliminares resulten positivos. Resumen y explicación de la prueba Las anfetaminas son derivados sintéticos de efedrina. Las anfetaminas más comunes son d-anfetamina, d-metanfetamina y d,l-anfetamina. Estas sustancias actúan como estimulantes del sistema nervioso central. La anfetamina es la amina más simpaticomimética. 3,4 Tras su ingestión, la anfetamina se desactiva rápidamente en el hígado o se excreta sin cambios por la orina. Otros derivados de efedrina, como la metanfetamina, pueden ser metabolizados y excretados en la orina en forma de anfetamina. 5 El ensayo de anfetaminas es un inmunoensayo enzimático homogéneo líquido listo para usar. 6 El ensayo utiliza anticuerpos específicos capaces de detectar la presencia de anfetamina y/o metanfetamina en la orina, una mínima reactividad cruzada diversos compuestos de venta sin receta estructuralmente no relacionados. El ensayo se basa en la competencia entre una droga marcada la enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) y la droga presente en la muestra de orina por un número determinado de sitios de unión del anticuerpo específico. En ausencia de droga libre en la muestra, el anticuerpo específico se une a la droga marcada G6PDH, lo que provoca un descenso de la actividad de la enzima. En presencia de la droga libre, esta ocupa los sitios de unión del anticuerpo, de modo que la droga marcada G6PDH puede interaccionar el sustrato, lo que se traduce en la actividad enzimática. Este fenómeno da lugar a una relación directa entre la centración de la droga en la orina y la actividad enzimática. La actividad enzimática se determina por espectrofotometría a 340 nm, midiendo su capacidad de vertir nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) en NADH. Precauciones y advertencias 1. Esta prueba está diseñada exclusivamente para uso diagnóstico in vitro. Los reactivos son nocivos por ingestión. 2. Los reactivos utilizados en los componentes del ensayo tienen 0,09 % azida de sodio, que puede reaccionar el plomo o el cobre de las tuberías para formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Al verter estos reactivos por el desagüe, hágalo siempre grandes volúmenes de agua para evitar la acumulación de azidas. 3. No utilice los reactivos después de su fecha de caducidad. Reactivos Reactivo de anticuerpo/sustrato. Contiene anticuerpos monoclonales anti-anfetaminas, glucosa-6-fosfato (G6P) y nicotinamida adenina nucleótido (NAD) en tampón Tris azida de sodio como servante. Reactivo enzimático jugado. Contiene anfetaminas marcadas glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) en tampón Tris azida de sodio como servante. Preparación y almacenamiento de los reactivos Los reactivos están listos para su uso. No es necesario preparar los reactivos. Si se servan a 2 8 C, todos los componentes del ensayo son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Materiales adicionales necesarios (se venden por separado): Descripción del kit 1664 Calibrador negativo, 10 ml 1388 Calibrador negativo, 25 ml 1588 Calibrador multidroga 1, 10 ml 1589 Calibrador multidroga 1, 25 ml 1591 Calibrador multidroga 2, 10 ml 1592 Calibrador multidroga 2, 25 ml 1594 Calibrador multidroga 3, 10 ml 1595 Calibrador multidroga 3, 25 ml 1597 Calibrador multidroga 4, 10 ml 1598 Calibrador multidroga 4, 25 ml DOAT-2 MAS DOA Total Nivel 2, 6 x 18 ml DOAT-3 MAS DOA Total Nivel 3, 6 x 18 ml DOAT-4 MAS DOA Total Nivel 4, 6 x 18 ml DOAT-5 MAS DOA Total Nivel 5, 6 x 18 ml Recogida y preparación de las muestras Recoja las muestras de orina en recipientes de vidrio o plástico. Se recomienda analizar muestras de orina recién recogidas. Las muestras dentro de un intervalo de ph de 3 a 11 resultan adecuadas para este ensayo. The Clinical and Laboratory Standards Institute Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory: Approved Guideline (Directrices aprobadas del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio para pruebas de drogas y toxicología) recomienda que, antes de su análisis, las muestras de orina se serven entre 2 y 8 C como máximo durante cinco días hábiles. Si se desea un almacenamiento más prolongado antes de su análisis, o en el caso de retención de la muestra después del análisis, las muestras de orina se pueden servar a una temperatura de -20 C o inferior. 9 Los laboratorios que sigan las directrices obligatorias de la SAMHSA deben sultar los requisitos de «Short-Term Refrigerated Storage» (Almacenamiento refrigerado a corto plazo) y «Long-Term Storage» (Almacenamiento a largo plazo) de la SAMHSA. 2 Desgele y mezcle las muestras geladas antes del análisis. Se ha de tratar por todos los medios de mantener las muestras pipeteadas exentas de cualquier residuo macroscópico, y se recomienda centrifugar las muestras muy turbias antes del análisis. La adulteración de la muestra de orina puede causar resultados erróneos. Si existen sospechas de adulteración de la muestra, obtenga otra muestra y envíe ambas muestras al laboratorio para su análisis. Manipule todas las muestras de orina como si fueran potencialmente infecciosas. Procedimiento del ensayo Para realizar este ensayo, se pueden utilizar analizadores de bioquímica capaces de mantener una temperatura stante, pipetear muestras, mezclar reactivos, medir las tasas enzimáticas a 340 nm y cronometrar la reacción precisión. Antes de realizar el ensayo, sulte la hoja de protocolos de cada analizador específico para ocer los parámetros y/o las instrucciones de uso adicionales. Control de calidad y calibración Las buenas prácticas de laboratorio sugieren el uso de muestras de trol el fin de garantizar un correcto funcionamiento. Utilice troles calibrador para validar la calibración. Los resultados del trol deben entrarse dentro de los intervalos establecidos, según lo determinado por los procedimientos de laboratorio y las directrices. Si los resultados están fuera de los intervalos establecidos, los resultados del ensayo no serán válidos. Todos los requisitos de trol de calidad se han de realizar de formidad las regulaciones o requisitos de acreditación locales, estatales y/o federales. Cada laboratorio debe establecer su propia frecuencia de calibración y trol. Análisis cualitativo Para el análisis cualitativo de las muestras, utilice el calibrador multidroga en orina 1 o 2. El calibrador 1 tiene de d-metanfetamina, y se utiliza como referencia discriminatoria para distinguir entre muestras «positivas» y «negativas» un nivel de. El calibrador 2 tiene de d-metanfetamina, y se utiliza como referencia discriminatoria para distinguir entre muestras «positivas» y «negativas» un nivel de. Análisis semicuantitativo Para el análisis semicuantitativo, utilice todos los calibradores. Resultados y valores esperados Resultados cualitativos Una muestra que presente un cambio en el valor de la absorbancia ( A) igual o mayor que el valor obtenido el calibrador se sidera positiva. Una muestra que presente un cambio en el valor de la absorbancia ( A) menor que el valor obtenido el calibrador se sidera negativa. Resultados semicuantitativos Es posible obtener una estimación aproximada de la centración de la droga en las muestras realizando una curva patrón todos los calibradores y cuantificando las muestras a partir de la curva patrón. Los resultados de las muestras por encima del calibrador alto deben diluirse orina negativa y analizarse de nuevo. La semicuantificación de los resultados positivos permite a los laboratorios determinar una dilución apropiada de la muestra para su firmación mediante un método de firmación, tal como. Además, permite al laboratorio establecer procedimientos de trol de calidad y evaluar el funcionamiento del trol. Limitaciones 1. Un resultado positivo en este ensayo solo indica la presencia de anfetamina o metanfetamina y no está correlacionado necesariamente la magnitud de los efectos fisiológicos y psicológicos. 2. Un resultado positivo en este ensayo debe ser firmado por otro método no inmunológico, como CG, CCF o. 3. La prueba está diseñada para su aplicación exclusiva a orina humana. 4. Existe la posibilidad de que otras sustancias y/o factores (p. ej., errores de la técnica o del procedimiento) no indicados en la tabla de la especificidad pudiesen interferir la prueba y dar lugar a resultados falsos. Características específicas de funcionamiento A tinuación se muestran los resultados típicos de funcionamiento obtenidos en el analizador Beckman Coulter AU680. 7
2 Recuperación de la dilución y linealidad Una muestra de orina de paciente alta centración, en torno a de metanfetamina, se diluyó en serie orina exenta del analito en incrementos de 10% y se analizó en 5 repeticiones de modo semicuantitativo. Todas las muestras presentaron una recuperación dentro de un error de ± 10% del valor esperado y el valor de R fue de 0,9998. Precisión Se analizaron muestras adicionadas diversas cantidades de d-anfetamina y la metanfetamina-d en modo cualitativo y semicuantitativo, siguiendo un protocolo de precisión del CLSI (EP05-A2). 8 Las muestras se analizaron en repeticiones de 2, dos veces al día durante 20 días, un total de N = 80. Los resultados se presentan en las tablas siguientes. Análisis cualitativo: Concentración de la muestra Número de determinaciones Discriminatorio 500 n.º Neg/n.º Pos Discriminatorio n.º Neg/n.º Pos d-anfetamina / 0 80 / / 0 80 / / 0 80 / / / / / / 80 0 / / 80 0 / 80 d-metanfetamina / 0 80 / / 0 80 / / 0 80 / / / / / / 80 0 / / 80 0 / 80 Análisis semicuantitativo: Conc. de la muestra, Resultado medio, Precisión intraensayo DE, % CV DE, Precisión total % CV Discriminatorio 500 n.º Neg/ n.º Pos Discriminatorio n.º Neg/ n.º Pos d-anfetamina ,9 9,0 6,2 10,1 6,9 80 / 0 80 / ,8 10,2 2,7 10,9 2,9 80 / 0 80 / ,9 11,2 1,6 13,5 2,0 0 / / ,4 14,1 1,8 17,6 2,3 0 / / ,9 23,6 1,8 28,4 2,2 0 / 80 0 / ,6 23,0 1,6 32,0 2,2 0 / 80 0 / 80 d-metanfetamina ,4 7,4 4,4 9,3 5,5 80 / 0 80 / ,8 8,0 2,0 11,1 2,8 80 / 0 80 / ,1 9,6 1,5 12,1 1,9 0 / / ,4 9,7 1,3 11,8 1,5 0 / / ,1 15,5 1,2 18,9 1,5 0 / 80 0 / ,1 21,4 1,4 27,3 1,8 0 / 80 0 / 80 Caracterización del nivel Se prepararon muestras cercanas a los valores s por adición de d-anfetamina y d-metanfetamina por separado a mezclas de orina negativas. Las muestras se analizaron en repeticiones de 20 tanto en el modo cualitativo y como semicuantitativo. En el modo cualitativo, todas las muestras se detectaron exactitud, es decir, las muestras negativas presentaron una recuperación inferior a los calibradores s y las muestras positivas presentaron una recuperación superior a los calibradores s. En el modo semicuantitativo, las muestras presentaron una recuperación dentro de un error de ± 12 % de sus valores nominales. La precisión de las 20 repeticiones fue inferior al 1 % CV en el modo cualitativo y menos del 4 % CV en el modo semicuantitativo. Exactitud Se analizaron 160 muestras de orina la prueba de anfetaminas en el Beckman Coulter AU680 y mediante. Los resultados se presentan en las tablas siguientes. Se obtuvieron algunos resultados discordantes cuando el ensayo se utilizó para detectar los analitos anfetamina y metanfetamina de forma individual. El ensayo es capaz de detectar la presencia de ambos analitos anfetamina y metanfetamina una reactividad cruzada del 100 % a ambas drogas. Por lo tanto, las muestras analizadas para detectar solo uno de los analitos pueden dar lugar a falsos resultados positivos debido a la presencia del otro analito. Análisis cualitativo: la cordancia general entre el ensayo de anfetaminas y el método de para anfetamina fue del 58,0 % en el nivel de 500 y del 59,4 % en el nivel de por el ) por (entre el y el alto por Nivel de ,0 % ,7 % Nivel de ,5 % ,9 % Resultados cualitativos Análisis semicuantitativo: la cordancia general entre el ensayo de anfetaminas y el método de para anfetamina fue del 58,0 % en el nivel de 500 y del 59,7 % en el nivel de por el ) por (entre el y el alto por Nivel de ,0 % ,7 % Nivel de ,5 % ,9 % Resultados semicuantitativos
3 Resumen de los resultados discordantes de anfetamina: Las muestras de exactitud fueron clasificadas basándose únicamente en la centración de d-anfetamina hallada por. La siguiente tabla identifica las muestras una centración de d-anfetamina por debajo del nivel en las que el resultado observado el ensayo de anfetaminas fue positivo. Valor Resultado Anfetamina a Cont. de la tabla Valor Resultado Anfetamina
4 Cont. de la tabla Valor Resultado Anfetamina b Análisis cualitativo: la cordancia general entre el ensayo de anfetaminas y el método de para metanfetamina fue del 87,4 % en el nivel de 500 y del 87,4 % en el nivel de por el ) por (entre el y el alto por Nivel de ,0 % ,0 % Nivel de ,0 % ,9 % Resultados cualitativos por el ) por (entre el y el alto por Nivel de ,0 % ,0 % Nivel de ,0 % ,1 % Resultados semicuantitativos Resumen de los resultados discordantes de metanfetamina: Las muestras de exactitud fueron clasificadas basándose únicamente en la centración de d-metanfetamina hallada por. La siguiente tabla identifica las muestras una centración de d-metanfetamina por debajo del nivel en las que el resultado observado el ensayo de anfetaminas fue positivo. Valor Resultado Anfetamina a La muestra también tenía MDA ~288 y MDMA ~ a La muestra también tenía PPA ~ y pseudoefedrina 40 µg/ml. Especificidad La especificidad del ensayo se evaluó analizando la reactividad cruzada de diferentes compuestos estructuralmente relacionados y no relacionados. El compuesto potencial de causar reactividad cruzada se añadió a una muestra de orina negativa a las centraciones indicadas y se analizó en modo cualitativo y semicuantitativo. Se sidera que las muestras que dieron un resultado positivo o mayor que la centración discriminatoria presentan reacción cruzada el ensayo, mientras que se sidera que las muestras que dieron un resultado negativo o menor que la centración discriminatoria no presentan una reacción cruzada significativa. 4
5 Los siguientes compuestos originales y metabolitos, analizados el ensayo de anfetaminas, dieron lugar a un resultado positivo en las centraciones que se indican a tinuación. Compuesto 500, 1.000, d-anfetamina d-metanfetamina Metilendioxianfetamina (MDA) Metilendioximetanfetamina (MDMA) Los compuestos no relacionados estructuralmente y/o las drogas/fármacos utilizados de forma comitante produjeron un resultado negativo a las centraciones que se indican a tinuación. Compuesto 500, 1.000, Ácido acetilsalicílico Benzfetamina Benzilpiperacina Benzoilecgonina Bupropión Cafeína Clorpromacina Codeína d,l-efedrina d-efedrina Dextrometorfano Diclorhidrato de cetirizina d-pseudoefedrina Escopolamina Fenciclidina Fendimetrazina Fenetilamina Fenfluramina Fenilefrina Fenilpropanolamina Fenmetracina Fenobarbital Fenotiazina Fentermina Isometepteno Isoxsuprina l-anfetamina l-efedrina l-metanfetamina l-pseudoefedrina Mefentermina Meperidina Metadona Metapirileno Metilfenidato Metronidazol Morfina Nor-pseudoefedrina Cont. de la tabla Compuesto 500, 1.000, Oxazepam Paracetamol Procainamida Prometazina Propranolol Ranitidina Secobarbital Tioridazina Tiramina Trifluoperazina Triflupromazina OH-tiramina Interferencias Se evaluaron los posibles efectos del ph, de las sustancias endógenas y exógenas en la recuperación de las anfetaminas mediante el ensayo de anfetaminas, mediante la adición de cantidades ocidas de sustancias potencial de interferir a dos mezclas de orina exentas de drogas que tenían la mayor centración de anfetamina y metanfetamina que da lugar a un resultado sistentemente negativo, y la centración más baja de anfetamina y metanfetamina que da un resultado sistentemente positivo, entre ± 25 % del valor. Las muestras se analizaron tanto en el modo cualitativo como en el semicuantitativo. No se observó interferencia como secuencia de la adición de los compuestos hasta las centraciones que figuran en la siguiente tabla. Droga: anfetamina, metanfetamina Compuesto interferente Concentración del compuesto Discriminatorio 500 (NEG/POS) Discriminatorio (NEG/POS) Nivel neg Nivel pos Nivel neg Nivel pos Acetona 1 g/dl Neg Pos Neg Pos Ácido ascórbico 1 g/dl Neg Pos Neg Pos Ácido oxálico 100 mg/dl Neg Pos Neg Pos Aspirina 100 µg/ml Neg Pos Neg Pos Cafeína 100 µg/ml Neg Pos Neg Pos Cloruro de sodio 1 g/dl Neg Pos Neg Pos Creatinina 500 mg/dl Neg Pos Neg Pos Densidad relativa 1,004 1,038 g/ml Neg Pos Neg Pos Etanol 1 g/dl Neg Pos Neg Pos Galactosa 10 mg/dl Neg Pos Neg Pos -globulina 500 mg/dl Neg Pos Neg Pos Glucosa 3 g/dl Neg Pos Neg Pos Hemoglobina 150 mg/dl Neg Pos Neg Pos Ibuprofeno 100 µg/ml Neg Pos Neg Pos Intervalo de ph 3 11 Neg Pos Neg Pos Paracetamol 100 µg/ml Neg Pos Neg Pos Riboflavina 7,5 mg/dl Neg Pos Neg Pos Seroalbúmina humana 500 mg/dl Neg Pos Neg Pos Urea 1,25 g/dl Neg Pos Neg Pos 5
6 Bibliografía 1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA). Research Monograph 73, Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute On Drug Abuse. Federal Register Vol. 73, No. 228, 2008: Julien RM. A Primer of Drug Action. 6th ed. New York, NY: WH Freeman & Co; Miller NS, Gold MS. Amphetamine and its derivatives. In: Giannini AJ, Slaby AE, eds. Drugs of Abuse. Oradell, NJ: Medical Eomics Books; Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man, 5th ed. Foster City, CA: Chemical Toxicology Institute; Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogenous Enzyme Immunoassay: A New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun. 1972:47, Data on file at Microgenics Corporation, a part of Thermo Fisher Scientific. 8. Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline. 2nd ed. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; NCCLS EP05-A2 Document Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline-Sed Edition, Vol. 27, No.15. CLSI document C52-A2, Wayne, PA Microgenics Corporation Fremont Blvd. Fremont, CA EE. UU. Servicio técnico y de atención al cliente en EE. UU.: Thermo Fisher Scientific Oy Ratastie 2, P.O. Box Vantaa, Finland Tel: Fax: Para ocer las actualizaciones de este folleto, visite: Otros países: Póngase en tacto su representante local de Thermo Fisher Scientific _ES
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