Vigilancia Epidemiológica in vivo de la trichinellosis porcina en cerdos expuestos naturalmente a la enfermedad

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1 112 Vigilancia epidemiológica in vivo de la trichinellosis porcina Vigilancia Epidemiológica in vivo de la trichinellosis porcina en cerdos expuestos naturalmente a la enfermedad Guarnera, E. A.; Molina, V. E.; Krivokapich, S. J. Departamento de Parasitología, INEI, ANLIS Dr. Carlos G. Malbran Av. Velez Sarfield 563, (1281) Buenos Aires. Parasitologia@anlis.gov.ar Introducción La República Argentina es un país donde la trichinellosis ocurre de manera continua y recurrente, su área de dispersión cubre las provincias con mayor habito familiar por la crianza de cerdos y la elaboración artesanal de fiambres y embutidos. Antiguamente su historia natural transcurría entre la fauna silvestre, se transmitía a través de los animales carnívoros y omnívoros por el mecanismo predador/presa o por animales carroñeros que se alimentaban con carcasas que se encontraban dispersas en el ambiente. Con el devenir del tiempo los hábitos del hombre y la domesticación de los cerdos produjeron un desprendimiento de este ciclo natural, creándose nichos provocados que se instalaron próximos a la vivienda. A partir de estos focos domésticos la difusión se hizo dependiente de los hábitos y las actividades del poblador rural. Actualmente los focos domésticos se encuentran en los cinturones que rodean a las ciudades rurales del interior del país, su núcleo son los basurales que se organizan por la disposición de los restos domiciliarios y comerciales a cielo abierto. En este espacio se alimentan y desarrollan poblaciones sinantropicas de ratones (Mus musculus), ratas (Ratus ratus), armadillos (Choetophractus villosus) perros (Canis familiares), gatos (Felix domesticus) y posiblemente comadrejas (Didelphis marsupialis), entre todos ellos circula libremente la Trichinella spiralis. La interacción del basural y la fauna conviviente, con algunos animales parasitados, transforman el lugar en un foco endémico pero exclusivamente enzootico, por lo que se puede mantener silencioso e ignorado por largos periodos de tiempo. Se ponen al descubierto cuando los cerdos domésticos se introducen en el foco y llegan al hombre a través de sus carnes y subproductos, en este momento el foco se transforma en zoonotico y emergente. El basural como fuente de alimentos, el número de ejemplares de cada especie, la existencia simultánea de animales sanos y enfermos, de carnívoros y carroñeros, y la biodiversidad del conjunto, son los responsables de la estabilidad y potencia de cada foco. A partir de este conjunto la difusión de la trichinellosis puede ser un hecho cotidiano. El ciclo de la Trichinella spiralis se cumple enteramente en un solo huésped. La enfermedad es un fenómeno individual aun cuando afecta a ejemplares que están dentro de una piara. Es una enfermedad infecciosa no transmisible de origen alimentario. Si la fuente de infección es un animal de pequeño porte, como un roedor o armadillo pampeano, solo se producirá la transmisión a un animal de porte mayor que aparecerá como único infectado, pero si la fuente es un animal grande como un perro o cerdo, se podrían afectar simultáneamente varios animales del mismo porte o muchos de los más pequeños, originando una gran cantidad de enfermos que le confieren al foco vitalidad y potencia. Una piara con alta prevalencia de trichinellosis, sugiere que los cerdos habitan un foco donde hay una fuerte biodiversidad, con exposición frecuente a carcasas o animales infectados con larvas de Trichinella spp.

2 Vigilancia epidemiológica in vivo de la trichinellosis porcina 113 Grafico I. Curva de la trichinellosis porcina endémica Representación teórica de la infección natural de una piara por animales de porte menor como fuente de infección. Grafico II. Curva de la trichinellosis porcina epidémica Representación teórica de la infección epidémica de una piara, por animales de porte mayor como fuente de infección. (representación de una infección alimentaria por fuente común) Principios de la Vigilancia Epidemiológica de la trichinellosis porcina Dado que la enfermedad en el hombre es grave, y que tiene carácter de enfermedad endémica en el stock de cerdos marginales, es necesario tomar medidas de vigilancia epidemiológica y control, para que todo el consumo de carne porcina tenga el marco de la seguridad alimentaria. De acuerdo con este principio, la primer actividad sanitaria debería ser la identificación de los rebaños donde circula Trichinella spiralis. Para este fin la vigilancia epidemiológica es la herramienta que permite conocer el comportamiento de la enfermedad sobre la población general, especialmente de los factores predisponentes que facilitan la aparición, distribución y consolidación en un espacio geográfico determinado (foco) La actividad es un proceso de información dinámico que permite la caracterización de la Trichinellosis en el espacio, en el rebaño y según los ejemplares infectados en relación con los factores de riesgo ambientales: físicos, socioeconómicos y biológicos. El objetivo de la vigilancia epidemiológica es determinar en primera instancia la presencia del parásito. Si ya estuviera instalado es necesario conocer la prevalencia, incidencia y tendencias de la enfermedad animal con fines de establecer las acciones sanitarias adecuadas a cada caso. Dado que no es posible trabajar con el total de animales de la piara, se toma una parte representativa del conjunto para lograr el mismo propósito (muestreo). Con el fin de operar con toda seguridad es conveniente identificar con caravanas o marcas a cada cerdos Tamaño de la muestra La Trichinellosis es una enfermedad crónica donde la prevalencia crece con la edad de los cerdos, esto se debe a que aumenta la probabilidad de ingerir alimentos parasitados según se incrementan los años de vida. De acuerdo a esta consideración es necesario subdividir al rebaño en estudio según los grupos de edad de los cerdos que lo componen. En un muestreo para realizar el diagnostico inmunológico de trichinellosis se deben considerar al menos los tres estratos siguientes:

3 114 Vigilancia epidemiológica in vivo de la trichinellosis porcina - Animales mayores de 1 año - Animales de 6 meses a 1 año - Animales de 4 a 6 meses De acuerdo con el criterio de dividir el rebaño en función de la prevalencia por grupo de edades, lo aconsejable es realizar un muestreo estratificado por edad. El muestreo estratificado es un procedimiento que consiste en dividir la población en estratos para tomar muestras al azar de cada uno de ellos y obtener con el producto la muestra definitiva. La construcción de los estratos permite subdividir a la población de cerdos, heterogénea por el riesgo de contraer la infección, en porciones homogéneas que son menos variables que el conjunto. El producto es una muestra estratificada que garantiza una adecuada representación de todas las partes de la población. En Trichinellosis porcina para que la muestra sea representativa del riesgo, el 60 % de los animales deben ser mayores de un año, el 30 % deben tener de 6 meses a un año y el 10 % de 4 a 6 meses de edad. Calculo del tamaño de la muestra El tamaño de la muestra se obtiene aplicando en cada estrato la ecuación siguiente: N= Z 2 x PxQ (d) 2 n: tamaño de la muestra Z: nivel de significación (95 %, 1.96) P: Porcentaje de cerdos positivos para trichinellosis (Valor histórico recogido de periodos anteriores) Q: Porcentaje de cerdos negativos a trichinellosis (1-P = Q) d: Margen de error (5 %) Al número de ejemplares que determina el tamaño de la muestra se le toma una alícuota de sangre con el fin de realizar el examen inmunológico de trichinellosis. Extracción de sangre A cada ejemplar seleccionado se le toman 8 cc de sangre siguiendo el procedimiento de Peralta (*), que consiste en la extracción con jeringa y aguja G8 de sangre del plexo venoso del ángulo nasal del ojo entrando por debajo del tercer párpado. La vena yugular es la fuente alternativa. Se deja coagular y se centrífuga hasta su envío al laboratorio. (*) Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad del Litoral, Esperanza, Prov. Santa Fe Diagnóstico de la circulación de larvas de T. Spiralis en el rebaño porcino Con el fin de evitar que se inicie el estudio de una piara con exámenes individuales que aumentarían el costo de la intervención, se realiza un screening de la piara para conocer si en el conjunto se detecta la circulación de T. Spiralis. En los sueros colectados se determina la presencia de anticuerpos anti-trichinella spiralis-excretores/secretores, aplicando la técnica de ELISA IgG de fase sólida con tratamiento de los resultados según el procedimiento ELISA / rebaño. El resultado final es la expresión del índice enzootico que sugiere el status de la piara frente al parásito, ( El índice se denomino Malbran en homenaje al Instituto donde se desarrollo el procedimiento) Sobre la base de estos dos objetivos la vigilancia epidemiológica tiene dos horizontes: a) Objetivo inmediato: evitar el daño a la salud de las personas. b) Objetivo mediato: disminuir, controlar o eliminar el riesgo del rebaño. Actividades del objetivo inmediato a) Determinar si hay circulación de T. spiralis en el rebaño. b) Aplicar procedimientos para identificación de animales sospechosos. c) Aplicar procedimientos para confirmación de animales enfermos. d) Calificación del rebaño y sacrificio de los cerdos positivos.

4 Vigilancia epidemiológica in vivo de la trichinellosis porcina 115 e) Seguimiento inmunológico del rebaño. f) Alta del rebaño. Actividades del objetivo mediato g) Tratamiento del medio ambiente. h) Determinación del ciclo focal. i) Control de la fauna sinantropica del foco. j) Modernización de la infraestructura. Los objetivos inmediatos comprenden a las actividades de la vigilancia epidemiológica que son los que se desarrollan en este capitulo. Vigilancia Epidemiológica de T. spiralis en rebaños porcinos Determinación de la circulación de Trichinella sp en la piara Para iniciar el estudio en un rebaño se debe conocer previamente: a) el numero de animales que lo componen b) la estructura del rebaño por edad y sexo Aplicación de procesos para identificar los animales sospechosos Dado que no es posible trabajar siempre con el total de animales para determinar la circulación del parásito, se toma una parte representativa del conjunto para lograr el mismo propósito (muestreo). Para operar con toda seguridad es conveniente identificar de manera permanente a cada cerdo. a) Determinar el tamaño de la muestra b) Hacer un muestreo estratificado por edad - 60 % de animales mayores de 1 año - 30 % de animales de 6 meses a 1 año - 10 % de animales de 4 a 6 meses c) Tomar 8 cc de sangre en ejemplares elegidos al azar según el tamaño de la muestra y la estratificación por edad. d) Realizar en los sueros de la muestra la detección de anticuerpos anti-trichinella spiralis excretores/secretores, aplicando la técnica de ELISA IgG de fase sólida. e) Calificar al rebaño como libre o sospechoso de portar Trichinella spiralis. Aplicación de procedimientos para identificar a todos los animales sospechosos del rebaño Si el procedimiento ELISA / rebaño revela que hay circulación de larvas de T. Spiralis, se debe hacer la prueba serológica en el 100 % de los animales de la piara con el fin de identificar a todos los cerdos con valores de Densidad Óptica (DO) >= los que se calificaran como sospechosos de padecer Trichinellosis. Aplicación de procedimientos para confirmación de la enfermedad en los animales sospechosos En los rebaños con calificación de sospechosos se debe examinar a cada cerdo de manera individual para confirmación de la enfermedad. Los animales que fueron positivos por ELISA se deben examinar con la técnica de western blot que tiene el 100 % de especificidad (Un triplete de bandas de 43 a 69 Kda en la membrana de nitrocelulosa confirman la enfermedad). Calificación del rebaño y sacrificio de los cerdos positivos El resultado del sistema inmunológico de diagnostico/confirmación sobre todos los animales de la piara determina dos calificaciones posibles para el rebaño:

5 116 Vigilancia epidemiológica in vivo de la trichinellosis porcina a) Rebaño libre de Trichinellosis b) Rebaño de alto riesgo para la salud publica La calificación del rebaño tiene serias implicancias sanitarias, económicas y ambientales no solo para el rebaño calificado sino también para los rebaños vecinos y en general para todos los que participan del mismo ecosistema que es el verdaderamente infectado. Los animales positivos deben enviarse de inmediato al frigorífico donde se confirmara su condición por digestión artificial. La presencia de larvas condena las canales al digestor. Seguimiento inmunológico del rebaño Mientras se desarrollan las tareas de saneamiento del medio ambiente, la piara debe ser controlada con el sistema ELISA/western blot cada 70 días, de acuerdo con el tiempo que dura el periodo de ventana inmunologíca. Los cerdos positivos se envían al frigorífico. Luego del saneamiento del medio ambiente se continua la vigilancia epidemiológica intensificada (ELISA de rebaño cada 6 meses). Alta del rebaño Luego de 2 años de vigilancia serológica intensificada negativa se puede calificar al rebaño como libre, aun cuando la calificación definitiva surge de la situación del medio ambiente que debe ser saludable para que la cría de cerdos se haga en condiciones de contención biológica natural. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Simple ion exchange chromatography purification of a Trichinella spiralis metabolic antigen for diagnosis. G. Santillan, J. Garberi, V.Molina., A. Franco, E. Castelli y E. Guarnera Trichinellosis ICT9. Agosto de DF. Mexico Bases Inmunológicas de la Vigilancia Epidemiológica Ante mortem de la Triquinelosis Franco A., Molina V., Ribicich M., Santillan G., y Guarnera E:A. IV Congresso Brasileiro de Epidemiología. EPIRIO 98. Rió de Janeiro 1 al 5 de Agosto de 1998 Detección de la Trichinellosis porcina in vivo Guarnera E.A., Krivokapich S., Paoletti C. y Molina V. Vet. Epidemiology, sometido a publicación