Inmunohematología 2017

Transcripción

1 Inmunohematología 2017

2 REACCIONES DE HEMAGLUTINACIÓN 1-Sensibilización 2-Aglutinación Ag + Ac Ag-Ac

3 FACTORES QUE AFECTAN LA HEMAGLUTINACIÓN Enzimas LISS SAGH PEG Polibrene Albúmina Potencial zeta Tipo de Ac Densidad antigénica Tiempo de incubación Fuerza iónica ph Temperatura

4 CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS Primera parte del práctico

5 Títulación de antisueros Lavar 3 veces GR 5% Sistema Título ABO > 128 Rh > 32

6 Score Aglutinatos Graduación en tubo Grumo único grumos Hasta 10 grumos ++ 5 Muchos, finos + 2 ninguno - 0 Sistema Score ABO > 50 Rh >

7 Avidez GR 10% ABO GR 50% Rh Sistema ABO Rh Avidez < 8 segundos < 30 segundos

8 Especificidad ABO Rh Reactivo Reactivo Anti-A Anti-B Anti-A,B GR A GR B GR AB GR O Anti-D + - GR O Rh D (+) DCe/dce R1r GR O Rh D (-) dce/dce rr

9 Determinación de los grupos sanguíneos ABO y Rh Segunda parte del práctico

10 Grupo sanguíneo Sistema ABO GR Ag Plasma Ac A A A Anti-B B B B Anti-A AB AB A y B Ninguno O O Ninguno Anti-A y Anti-B

11 TIPIFICACIÓN ABO DIRECTA INVERSA Placa Tubo A B O A B AB A B O GR 5% GR 5%

12 Interpretación Grupo sanguíneo PRUEBA DIRECTA PRUEBA INVERSA Anti - A Anti - B Anti - AB GR A GR B GR O O A B AB DISCREPANCIA ABO

13 Sistema Rh (Ag D) Differences between normal D, D-weak D and partial-d D phenotypes Antígeno D Normal D Débil Variante D Epitope: Cantidad de Ag: Normal Normal Normal Reducida Mutados Normal o Reducida Epitope Antígeno

14 TIPIFICACIÓN RH (AG D) Placa D C Tubo GR 5% Aglutina Rh D (+) No Aglutina Rh D (-) D débil D parcial D parcial débil No Aglutina Aglutina Rh D (+) Investigar antígenos D débiles

15 Determinación de antígenos D débiles P Paciente Control GR 5% GR 5% Anti-D Soluc.Fisiol. C Centrifugar y Leer Aglutina No aglutina No debe aglutinar Rh D (+) Incubar 37ºC 30 min (SENSIBILIZACIÓN) Centrifugar y Leer Aglutina No aglutina No debe aglutinar Rh D (+) Lavar 3 veces con solución fisiológica SAGH SAGH Centrifugar y Leer Aglutina No aglutina No debe aglutinar Rh D débil (+) Rh D (-)

16 Cómo se informa un grupo sanguíneo? Nombre y Apellido: Fecha: GRUPO SANGUÍNEO: OB AB FACTOR Rh D: Positivo Negativo

17 Prueba de Coombs

18 Prueba que permite demostrar la presencia de anticuerpos que sensibilizan los glóbulos rojos. El reactivo de Coombs ó SAGH reconoce fracción Fc de las Ig o las fracciones de C específicas. + Suero Coombs AGLUTINACIÓN

19 TIPOS DE SAGH

20 PRUEBAS ANTIGLOBULINA PRUEBA DE COOMBS DIRECTA (PCD) Detecta glóbulos rojos sensibilizados in vivo PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA (PCI) Detecta glóbulos rojos sensibilizados in vitro

21 PRUEBA DE COOMBS DIRECTA Detecta los Acs y/ó componentes del Complemento fijados in vivo a los hematíes del paciente. rpm Descartar el plasma Sangre entera anticoagulada con EDTA Separar una alícuota para lavar con SF Muestra: GR del paciente en estudio

22 PRUEBA DE COOMBS DIRECTA Lavar 3 veces con solución fisiológica Preparar suspensión globular al 5% 100 µl de GR µl de SF 1 gota de suspensión de GR al 5% 1 gota del Rvo de Coombs rpm 45 a 1000g LEER

23 PRUEBA DE COOMBS DIRECTA Resultado positivo: presencia de aglutinación. Se debe indicar la intensidad de la positividad: +, ++, +++, Resultado negativo: dejar a temperatura ambiente 10 minutos, centrifugar y leer.

24 APLICACIÓN DE PCD Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal (EHFN) Reacción Hemolítica Postransfusional Anemia Hemolítica Autoinmune (AHAI) Anemia Hemolítica Inducida por Fármacos

25 EHFN PRUEBA DE COOMBS DIRECTA Reactivo de Coombs + MUESTRA: GR del bebé lavados (2-5%) Sensibilización de los GR in vivo con Acs maternos EHFN ABO EHFN Rh D

26 QUÉ OCURRIRÍA SI LOS LAVADOS SE OMITIESEN O SE REALIZARAN DEFICIENTEMENTE?

27 La muestra contiene GR sensibilizados y muchas globulinas no unidas

28 PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA Detecta los Acs y/ó componentes del Complemento presentes en el suero del paciente, los cuales serán fijados in vitro a los hematíes. MUESTRA: SUERO DEL PACIENTE REACTIVOS: GR O Rh D(+) ó Paneles Selectores Reactivo de Coombs SF ó LISS (solución salina de baja fuerza iónica)

29 PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA Tercera parte del práctico Ag - Ac 100 µl SUERO + 50 µl GR al 5% en SF Incubar 30 a 37 C Lavar 3 veces con SF rpm LEER 1 gota del Rvo de Coombs GR al 5% en LISS el tiempo de incubación se acorta a 15 min

30 PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA Si la reacción es positiva se debe titular el Ac Diluciones: 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64

31 APLICACIÓN DE PCI Detección de anticuerpos irregulares Identificación de anticuerpos irregulares Pruebas de compatibilidad Tipificación de antígenos en el GR

32 Fase Preanalítica Anamnesis Muestra Limpieza del material Centrífugas Reactivos Titulación del Rvo de Coombs. Fase Analítica Suspensiones de GR Lavados Tiempos de incubación Centrifugación Lectura

33 RESULTADO FALSO NEGATIVO Lavado inadecuado Omitir el agregado de SAGH Pérdida de actividad de SAGH por mala conservación Centrifugación inadecuada Concentración de GR alta o baja Concentración alta de IgG en suero en estudio

34 RESULTADO FALSO POSITIVO Glóbulos rojos autoaglutinados o poliaglutinados Partículas, contaminantes, precipitados o fibrina presentes en tubos que producen agregación de GR Sobrecentrifugación

35 PRUEBAS EN GEL Esta prueba permite que los GRs no aglutinados pasen libremente a través de la columna de gel bajo centrifugación, mientras que aquellos aglutinados, permanecen atrapados entre las esferas de gel. NEGATIVO POSITIVO

36 GRACIAS POR SU ATENCIÓN