DIAGNOSTICO DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA. Mic. Cristina Montalvo Directora Livexlab MEDIANTE EL LABORATORIO

Transcripción

1 DIAGNOSTICO DE ANEMIA INFECCIOSA EQUINA Mic. Cristina Montalvo Directora Livexlab MEDIANTE EL LABORATORIO

2 QUIENES ÉRAMOS..

3 QUIENES SOMOS..

4 DESIGNACION 2010 LIVEXLAB obtiene una designación como Organismo de la Evaluación de la Conformidad para realizar los ensayos de AIE y BRUCELOSIS otorgado por el CONCAL (Consejo Nacional de la Calidad) luego de una Evaluación de la OAE (Organismo de Acreditación Ecuatoriano)

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6 ANEMIA INFECCIOSA EQUINA (Coggins) BRUCELOSIS (Rosa de bengala) (Elisa competitivo)

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8 TECNICAS DE DIAGNOSTICO PARA AIE Pruebas serologicas 1. Prueba de inmunodifusión en gel de agar (AGID) (prueba prescrita para el comercio internacional) Coggins 2. ENZIMA INMUNO ENSAYO (ELISA)

9 Prueba de inmunodifusión en gel de agar (AGID) COGGINS Los anticuerpos precipitantes se producen como resultado de la infección por la AIE y se pueden detectar mediante la prueba AGID. Las técnicas AGID disponibles en el mercado utilizan como antígeno la proteína p 26 del core del virus altamente purificada para evitar cualquier reacción con antígenos proteicos no relevantes y evitar reacciones inespecíficas.

10 VIRUS DE LA ANEMIA INFECCIOSSA EQUINA FAMILIA RETROVIRIDAE SUBFAMILIA LENTIVIRIDAE

11 REACCION OBTENIDA EN COGGINS Las reacciones específicas se indican por las líneas de precipitación entre el antígeno de la AIE y el suero problema en Un gel de agar a base de una Solucion de agar noble en un Buffer borato Ph 8.6 CONTROL POSITIVO MUESTRA ANTIGENO

12 REACCION OBTENIDA EN COGGINS y se confirman por ser idénticas a la reacción que se da entre el antígeno y el suero control positivo. La lectura se debe realizar de 48 a 72 hrs.

13 CLASES DE REACCIONES REPORTADAS EN LA PRUEBA DE COGGINS (AGID)

14 NEGATIVO Cuando las líneas de precipitación del control positivo o suero de referencia continuan hacia el pocillo de la muestra sin evidenciar ningún tipo de curvatura CONTROL POSITIVO MUESTRAS

15 POSITIVA Las líneas del control positivo o suero de referencia se unen con la línea de la prueba formando una línea continua. POSITIVO NEGATIVO POSITIVO

16 DEBIL POSITIVA Las líneas de referencia del control positivo se dobla ligeramente hacia el pocillo de la muestra, pero no forman una línea continua. Estas reacciones requieren de una observación cuidadosa y fácilmente pueden ser pasadas por alto. DEBIL POSITIVO

17 CONDICIONES PARA REACCIONES DEBILES POSITIVAS Los potros que se alimentan de yeguas infectadas pueden ser persistentes hasta los 6 meses de edad debido a anticuerpos del calostro.

18 CONDICIONES PARA REACCIONES DEBILES POSITIVAS Durante el período de incubación de EIA. Si la muestra es obtenida de dos a tres semanas más tarde, la reacción debería ser más fuerte.

19 CONDICIONES PARA REACCIONES DEBILES POSITIVAS Portadores inaparentes que no tienen ningún signo clínico de EIA pueden tener reacciones débiles en la prueba durante períodos largos. En estos casos, muestreando de nuevo raras veces causa un cambio en la reacción.

20 a) PRUEBA DE EZIMA INUMO ENSAYO (ELISA)

21 FUNDAMENTO DE LA PRUEBA DE ELISA La prueba detecta anticuerpos específicos contra la proteína p 26 del virus de la AIE en suero de caballo. Este antígeno esta adherido a los pocillos de prueba. Los anticuerpos se unen al antígeno y añadiendo un conjugado marcado con una enzima son fácilmente revelados mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro. A mayor cantidad de Ac más color en la prueba (Positiva)

22 ELISA PARA AIE

23 ELISA PARA AIE Un resultado positivo obtenido mediante ELISA debe comprobarse de nuevo utilizando la prueba AGID para confirmar el diagnóstico, debido a que se han detectado algunos resultados positivos falsos mediante ELISA.

24 COMPARACION ENTRE ELISA Y COGGINS Sensibilidad, es la proporción de verdaderos positivos identificados por la prueba del total de enfermos. La sensibilidad es, por lo tanto, la capacidad del test para detectar la enfermedad. Especificidad, es la proporción de verdaderos negativos identificados por la prueba del total de sanos. En otras palabras, se puede definir la especificidad como la capacidad para detectar a los sanos.

25 DATOS DE LA CASA COMERCIAL VMRD Especie Muestra Prueba Sensibilidad Especificidad Equina Suero Elisa 100 % 100% Equina Suero Coggins 99 % 100%

26 PRUEBA DE COGGINS (Octubre 2010-Enero 2011) TOTAL % RESULTADO POSITIVAS NEGATIVAS LAS 77 MUESTRAS POSITIVAS POR COGGINS O INMUNODIFUSIÓN EN GEL AGAR (IDGA) FUERON VERIFICADAS CON OTRA MARCA COMERCIAL (IDEXX) Y ADICIONALMENTE POR ELISA.

27 % TOTAL % TOTAL %Positivos %Positivos % Negativos %Negativos % Positivos sin Coggins Positivo (NEGATIVOS) % Positivos EN ESTE CUADRO COMPARATIVO LA PRUEBA DE ELISA NOS INDICA QUE ES UNA PRUEBA MAS SENSIBLE QUE COGGINS AYUDANDONOS A DETECTAR AQUELLOS CASOS QUE SE ENCUENTRAN EN FASES INICIALES, NUESTRA RECOMENDACIÓN INICIAL FUE UTILIZAR EL ELISA COMO UNA PRUEBA DE SCRENNING O TAMIZAJE, Y AQUELLAS QUE RESULTEN POSITIVAS AL ELISA, CONFIRMARLAS CON COGGINS. EN NUESTRO LABORATORIO LA USAMOS COMO PRUEBA DE RESPALDO INTERNO PARA LOS CASOS DE RESULTADOS POSITIVOS POR LA PRUEBA COGGINS O IDGA.(ya que no se puede dar el caso de Un Coggins Positivo con un Elisa Negativo) ADICIONALMENTE LAS PRUEBAS POSITIVAS A VMRD FUERON CORRIDAS CON IDEXX OBTENIENDO RESULTADOS EQUIPARABLES.

28 REQUISITOS PARA ENVIO DE MUESTRAS Muestreos de más de 10 animales deben ser custodiados a cargo de Agrocalidad. Llenar la solicitud del exámen y su hoja de filiación con: Nombre equino con letra clara Edad Identificación individual (chip) Sexo Raza o Tipo Pelo Nombre y apellido del propietario Predio Provincia, Cantón y Parroquia Firma del Propietario y del Médico veterinario Responsable Deben tener conocimiento que todos los resultados tanto Negativos como positivos son reportados a Agrocalidad

29 MUESTRAS Suero Equino en tubo vacutainner de tapa Roja NO se aceptan tubos con anticoagulante (tapa lila) Los resultados se entregarán con lectura 72 horas (3 días laborables)

30 Cayambe, Pichincha Ecuador

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