Identificación y medición de la respuesta inmune PRUEBAS SECUNDARIAS

Transcripción

1 Identificación y medición de la respuesta inmune PRUEBAS SECUNDARIAS

2 La prueba a realizar depende de las características del Ag SOLUBLE PRECIPITACIÓN PARTICULADO AGLUTINACIÓN SUPERFICIE + COMPLEMENTO FIJACIÓN DE COMPLEMENTO

3 Comparación precipitación - aglutinación Antígeno SOLUBLE Anticuerpo Antígeno PARTICULADO Formación de retículo Amontonamiento PRECIPITACIÓN AGLUTINACIÓN

4 PRECIPITACIÓN Fundamento: un antígeno soluble, al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico, forma complejos inmunes que al encontrarse en proporciones óptimas se insolubilizan dando una reacción de precipitación

5 Precipitación Exceso de AC Proporciones Exceso de Ag AC ESPECÍFICO Ag SOLUBLE óptimas MEDIO PROPORCIÓN RETÍCULO SOLUBLE Ag/mg

6 MEDIO LÍQUIDO SÓLIDO Test de Ascoli -Valente CARBUNCLO DIFUSIÓN DOBLE INMUNOELECTROFORESIS (IEF) INMUNODIFUSIÓN RADIAL (IDR) CONTRAINMUNOELECTROFORESIS (CIEF)

7 DIFUSIÓN DOBLE Inmunodifusión en Gel de Agar Fundamento: empleando el medio adecuado (agar gel), es posible hacer migrar por difusión tanto Ag como Ac (difusión doble ), de modo que al encontrarse en proporciones óptimas, interaccionen, produciendo una banda de precipitado visible Ejemplo: test de Coggins para diagnóstico de AIE

8 Test de Coggins para AIE Placa de Petri Suero problema Antígeno específico 4. Suero testigo (+) (reactivo) (reactivo) 1. Agar gel 2.Sacabocados

9 6.Cámara húmeda 48 hs 7. LECTURA (fondo oscuro) e INTERPRETACIÓN A D. NEGATIVO C A. NEGATIVO B E. Fuertemente POSITIVO F. POSITIVO D G B. POSITIVO C. Débilmente POSITIVO F E I H G. POSITIVO H. Banda INESPECÍFICA I. Banda INESPECÍFICA

10 APLICACIONES EN VETERINARIA ANEMIA INFECCIOSA EQUINA PIROPLASMOSIS EQUINA LEUCOSIS BOVINA BRUCELOSIS OVINA BRUCELOSIS CANINA

11 AGLUTINACIÓN Fundamento: un antígeno particulado (ejemplo: bacterias, eritrocitos), al ser puesto en contacto con su anticuerpo específico en proporciones óptimas, se une por medio de enlaces cruzados. Este complejo de unión agruma, produciendo una reacción de aglutinación.

12 FENÓMENO DE ZONA O PROZONA Se produce cuando existe un marcado exceso de Ac con respecto a los determinantes antigénicos de la partícula, de tal manera que es poco probable que los dos sitios de unión de la Ig puedan unirse a dos determinantes antigénicos de dos partículas distintas, inhibiéndose de este modo la aglutinación. Generalmente ocurre en las diluciones bajas de sueros muy positivos.

13 A G L U T I N A C I Ó N AGLUTINACIÓN AGLUTINACIÓN PASIVA COAGLUTINACIÓN HEMOAGLUTINACIÓN / INHIBICIÓN H. A.

14 + Proporción Antígeno particulado (reactivo) Suero problema AGLUTINACIÓN Medio

15 AGLUTINACIÓN En PLACA En TUBO Salmonella Brucella Micoplasma Brucella BPA SAT+2-ME PAL

16 Aglutinación en placa: BPA Prueba del Antígeno Brucélico Acidificado 1. Suero problema 2. Antígeno específico (reactivo) Aglutinoscopio + placa de vidrio

17 8 MINUTOS 3. Mezclar LECTURA E INTERPRETACIÓN Con GRUMOS Sin GRUMOS AGLUTINACIÓN POSITIVA Negativa

18 Aglutinación en tubo: SAT + 2-ME SAT (Seroaglutinación en Tubo) Ig M Ig G Se realizan en simultáneo 2- ME (2- Mercaptoetanol)

19 En TUBO: SAT + 2- ME 2. Solución fisiológica fenicada (SFF) 1. Suero problema 3. Antígeno SUERO BPA (+) 60 MINUTOS SAT 1/25 1/50 1/100 1/200 Título 37ºC-48 hs 2. Solución 2-ME 2-ME

20 LECTURA e INTERPRETACIÓN 37ºC-48 hs POSITIVA INCOMPLETA NEGATIVA

21 Aglutinación en tubo: PAL PRUEBA DEL ANILLO EN LECHE Fundamento: si en una muestra de leche se encuentra un anticuerpo específico, y se le agrega un antígeno particulado coloreado, ambos se unirán, formando un complejo Ag-Ac que se adhiere a los glóbulos de grasa y asciende con la nata

22 PAL 1. Leche problema 2. Antígeno (reactivo) LECTURA e INTERPRETACIÓN 37ºC-1 hora

23 APLICACIONES EN R. A. BRUCELOSIS BOVINA Prueba TAMIZ COMPLEMENTARIAS DEFINITORIA BPA ELISA I SAT + 2-ME FPA ELISA C FC VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA PAL - ELISA I

24 PRUEBAS TERCIARIAS v IN VITRO NEUTRALIZACIÓN v IN VIVO PROTECCIÓN

25 NEUTRALIZACIÓN Fundamento: estimación de la capacidad de una anticuerpo de neutralizar la actividad biológica de un antígeno cuando se mezcla con él in vitro

26 PROTECCIÓN Fundamento: forma de análisis de neutralización que se realiza totalmente in vivo para determinar la capacidad protectora de un anticuerpo específico frente a su antígeno

27 RESPUESTA INMUNE CELULAR v PURIFICACIÓN DE LINFOCITOS v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS T v IDENTIFICACIÓN LINFOCITOS B v PRUEBA DE FUNCIÓN DE LINFOCITOS