PARASITOLOGIA TEMAS. 1 PARASITOLOGÍA - generalidades. 2 PROTOLOGÍA - generalidades. 3 FLAGELADOS - generalidades

Transcripción

1 PARASITOLOGIA Estos capítulos han sido realizados por el Dr. Silvio Valperga, Profesor de la Cátedra de Parasitología de la Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia de la Universidad Nacional de Tucumán. Editados por la Dra. Silvia Antoni de Jogna Prat, Profesora de la Cátedra de Enfermedades Infecciosas de la Facultad de Medicina de la Universidad de Tucumán. TEMAS 1 PARASITOLOGÍA - generalidades 2 PROTOLOGÍA - generalidades 3 FLAGELADOS - generalidades 4 F ILO. MICROSPORA MCROSPORIDIOS - generalidades 5 Giardia lamblia 6 CHAGAS 7 - TOXOPLASMOSIS 8 - PALUDISMO 9 - HIDATIDOSIS

2 Parasitología Definiciones 1)BRUMPT (Comienzos de siglo) Es la ciencia que tiene por objeto el estudio de todos aquellos seres vivos, animales y vegetales, capaces de vivir a expensas de otros de organización más desarrolla. Tales seres reciben el nombre de parásitos. Implícitamente, un ser menos desarrollado, supuestamente más pequeño y débil, vive a expensas de otro, más desarrollado, más grande y poderoso. 2)PIEKARSKI (de mediados de siglo) La Parasitología forma parte del vasto campo de la Ecología. (*). Esta se ocupa, entre otros objetivos, de las condiciones vitales y del medio ambiente de aquellos seres que, por su condición de parásitos, se relacionan de un modo particular con otras especies con las que hacen vida mancomunada, obligatoria o facultativamente. Uno de los miembros, el parásito, vive a expensas del otro, el hospedador (huésped), al que menoscaban en mayor a menor grado. Ninguna de ellas precisa correctamente y profundamente (esencialmente) el contenido de la Parasitología, ni muchos del fenómeno biológico fundamental que interesa: el parasitismo. Dominio de la Parasitología Quiénes satisfacen los requisitos fundamentales para ser parásitos? - Virus.(VIROLOGIA) - Bacterias, espirilos, rickettsias, micoplasmas, clamidias. (BACTERIOLOGIA) -Hongos. (MICOLOGIA) También, una rama de ENFERMEDADES INFECCIOSAS PARASITOLOGIA Protozoarios, helmintos (gusanos), artrópodos, Priones?. RAMAS DE LA PARASITOLOGIA PROTOZOLOGIA (protozoarios) HELMINTOLOGIA (helmintos-gusanos) ENTOMOLOGIA SANITARIA (artrópodos de interés sanitario). *ECOLOGIA es la ciencia que estudia la interdependencia funcional entre animales, vegetales y medio ambiente, o sea, es el estudio de estructura y función de la naturaleza. Las relaciones entre los seres vivos no son estáticas. Hay una adaptación de cada uno, tendiendo al equilibrio, cuya estabilidad jamás es alcanzada, salvo como etapas sucesivas en demanda de nuevos y continuos equilibrios: es la evolución. De esta forma, el medio ambiente y los seres vivos están en permanente y continuo proceso de adaptación mutua, esto es, están evolucionando siempre. PARASITISMO Todas las acciones o actividades de los seres vivos en la naturaleza tienen su explicación si se recuerda que ellas van dirigidas a satisfacer dos necesidades biológicas: ALIMENTARSE Y PERPETUARSE. El parasitismo es, en apreciación muy simplificada e incompleta, el modo como un grupo de seres vivos (los parásitos) obtienen su alimento. (El parasitismo, en la realidad, involucra también, todo un espectro de acciones derivadas de la íntima y compleja relación que se establece entre un parásito y su hospedador.). Cuál es el alimento de los seres vivos? CATEGORIAS 1) Compuestos inorgánicos muy sencillos (C02, H20 y otros) + Energía solar. AUTOTROFOS. 2) Compuestos orgánicos ya formados. HETEROTROFOS. Entre los hetrótrofos, cómo obtienen su alimento? MODALIDADES. 1)PREDATORISMO. Un ser vivo, supuestamente más grande o al menos más poderoso, vive a expensas de otro más débil, al que destruye para alimentarse de él. 2)SIMBIOSIS- Simbiosis: Sim = juntos. biosis = vivir.

3 Es la asociación biológica de organismo pertenecientes a especies distintas a los fines de la subsistencia. Grados de la simbiosis: -Parasitismo. -Comensalismo. -Mutualismo. El parasitismo es la asociación de un ser inferior, supuestamente más débil y pequeño, menos evolucionado, con otro más fuerte y más grande, más desarrollado y evolucionado, merced a la cual el más pequeño (parásito) vive a expensas del otro (hospedador). Esta asociación no es buscada por el hospedador, no le otorga ningún beneficio, antes bien suele otorgarle perjuicios, pero es imprescindible para el parásito (salvo los facultativos) sino la logran no pueden subsistir y en tal caso desaparece su estirpe o linaje ORIGEN DEL MODO DE VIDA PARASITARIO. (CONCEPTOS UNIVERSALMENT E ACEPTADOS) 1) Todos los actuales parásitos derivan (o han evolucionado a partir de) ancestros o antepasados que han tenido vida libre o autónoma. 2) Este cambio (autónomo - parásito) no se ha producido merced a un hecho fortuito o por azar, sino a través de una modificación genética (no de una mutación), de tal forma que esta modificación es transmitida a sus descendientes. 3) La transformación sólo se produjo en quienes poseían ya las potencialidades- capacidad preexistentepara la vida parásita (PREDETERMINISMO). Es decir los genes determinantes ya existían, y lo que esencialmente ocurrió fue un cambio de frecuencia y de disposición de dichos genes. (Antiguamente se pensaba que se trataba de mutaciones). 4) Jugó un rol fundamental para la subsistencia de los parásitos la capacidad innata de los más fuertes, o sea, la selección natural de los más aptos. Los más aptos no fueron necesariamente los más fuertes, sino los menos perjudiciales para el hospedador. 5) Salvo poquísimas excepciones, la transformación en parásitos estuvo acompañada de la pérdida de la anterior forma de visa (libre o autónoma). Los pocos que mantuvieron las dos modalidades se denominan parásitos facultativos. Las relaciones entre los seres vivos no son estáticas. Existe una dinámica en la cual, cada uno va adaptándose a otro u otros, buscando un equilibrio. Por ello, naturalmente, el parasitismo evoluciona hacia el comensalismo. COMENSALISMO Es una asociación idéntica a la del parasitismo, salvo que el hospedador no sufre menoscabos y perjuicios. Pero las fronteras que separan ambas modalidades son difusas, no bien definidas. La pandemia de SIDA (hosp. inmunodeficiente) está comenzando a aclarar muchos casos. MUTUALISMO Es este caso, los seres asociados no sólo no se perjudican entre sí. Por el contrario, ambos obtienen beneficios. En el devenir del tiempo ambos socios se vuelven dependientes entre sí, al punto que ninguno de ellos pueden vivir separados. La asociación se vuelve indispensable o imprescindible para ambos, separados perecen. Es común que muchas personas, legos y profanos, denominan simbiosis al mutualismo. En realidad es una modalidad de simbiosis, tanto como el parasitismo. ENDOSIMBIOSIS Se da el nombre de endosimbiontes a pequeños organismos (sólo visibles con microscopía electrónica) que viven en el citoplasma, cerca del núcleo, de otros organismos pequeños (visibles con microscopio óptico), quienes no lo rechazan, los aceptan. Estos endonsimbiontes tienen la propiedad de ser proveedores extracromosómicos de información genética del organismo hospedador, y la resultante es que le modifica su metabolismo, por ende, sus capacidades. (En el caso de protozoarios parásitos modifica su toxicidad, virulencia, resistencia a drogas o medicamentos, etc). Es un fenómeno recientemente descubierto y sus conocimientos aún son exiguos. Son endosimbiontes de bacterias los episomas y bacteriófagos, de protozoarios los son ciertos virus y organismos con estructuras similares a bacterias.

4 MODALIDADES DE PARASITISMO Y TIPOS DE PARASITOS Y HOSPEDADORES DERIVADOS DE ELLAS. El parasitismo tiene 2 protagonistas: - parásito. - hospedador (huésped=hospedero) PARASITOS 1) OBLIGADOS: Giardia Lamblia. Naegheria fowleri FACULTATIVOS: Strongyloides stercoralis, Amebas autónomas facultativas. 2) PERMANENTES: PEDICULUS HUMANOS CAPITIS (Piojo de la cabeza) PERIODICOS: Ancylostoma duodenale (H LI LII LIII LIV LV A). TEMPORARIOS: Triatoma infestans (vinchucas), Anopheles pseudopunctipennis (mosquito). Su aceptación no es universal. Controversia algunos consideran que no es parsitismo sino micropredatorismo. 3) ECTOPARASITOS o externos: sarcoptes scabiei (agente de sarna). ENDOPARASITOS o internos: Mansonella ozzardi (filaria tucumana) Se reconocen grados de endoparasitismo. 4) ESTENOXENOS: Taenia solium (lombriz solitaria) EURIXENOS: Toxoplasma gondii Reconoce grados. A) Tipos de HOSPEDADORES DERIVADOS DE ESTA CUALIDAD PRINCIPALES ACCESORIOS ovinos, vacunos,etc. Fasciola hepática: humanos 5) PARASITOS HETEROXENOS- Taenia saginata (vacunos-humanos) Tipos de HOSPEDADORES DERIVADOS DE ESTA CUALIDAD. A) INTERMEDIARIOS DEFINITIVOS 6) PARASITOS HABITUALES. PARASITOS EXTRAVIADOS. Tipos de HOSPEDADORES DERIVADOS DE ESTA CUALIDAD. A) HOSP. NORMALES. HOSP. VICARIANTES. OTROS TIPOS DE PARASITOS OTROS TIPOS DE HOSPEDADORES 7) ERRATICOS. D) COMPLETOS. 8) FALSOS O PSEUDOPARASITOS. INCOMPLETOS. 9) ACCIDENTALES. 10) HIPERPARASITOS, ETC. E) ACTIVOS. PASIVOS, ETC.

5 SISTEMATICA DE LOS PARASITOS DEL HOMBRE EN GRANDES TRAZOS FILOS REINO PROTISTA SUB REINO PROTOZOA SACOMATIGOPHORA(amebas y flagelados) CICLOPHORA (ciliados) APICOMPLEXA ( apicomplejos = esporozoarios) MICROSPORA (microsporidios) REINO ANIMAL FILOS PLATHYHELMINTES ASCHELMINTES cestodes trematodes nematodes ARTROPODA REPASO DE ALGUNAS CARACTERÍSTICAS DE LA ANATOMIA E HISTOLOGIA DEL INTESTINO HUMANO Anatomía: Intestino - delgado. - grueso. Intestino delgado Duodeno cm long. (10% del total) Yeyuno-35% de longitud total límites fronterizos imprecisos íleon- 55% de la long. total Inicia en el píloro (anillo muscular contráctil que lo separa del estómago) y finaliza en la válvula íleo -cecal (lugar donde desemboca en el intestino grueso). En la persona vive mide 2 a 3 metros de longitud, tiene numerosos pliegues o arrugas (como un acordeón) las que se denominan válvulas conniventes. En el carácter distendido alcanza 5 a 6 metros. Su superficie no es plana pues la capa histológica interna más superficial, la mucosa, presenta en su superficie numerosas y pequeñas salientes, cónicas o triangulares, llamadas vellosidades, muy próximas entre sí ( pueden existir 1000 o más por cm2). Entre las vellocidades, en el fondo, se forma una depresión o habitáculo llamado cripta. GLOSARIO: INTESTINO PROXIMAL= corresponde al primer tercio del intestino delgado (duodeno + parte de yeyuno).

6 QUIMO INTESTINAL= papilla que evacua el estómago al intestino, está compuesta por alimentos en digestión. ciego Intestino grueso colon ascendente colon transverso colon descendente colon sigmoideo recto Inicia en el ciego y termina en año ( anillo muscular contráctil). Longitud:1,5-2 metros. Inextensibles: no poseee válvulas conniventes. No posee vellosidades en su superficie, la cual es plana. Las criptas sí están presentes y son más profundas. Estas son invaginaciones que también reciben el nombre de glándulas de Lieberkuhn. El ciego tiene 4-8 cm de longitud, La válvula ileo cecal no posee esfínter muscular. INTESTINO DELGADO Histología. Reviste la superficie interna del intestino delgado una capa histológica llamada MUCOSA, que tiene dos componentes: un epitelio de revestimiento llamado EPITELIO DE LA MUCOSA constituido por una capa simple de células cilíndricas dispuestas en emp alizada, la cual está apoyada en lo que se llama LAMINA PROPIA DE LA MUCOSA. Esta última esta compuesta por tejido conectivo y algunas fibras musculares lisas, y tiene infiltrados normalmente algunos linfocitos, macrófagos, neutrófilos, eosinófilos, plasmo citos, etc. En la lámina propia de cada vellosidad se origina un vaso linfático (quilífero central) y a cada vellosidad llega una arteriola, que se capilariza, y sale una vénula. Las demás capas histológicas están señaladas en el dibujo esquemático, CAPA INCONMOVIBLE O CAPA DE MUCUS-GEL: Es un material fluido, viscoso casi líquido, que llena las criptas y el espacio entere las vellosidades hasta un tercio de la altura de las mismas. No se ve arrastrado por el flujo algo turbulento del quimo intestinal ni por el movimiento peristáltico, aunque se renueva independientemente. No aparece en los preparados histológicos montados porque el procesamiento técnico lo ha dsuelto y ha desaparecido. CELULAS DEL EPITELIO DE LA MUCOSA 1)Enterocitos, son los predominantes. Funciones absortivas, secretoras, digestoras de algunos nutrientes (disacáridos), etc. 2)Células caliciformes (productoras de mucus) 3)Células de Panneth. 4)Células argentafines. ULTRAESTRUCTURAS A DESTACAR GLICOCALIX: Superficie de la última capa de la superficie de la célula (en este caso, los enterocitos, es la de los microvellos), CELULAS M : Células especializadas en captar antígenos del lumen intestinal (tanto formas como bacterias y protozoarios no invasores, como solubles, caso de excreciones, secreciones de distintos gérmenes). Se las considera puertas de entrada o ventanas para ingresar antígenos, que viajan a los folículoide, ya sea vía macrófagos, linfocitos o vénulas. No digieren ni procesan al antígeno, sólo transitan por la célula. A lo sumo pueden partirlos en trozos más pequeños. También, los linfocitos pueden ingresar y transitar por el citoplasma de ellas (diapédesis) rumbo al lumen intestinal. En algunos casos se comportan como células trampa cazalobos (caso cryptosporidium parvum). Se las considera integrantes del sistema inmune. INTESTINO GRUESO Histología= idem a la del intestino delgado que no poseen vellosidades y la capa muscular longitudinal incompleta (reducida a 3 bandas longitudinales que corren paralelas). Ausencias de válvulas conniventes. Las demás capas histológicas están señaladas en el dibujo esquemático.

7 INTESTINO DELGADO. HISTOLOGIA Folículos linfoides En intestino delgado son escasos, pero su número va incrementándose en la medida que se aproxima al intestino grueso. En intestino grueso se producen acúmulos de folículos linfoides y tales acúmulos se denominan Placas de Peyer. EL TRACTO GASTROINTESTINA ES EL MAS GRANDE ORGANO LINFOIDE DEL CUERPO Vida o longevidad de un enterocito: 4-5 días. La dinámica de la renovación del epitelio de la mucosa (sana)es entonces producida en ese tiempo. DEL ANALISIS COPROPARASITOLOGICO TIPOS DE MUESTRAS FECALES El ser humano suele efectuar tres tipos de evacuaciones de vientre, a) FORMADAS O MOLDEADAS, b) AMORFAS y c) de ESTREÑIMIENTO. Heces Formadas Son resultantes de la ingestión de una dieta mixta equilibrada o bien balanceada, donde los alimentos han sido correctamente digeridos, la velocidad de tránsito (1 a 2 evacuaciones cada 24 horas, lo más común es 1) y no existan patologías anatómicas. Fisiológicas, neoplásicas, etc., del tubo digestivo y /o sus glándulas anexas Son cilíndricas, blandas o maleables, se pliegan sobre sí mismas cuando tomas contacto con el fondo o piso del recipiente en que se recogen. De color pardo con distintas intensidades, según la dieta ingerida. Olor: sui-géneris (fecaloide no intenso). b) Heces AMORFAS Heces no formadas que toman la forma del recipiente en que se recogen. Señalan un hecho anormal, no necesariamente una patología. Pueden ser causas: Ingesta de purgantes o laxantes, ingesta de dieta con exceso de fibras vegetales, Exceso alimenticio que ha sobrepasado la capacidad digestiva del aparato digestivo (exceso de grasas las grasas no digeridas o incompletamente digeridas actúan como un lubricante que acelera la velocidad del tránsito e impide la deshidratación; exceso de hidratos de carbono donde los disacáridos en exceso no pueden ser totalmente absorbidos y generan un fenómeno osmótico- secretor, etc); Infecciones intestinales - suelen ser la causa más común- por distintos agentes de diarrea virus, bacterias, parásitos, hongos, etc); por hiperperistaltismo provocado por diversas causas, etc. Las heces amorfas presentan distintos grados: -pastosas -pastosas semilíquidas. -líquidas. -muy líquidas. Tienen colores variables, desde el pardo normal al pardo muy claro u oscuro, pueden ser incoloras o de colores extraños (depende de alimentos- caso de remolacha - color rojo violáceo), pueden ser negras (en este caso es muy probable que se trate de una melena-hemorragia grastrointestial alta) pueden ser rojas (existencia visible de sangre por hemorragias en las partes bajas del intestino). El olor también puede ser variable, desde inodoras o fétidas, olor butírico y otros. d) Heces de estreñimientos No son aptas para el análisis coproparásitológico por distorsión y/o destrucción de protozoarios (excesiva deshidratación). También de larvas de algunos helmintos. Se las reconoce por ser duras o muy duras, están comúnmente compuestas por pequeñas masas de forma y tamaño variables, yustapuestas adosadas unos con otros. Color pardo fuerte por lo general HECES AMORFAS=HECES DIARREICAS. HECES AMORFAS CON SANGRE= HECES DISENTERICAS. INFLUENCIA DE LA CONSISTENCIA DE LAS HECES EN ESTUDIO PARASITOLOGICO a)heces formadas Es esperable la ausencia de tropozoíto de protozoarios, o muy alterados. Es óptima para el hallazgo de quistes maduros de protozoarios, lo que en algunos casos 8amebas) es importante. También es adecuada para la pesquisa de ooquis tes de coccidios (apicomplejos).

8 Los huevos y larvas de helmintos están presentes y pueden ser detectados. b)heces pastosas y semilíquidas Tropozoítos de protozoarios: según la especie pueden encontrarse en cantidades importantes o ser escasos. Si el material fecal se ha colectado sin el agregado del líquido preservante, pueden vérselos con movimiento, sobre todo si la observación es efectuada poco tiempo después de la evacuación. Hay casos en que será necesario recoger la muestra fecal sin adición de estos líquidos preservantes (caso Entamoeba histolytica) Quistes de protozozario = pueden estar presentes y por lo general inmaduros o pueden estar ausentes. Huevos y larvas de helmintos = presentes. Idem ooquistes de coccidios. c) Heces líquidas o muy líquidas Tropozoítos de protozoarios = presentes, a veces en abundancia. Quistes, protozoarios = presentes, a veces en abundancia. Quistes protozoarios = escasos o ausentes, inmaduros. Ooquistes coccidios, larvas y huevos de helmintos, presentes en pequeños números o ausentes en algunos casos. PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS PARA EL ANALISIS COPROPARASITOLOGICO NOTA PREVIA: deberán realizarse observaciones microscópicas, de preparados efectuados con: - Material tomado directamente de la muestra fecal. Y - Material obtenido después de efectuar uno (o más) procesos de concentración o enriquecimiento de la muestra fecal. PREPARACIONES QUE PUEDEN EFECTUARSE PARA LA OBSERVACIÓN MICROSCOPICA. 1) Preparados húmedos en fresco. 2) Preparados húmedos con adición de un colorante de tinción positiva (de preferencia lugol). 3) Preparados húmedos con adición de un colorante de tinción negativa (de preferencia sol, de carbolfucsina diluída) 4) Preparados seco, fijados y coloreados (preparaciones permanentes) Coloraciones más comunes de uso: -Ziehl-Neelsen Acid-Fast (coccidios) (algunos microsporidios) -Weber mod. Kokoskin o Weber mod.carte/kokoskin (microsporidios) -Gomori (protozoarios en general) -Hematotoxilina férrica (protozoarios en general). PROTOZOOLOGIA (protozoarios=protozoos) FILOS SARCOMASTIGOPHORA SUBFILOS SARCODINA (amebas) MASTIGOPHORA (flagelados) Reino PROTISTA Subreino PROTOZOA CILIOPHERA (ciliados) APICOMPLEXA (apicomplexos o/ apicomplejos, coccidios)- (esporozoarios) MICROSPORA (microsporidios) Existen otros filos, pero sin parásitos del hombre. (Al menos por lo que hasta hoy se conoce) Protozoarios Hoy: Organismos unicelulares eucariotas

9 (definición). Antes: Animales unicelulares. - 80% de vida libre, 20% parásitos, comensales, mutualistas (simbiontes). -Eucariotas, pero seres formados por una sola célula habilitada o capacitada para cumplir con todas las funciones para la vida del organismo, es decir, está dotada de todos los atributos para cumplir con el metabolismo y la reproducción. Organización Célula eucariota - Membrana celular (=mem. plasmática, periplasto, plasmalema, película, etc.). - Citoplasma = en algunos dos sectores ecto y endoplasma. - Núcleo = uno o más; cuando existen o poseen más de un núcleo, estos pueden ser iguales o distintos morfológica y fisiológicamente. - Estructuras, ultraestructuras y organoides (=organelas). La mayoría comunes a las de todas las células eucariotas, otras exclusivas y específicas de ciertos protozoos. Retículo endoplasmático. Ribosomas (RNA) libres o adheridos al Sist. Retículo endoplamático. Aparato de Golgi. Mitocondrias. Sistema lisosómico (lisosomas + fagosomas) Microtúbulos. Citoesqueleto. etc. - Organoides para locomoción (pseudópodos, cilias, flagelos, micronemas, tubulos subpeculiares) para fijación ( disco suctorio), para sostén (axostilos, fibrillas, citoesqueleto, la misma membrana celular) para la internalización de sustancias formes y en solución (endocitosis, citostomas). - ENDOCITOSIS - Fagocitosis (formes) Picnocitosis ( en solución o susp. Coloidal) para excresión y secresión (citopigio, reservorio de los flagelos, exocitosis por superf. corporal), para invasión o internalización en células (complejo apical, ap. de extrusión de microsporidios, etc). Tamaño y morfología externa de los que son parásitos humanos - Tamaño pequeños, diminutos, microscópicos No obstante, gran diversidad: de 1-2 ìm hasta 100 o más. Importancia del tamaño de cada especie. Forma También diversas pero específicas para cada especie formas inconstantes formas permanentes Importancia de las mediciones, micrométricas en algunos casos. ESTADIOS EVOLUTIVOS QUE SE RECONOCEN EN LOS PROTOZOARIOS PARASITOS DEL HOMBRE. Los protozoos llevan a cabo su vida a través de distintos estadios evolutivos (formas evolutivas, fases evolutivas) bien definidas. Básicamente son 5: 1- ZOITOS 2- QUISTES. 3- GAMETOS. 4- OOQUISTES. 5- ESPOROS. 1) ZOITOS- Formas destinadas a ) llevar a cabo la vida trófica vida activa, comer, crecer- ) reproducirse asexuadamente. El vocablo zoíto nunca se emplea en forma aislada sino acompañado de un prefijo que destaca alguna cualidad morfológica o biológica: TROFOZOITO, MEROZOITO, ESPOROZOITOS, BRADIZOITO, TAQUIZOITO, etc. Reproducción asexuada significa no intercambio de material genético entre individuos distintos descendientes son réplicas de su progenitor. 2) QUISTES - Formas destinadas a la propagación de la especie o perpetuación. Permitir que un protozorio pase o llegue a otro hospedador - FORMAS DE TRASLADO. Son generados por zoítos.

10 Características: *) Organismo en estado de vida latente (metabolismo reducido al mínimo). **) formas de resistencia a condiciones ambientales externas o del interior del hospedador. ***) Tener incorporada una reproducción asexuada, (multiplicación de los núcleos) hay excepciones. - Quistes destinados a abandonar el hospedador. - Quistes que no salen al exterior (quistes en tejidos del hospedador). Pasan al siguiente hosp. por predatorismo. Existen especies de protozoos que perdieron la capacidad de formar quistes. 3) GAMETOS. Formas diferenciadas ( a partir de zoítos) destinados a llevar a cabo la reproducción sexuada (significa intercambio de mat. genético entre individuos.) GAMETOS MASCULINOS: Microgametos. GAMETOS FEMENINOS: Macrogametos. 4) OOQUISTES - Tienen atributos en común con los quistes y otros que los distinguen de ellos: Son resultados de una reproducción sexuada (no son la transformación de un zoíto como los quistes). También son formas de traslado (hosp _ hosp). Una vez formados, también tienen incorporada una reproducción asexuada, como los quistes. Existen 2 tipos de ooquistes: -Unos que abandonan al hospedador pasando al medio externo. En este caso son formas de resistencia y son organismos en estado de vida latente (igual a los quistes). - Otros que nos son formas de resistencia, que no pasan a tener vida latente pero que también son formas de traslado. Estos en general en insectos y pasan al siguiente hosp. por la picadura que el insecto ejecuta sobre éste. 5) ESPOROS. Tienen características en común con los QUISTES: - Se generan de zoítos. - Son formas de traslado que abandona al hosp. y salen al medio externo. - Son formas de resistencia y se encuentran en estado de vida latente. Se diferencian de los quistes en: - No tienen reproducción incorporada. - Poseen una original ultraestructura llamada aparato de extrusión merced al cual invaden activamente al nuevo hosp. En opinión personal, debiera crearse un vocablo especial que reemplace a la denominación ESPOROS. REPRODUCCION Considerando a todos los protozoarios de la Naturaleza (es decir, no sólo a los parásitos), estos muestran una diversidad asombrosa y fascinante de formas de reproducción. Los que son parásitos del hombre sólo hacen uso de un número limitado de esos mecanismos. Los describiremos para cada grupo de parásitos en particular. Sólo anticiparemos: Todos los protozoarios que vamos a estudiar tienen reproducción asexuada, por uno o varios mecanismos. Una parte, además de reproducirse asexuadamente, también lo hace por mecanismos sexuados. FLAGELADOS Flagelo. Definición: prolongación externa (proyección hacia el exterior) diferenciada del citoplasma, filamentosa, larga, delgada y permanente. Nacen en el citoplasma, de un corpúsculo llamado blefaroplasto (también, cuerpo basal), hacen un recorrido por él, corto o largo (rizonema) y emergen al exterior (flagelo libre) Filo: Sarcomastigophora Protozoarios que poseen como órganos de locomoción pseudópodos y/o flagelos. Subfilo: Mastigophora. Poseen uno o más flagelos, que constituyen el organoide constante y y fundamental de locomoción- Algunas especies tiene la cualidad de producir pseudópodos también, pero éstos desempeñan un rol secundario - FLAGELADOS.

11 Subfilo: Sarcodina. Organoide fundamental son los pseudópodos. Algunas especies poseen fases evolutivas flageladas pero su rol, si bien necesario, nos es fundamental sino accesorio. FLAGELADOS- Grup o más numeroso de protozoos que existe en la naturaleza por número de especies. Se los encuentra en los más diversos hábitats a condición de que el medio sea acuoso. Como parásitos, no se ha descubierto ninguna especie animal o vegetal que no sea hospedador de uno o más flagelados. Existen flagelados que se encuentran en la categoría de organismos autótrofos (poseen clorofila y utilizan como nutrientes C02 y H20 para elaborar sust. orgánicas)-(un dolor de cabeza para los estudiosos de la sistemática)- Con la orientación que damos a nuestra materia, no nos resulta de gran utilidad la sistemática puntillosamente estudiada. Por ello no la desarrollamos. Más práctico y didáctico nos resulta clasificar a los flagelados que nos interesan en dos grupos, basándonos en el criterio de localización (hábitat) topográfica en el hombre: Grupo I: Flagelados digestivos y urogenitales Especies de interés: Giardia lamblia(=g. Intestinalis=G.duodenalis) Chilomastix mesnili Trichomonas vaginalis Trichomonas hominis Trichomonas tenax Enteromonas hominis Retortamonas intestinalis Grupo II : Flagelados hemotisulares Familia Trypanosomatidae Trypanosoma cruzi Trypanosoma rangeli Trypanosoma brucei gambiense Trypanososma brucei rhodesiense Leishmania braziliensis (complejo) Leishmania donovani (complejo) Leishmania mexicana (complejo) Leishmania tropica (complejo) Leishmania peruviana Las subrayadas son las que más nos interesan por una cuestión de regionalidad y de incumbencia profesional (bioquìmicos) Filo: MICROSPORA- Microsporidios Los miscrosporidios son protozoarios parásitos intracelulares obligados, taxonómicamente agrupados en el filo Microspora. Están caracterizados por producir esporos que contienen en su interior un excepcional aparato tubular de extrusión, sólo visible en detalle con microscopía electrónica, merced al cual logran atravesar el periplasto de una célula huésped e inyectar en su citoplasma el germen infeccioso que portan (esporoplasma). MORFOLOGIA DE LOS ESPOROS (ULTRAESTRUCTURAL) Los esporos de las especies que hasta hoy han sido detectadas parasitando al hombre son uniformemente ovoides y sus tamaños varían, de acuerdo a la especie, entre 1 y 5 mm. La microscopía electrónica revela que están dotados de una gruesa pared contenedora compuesta por dos capas: una externa (exosporo), electróndensa, lisa o rugosa y proteinacea, y otra interna (endosporo), traslúcida, quitinosa y más espesa que la anterior. Tan peculiares atributos le confieren dureza y resistencia sin impedirles ser permeables, y por otra parte, les otorgan rasgos morfológicos que contribuyen a distinguirlos rápidamente de otras células tales como bacterias, levaduras y demás protozoarios, con las que suelen estar acompañados en algunos especimenes sometidos a estudio con el microscopio electrónico. En su interior inmediatamente debajo del endosporo, existe una membrana (plasmalema) que rodea el contenido plasmático. El germen infeccioso que portan (esporoplasma) es una célula con un núcleo en unas especies y con dos yuxtapuestos, diplocarion, en otras, dentro de un citoplasma muy sencillo. El esporoplasma comúnmente ocupa el sector central y parte del posterior. El espacio remanente contra el polo posterior está

12 ocupado por una vacuola (vacuola posterior). En el primer tercio del esporo está alojada una estructura membranosa (polaroplasto) constituida por formaciones tubulares y laminares rodeadas por densos paquetes de ordenadas laminaciones de retículo endoplasmático rugoso y muy rica en ribosomas libres. Finalmente, también dentro del esporo se encuentra un excepcional aparato de extrusión, que consiste de un filamento muy largo y delgado (filamento polar) que se dispone en su mayor longitud enrrollado y rodeando al esporoplasma y con un corto tramo de trayectoria rectilínea. Esta última porción, atravesando al polaroplasto, llega con su extremo a un pequeño cuerpo que tiene la forma de un casquete (disco de enclaje) que está ubicado inmediatamente debajo del endosporo en el polo anterio, y al cual está fijado. El filamento polar aparentemente es un tubo hueco rellenado con un material almacenado en su lumen, lo que le da apariencia de cordón macizo. FISIOLOGIA DEL ESPORO Es muy original e interesante el modo de accionar del esporo para trasladar el esproplasma desde su interior al citoplasma de una célula huésped, fenómeno que se denomina germinación. Esto acontece en respuesta a estímulos específicos para cada especie. Los esporos de las especies parásitas del hombre suelen encontrar sus apropiados estímulos en determinados ambientes, tales como el lumen intestinal, el del árbol respiratorio, el del tracto urinario, el intersticio de determinados tejidos, en los fluídos que lubrican la córnea ocular, etc. Tales estímulos gatilllan, vía enzimática, un rápido desdoblamiento de un polisacáridos que llena la vacuola posterior, lo que genera abundantes moléculas de monosacáridos con el correspondiente incremento de la presión osmótica. Esto, a su vez induce el ingreso de agua a través de la pared del esporo, lo que determina una alta presión hidrostática intraesporo. Llega un momento que la misma alcanza tal grado que produce la ruptura de la pared en una parte relativamente más delgada, ubicada en el polo anterior a la altura de la inserción del filamento polar al disco de anclaje. Entonces, por dicha fractura, el filamento polar es explosivamente lanzado hacia el exterior, como una flecha, evirtiéndose sobre sí mismo y convirtiendose en un tubo hueco, sin desprenderse del disco de anclaje. La velocidad con que se desarrolla esta descarga y la fuerza que alcanza el impulso son suficientes para atravesar con su extremo distal libre la membrana plasmática de una célula localizada aún a considerable distancia. Tras brevísimo intervalo, también debido a la alta presión intraesporo, esporoplasma y polaroplasto, que se comportan como un fluido viscoso y elástico, son impelidos a transitar por la delgadísima luz de esta suerte de túnel-puente que se ha formado desde el esporo a la célula, para emerger y quedar depositados en el citoplasma de la célula penetrada. Los microsporidios son organismos filogenéticamente muy antiguos y primitivos al punto de que carecen de mitocondrias, perixomas, membranas de Golgi y otras estructuras típicas de los eucariotas. Componen uno de los grupos de parásitos cosmopolitas más numeroso, prevalente y ubicuo del reino animal ya que se los encuentra infectando a innumerables especies de invertebrados y también, aunque en menor medida, de vertebrados de las cinco clase sistemáticas, incluso el hombre. Estos parásitos son muy pequeños, de tamaño equivalente a las bacterias. Fue Nägel quien los descubrió en 1857 como parásitos del gusano de seda. En aquel tiempo no había sido creado (obviamente) el microscopio electrónico, por lo que no pudo observar las ultraestructuras de los esporos, pero una cantidad de comprobaciones morfológicas y el comportamiento biológico lo llevaron a señalar que no se trataba de bacterias ni hongos por lo que dedujo que se trataba de un nuevo tipo de organismos que se propagaba por esporos. Desde entonces el progreso en el conocimiento de estos seres estuvo a cargo de biológos, zoólogos, más recientemente veterinarios (afecta a animales utilitarios del hombre). En el campo de Medicina eran prácticamente ignorados. El primer caso humano se descubrió en Desde entonces y por espacio de un poco más de un cuarto de siglo, fueron muy pocos o raros los casos de infecciones humanas comunicadas, 3 ó 4, las que no despertaron mayor interés en el campo de la Medicina Humana y prácticamente pasaron desapercibidas. Fue recién a partir de 1985, año en que se los encontró por primera vez en un enfermo afectado por el SIDA que comenzaron a emerger como una frecuente y significativa causa de morbilidad en personas infectadas por los virus HIV. Por el contrario, desde entonces fueron muy pocos los casos comunicados de hallazgo de estos parásitos en sujetos HIV negativos o inmunológicamente sanos. (Entre estos últimos, varios con infecciones en la córnea, sitio considerado inmunoprivilegiado debido a que la respuesta inmune local es menos intensa que la respuesta sistémica - recordemos que la córnea no está irrigada por sangre y su mecanismo defensivo principal es un tanto mecánico: permanente secreción de lágrima barrida por los párpados). Actualmente ya se descubrieron varias especies asociadas con enfermedad humana, las que se encuentran clasificadas en distintos géneros: Encephalitozoon Enterocytozoon Nosema

13 Pleistophora Trachipleistophora Vittaforma. Así como también otras aún incompletamente conocidas y que hasta tanto definan su posición taxonómica se ha convenido ubicarlos en el género Microsporidium. Ejercen su parasitismo en todo tipo de tejidos y en la mayoría de los sistemas de órganos, por lo que la naturaleza de la enfermedad varía en la localización y extensión de la infección. Sin embargo la mayoría de los casos comunicados corresponden a infecciones intestinales, siendo la diarrea el desorden clínico más común. Pero, siempre tratándose de pacientes con SIDA o infección por HYV, se los ha encontrado asociados con bronquiolitis, nefritis, uretritis, cistitis, hepatitis, peritonitis, Keratoconjuntivitis, colescistitis acalculosa, colangitis, prostatitis, sinustis, miositis, neumonía, etc. Desde ya debemos aclarar que en muchos casos las patologías señaladas mostraban a los microsporidios coexistiendo con otros agentes infecciosos, como también casos donde no se investigaron todos los agentes infecciosos hasta hoy reconocibles que pudieran estar coexistiendo. Obviamente, también aquellos donde el único agente existente era microsporidios con estudios exhaustos para descartar con otro agente presente. De todos modos, esto abre un paréntesis hasta aclarar el rol que juegan los microsporidios en todos los casos. Debe tomarse en consideración que el conocimiento de estos parásitos y el perjuicio que pueden provocar es muy reciente en la Medicina Humana. Del ciclo evolutivo: Se conoce que existen en la naturaleza especies de microsporidios que parastan animales y llevan a cabo su vida a través de ciclos muy complejos (los hay que son heteroxenos - necesitan más de un huésped para concretar todas las etapas de su vida - existen especies que ejecutan formas de reproducción sexuada, hay algunos que producen más de un tipo de esporos para propagarse en un caso tres tipos distintos, etc). Los que se han descubierto parasitando al hombre son todos monoxenos y tienen ciclos evolutivos muy sencillos. El primer hecho a destacar es que estos parásitos desarrollan en el interior de las células exclusivamente. Y una vez invadida la célula huésped todas las etapas evolutivas las llevan a cabo en esa célula, es decir, no pasan a otra para desarrollar otra fase o para completar el ciclo. Es ésta una clara diferencia con el ciclo de vida que realizan los coccidios. No obstante la simplicidad de sus ciclos, no todas las especies evolucionan del mismo modo, existen variaciones, pero todos ellos coinciden en que, una vez internalizados en apropiadas células (cada especie puede evolucionar en uno o más tipos de células del hombre), desarrollan su vida a través de dos fases. 1- Fase proliferativa: el esporoplasma se transforma en trofozoíto que crece y comienza a multiplicarse por divis iones binarias sucesivas en unas especies o por divisiones múltiples en otras. Los organismos formados, numerosos, son diminutos. 2- Fase esporogónica (asexuada): como cumpliendo una programación genética, en un momento dado cesan las mltiplicaciones y se inicia la transformación de todos los organismos formados en esporos. Cuando los esporos completan su maduración acontece la exocitosis, es decir, provocan la ruptura de la célula y su liberación. Los esporos están destinados a cumplir dos funciones: a) Ser formas de propagación de la especie a otros huéspedes y b) extender la infección en el huésped, es decir, invadir otras células del hospedador, ya sea in situ, ya sea vehiculizados por humores internos, ser trasladados a otros sitios con los que existe conexión luminal (por ejemplo: localizados inicialmente en pulmón, ser vehiculizados con las secreciones respiratorias que se degluten al tubo digestivo) y, ya sea vehiculizados por macrófagos migrantes a otros órganos con los que el sitio inicial de infección no tiene conexión luminal (por ejemplo: de una localización primaria en intestinos, los macrófagos los fagocitan y lo transportan al riñón, donde producen otro foco infeccioso). La mayoría de las especies que se han encontrado en el hombre tienen localizaciones en células de conductos cuyos lúmenes se conectan directamente con el exterior ( caso del tubo digestivo, árbol respiratorio, ap. urogenital, etc.), de modo que la salida al exterior de los esporos es fácilmente comprensible. También cuando se localizan en la superficie corporal (ej: la córnea ocular). Pero existen especies que se localizan en tejidos no comunicados directamente con el exterior y los esporos sembrados quedan atrapados en el intersticio tisular (caso de localizaciones en tejido muscular). En estos casos el mecanismo de propagación será producido por el predatorismo (consumo del huésped receptor de la carne del huésped parasitado). Otro fenómeno a señalar es que, con cierta frecuencia, una misma célula es blanco de más de un esporo que la atravesó con su filamento polar en tiempos distantes uno de otro. Aunque no se conoce cuantos esporoplasmas pueden evolucionar en una misma célula, se detectan células parasitadas donde los parásitos se encuentran en disímiles etapas evolutivas.

14 También es de destacar que ha sido comprobada la transmisión transplacentaria (congénita) de microsporidios en algunos animales (zorros,perros). Del diagnóstico: El diagnóstico de las infecciones microsporidianas está basado en al demostración morfológica de los parásitos (esporos y /o formas evolutivas) en biopsias de tejidos o en especimenes tales como evacuaciones de vientre (materias fecales), Fluidos duodenales/yeyunales aspirados, orina, esputo, descarga nasal, fluidos de lavado broncoalveolar, líquido cefalorraquídeo e improntas de fluidos obtenidos por contacto, hisopado o raspado de superficies corneal y conjuntival. Alcanzar la identificación a nivel de género y especie de un microsporidio que se encuentra infectando a un humano requiere, en primer lugar, de la microscopía electrónica para distinguir caracteres tales como la configuración del núcleo del esporo, número de giros del filamento polar en el interior del esporo y la interface parásito-célula huésped. También es necesario determinar la especificidad del parásito por células del huésped y los patrones de órganos y tejidos comprometidos. El algunos casos puntuales de especies morfológicamente indistinguibles, es necesario recurrir además a pruebas inmunológicas para lograr el resultado buscado. Sin embargo, en la mayoría de los casos, el diagnóstico de infección microsporidiana, aunque sin lograr la filiación del agente al nivel antes señalado (de género y especie), puede lograrse mediante microscopía óptica. Este procedimiento está basado en la demostración de algunos detalles mofológicos de los esporos y sus propiedades tintoriales, utilizando métodos de coloración recientemente perfeccionados. Paralelamente con las técnicas de coloración directa de esporos, fueron perfeccionados otros procedimientos tales como los de fluorescencia directa empleando fluorocromos, los de inmunofluorescencia indirecta usando anticuerpos mono y policlonales, a más de pruebas basadas en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). MOFOLOGIA DE LOS ESPOROS VISUALIZADOS CON MICROSCOPIA OPTICA O DE LUZ Antes de su descripción, consideramos oportuno señalar dos aspectos sobre este tema. Primero, que vamos a referirnos exclusivamente a las especies que son detectables en las heces humanas, que es sobre las cuales nuestra Cátedra hizo alguna experiencia, y en segundo lugar, no solo vamos a referirnos a la técnicas de coloración recientemente desarrolladas y perfeccionadas sino también a una modificación de la coloración de Ziehl-Neelsen Acir-Fast que se desarrolló en nuestra Cátedra, la cual tiene utilidad limitada. Específicamente, las descripciones que siguen corresponden a las coloraciones de Weber mod.kokoskin y Ziehl-Neelsen Acid-Fast modificada. Aunque en el texto se señalan dos especies como causantes de microsporidiosis intestinal, Enterocytozoon bieneusi y Encephalitozoon (Septat) intestinalis, debe aclararse que una tercera especie, Encephalitozoon cuniculi, ha mostrado capacidad para parasitar distintos órganos, recientemente se ha descubierto como causante de microsporidiosis intestimal también. La descripción que sigue está limitada a los esporos de las dos especies hoy conocidas como causantes de microsporidiosis intestinal., Entercytozoon bieneusi y Encephalitozoon intestinalis, los cuales son posibles detectar en frotis fecales fijados y coloreados. Los de ambas especies se tiñen con los métodos recientemente desarrollados que emplean el colorante Chronotrope 2R (4) (5) (8) (14) (19), mientras lo de E. bieneusi también lo son con métodos acid-fast (20). Las imágenes que se aprecia con ambos tipos de coloraciones son prácticamente idénticas. Auque sea obvio, es oportuno recordar que los esporos son cuerpos tridimensionales. Al fabricar un frotis fecal, estos cuerpos quedan estampados sobre el vidrio y pasan a figuras bidimensionales, con una forma, un tamaño y un contenido interno. Una vea coloreadas, las imágenes que se perciben de ellos son un tanto disímiles, sobre todo de las estructuras internas que se logran teñir, en lo que respecta a las formas que adquieren y al lugar en que resultan localizadas. Esto es debido, en primer lugar, a que la posición de los esporos tenían en el espacio en el momento de quedar impresos no era la misma para todos ellos, y en segundo lugar, a que el procedimiento técnico involucra una acción mecánica, por lo que la morfología original puede sufrir distorsiones. Éstos son los pormenores que deben ser tomados en consideración para su reconocimiento. Mayoritariamente se presentan con forma oval, algo mas cortos y anchos (redondeados) los E. bieneusi, con contornos bien definidos, sin brotaduras ni germinaciones. Es común que una parte de ellos se muestre más alargados, piriformes, falciformes, fusiformes o con otros tipos de deformaciones. Son muy pequeños, diminutos, semejantes a algunas bacterias o levaduras pequeñas. Sus tamaños están entre 1,0 y 2,5 ìm, siendo algo mayores los de E. intestinalis. Es necesario realizar mediciones micrométricas.

15 En el interior del esporo se tiñen diferencialmente dos elementos formes. Uno tiene generalmente la forma de un gránulo de tamaño variable, que puede llenar desde el 25 al 60% del espacio interior. Comúnmente está ubicado en uno de los polos, raramente está ligeramente separado de la pared. Se tiñe intensamente de color rojo fuerte con el cromotropo y de fucsia casi negro con la fucsina. Se ha sugerido que este cuerpo correspondería al conjunto polaroplasto-esporoplasma (14). El segundo elemento forme, que no es visible en todos los esporos, es un cuerpo que se muestra con la forma de una barra de variable espesor, a veces recta y otras curvada. Se tiñe con distintos grados de intensidad. Está ubicada fortuitamente en cualquier lugar. Puede vérsela nítidamente separada por el gránulo anteriormente descripto, yuxtapuesta o parcialmente sobrepuesta al mismo, contra la cara interna de la pared del esporo y separada de ella. Se la ha identificado como una porción del filamento polar(10). Debe agregarse que, salvo raras excepciones, los elementos formes, no llenan completamente el espacio interior, siempre puede observarse un área equivalente al 25-75% del mismo que se muestra aparentemente vacía, transparente y débilmente teñida de rojo o fucsia. También que, por artilugios derivados de la técnica, en algunos esporos los elementos formes presentan otras formas caprichosas. La mayoría de las bacterias, levaduras y otros detrítus orgánicos presentes en las heces toman la coloración de contraste de los métodos usados, pero con frecuencia suelen estar presentes algunos de estos microorganismos con las mismas afinidades tintoriales de los esporos. No obstante, éstos puede discernirse por diferencias de formas, tamaño, mostrar brotaduras o gemaciones, adquirir tinción total y uniforme del contenido celular sin zonas claras, a más de no mostrar los elementos formes internos que caracterizan a los esporos. Es importante fabricar frotis fecales muy finos o delgados, observar con microscopio dotado de buen poder de resolución y contar con frotis testigo positivo o, en su defecto, un cierto número de microfotografías de diversas imágenes de esporos, para comparación al menos hasta que se adquiera experiencia. Los métodos de coloración basados en el cromotropo son actualmente los más indicados para la pesquisa de estos parásitos. Sin embargo, no hemos excluido la nueva modificación de la coloración de Ziehl-Neelsen Acid-Fast (1) (2) debido a que esta técnica puede ser usada rutinariamente para detectar ooquistes de Cryptosporidium parvum y de otros coccidios intestinales, y que con ella también pueden descubrirse esporos de E. bieneusi. ALGUNOS ASPECTOS DE LA PATOLOGÍA GENERADA POR LAS ESPECIES CAUSANTES DE MICROSPORIDIASIS INTESTINAL EN SUJETOS SIDOSOS O HIV-POSITIVOS El intestino es uno de los sitios iniciales de infecciones por distintas especies de microsporidios, pero el término microsporidiosis intestinal se otorga esencialmente a aquellas cuyos ciclos de desarrollo se realiza en los enterocitos de la mucosa intestinal. Como dijimos, tres son las especies hasta hoy reconocidas con esa especificidad(ver páginas anteriores). E. bieneusi es la especie con mayor prevalencia como causa de diarrea crónica en pacientes HIV positivos con severa inmunodeficiencia (contajes de CD4 por debajo de células/ mm 3 ) (1,3,5,27,28). También es responsable de diarrea autolimitada cuando la deficiencia celular es menos marcada (28). No obstante, algunos investigadores han cuestionado la asociación infección intestinal por E. bieneusi-diarrea, basándose en un estudio prospectivo de dos grupos relativamente pequeños de personas HIV positivas, con y sin diarrea, en el que no encontraron diferencia estadística significativa de ocurrencia del parásito entre ambos grupos, algunos de los que no padecían diarrea presentaban bajos contajes de CD4 (17). La realidad es que aún no se han aclarado todos los factores y mecanismos fisiopatogénicos de esta enteropatía (1,7,22). E. intestinalis ha sido descripta mas recientemente (1993) y aparenta ser causa de diarrea crónica de idénticas características clínicas que las de E. bieneusi (1,4,7,18,28). Con estas dos especies, los estudios anatomopatológicos de la mucosa digestiva, en la mayoría de los casos, no pusieron en evidencia más distintas alteraciones, pero una minoría de casos muestra un espectro de alteraciones con virtual obliteración de la lámina propia por células inflamatorias y un gran incremento de linfocitos intraepiteliales. La diarrea, que es crónica, está caracterizada por la emisión de 2 a 8 deposiciones por día (raramente mas de 20), acuosas o pastosas de gran volumen, sin sangre ni mucus. Comúnmente se acompañan de malabsorción y debilitamiento. La fiebre generalmente está ausente. En los casos de E. bieneusi, con poca frecuencia, la infección se extiende al tracto biliar, vesícula biliar, células no parenquimatosas del hígado, ducto pancreático y a los epitelios nasal, traqueal y bronquial. E. (S) intestinalis infecta primariamente a enterocitos del intestino delgado pero con relativa frecuencia se extiende a otros epitelios (del árbol biliar, bronquial, nasal), así como también a otros tipos de células como macrófagos, fibroblastos, células endoteliales de

16 vasos sanguíneos e incluso a otros órganos sin conexión luminal con el intestino, tal como sucede con riñón. En ambas esepecies, los síntomas predominantes son los intestinales. ALGUNOS ASPECTOS DE LA PREVALENCIA Y PATOLOGÍA EN SUJETOS HIV- NEGATIVOS Contrastando con la relevante incidencia mundial de la microsporidiosis intestinal en pacientes HIV positivos (alcanza índices del 7 al 50% cuando son seleccionados por padecimientos diarreicos en ausencia de otras causas infecciosas de diarrea reconocibles) (2,33,38) es pequeño el número de casos informados de personas HIV negativas y de otras con distintas patologías, o sanas (5,19,25,26,28). En una reciente revisión de la bibliografía (1996) sólo se logró detectar 9 casos sintomáticos (25). Seis de ellos provienen de un estudio prospectivo realizado en Niamey, Níger (África) (1992) sobre niños con diarrea (positivos 6 / 593, 1,0%) y sin diarrea (positivos 2/397, 0,5%). No se investigó infección por HIV en ninguno de los niños, pero quedó aclarado que en dicha área geográfica la prevalencia de esta infección es muy baja ( citado 25,26,28). Autores de este estudio han comunicado en 1997 la ocurrencia de esporas de microsporidios en las heces de dos niños HIV- seronegativos residentes en Tucumán (24) (Congreso Nacional de Bioquímica- Cubra lv). Los pocos comunicados de microsporidiosis intestinal en sujetos HIV negativos relata cuadros de infecciones asintomáticas, aunque todos coinciden en señalar que son necesarios nuevos estudios para evaluar la prevalencia y sintomatología clínica, así como también el potencial patogénico de estos organismos en la población HIV negativa. OTRAS ANOTACIONES ) De la mayoría de las especies se han logrado cultivos in vitro en líneas celulares. Por el contrario (hasta donde llega nuestra información año 1997-) no se ha tenido éxito en lograrlo con E. bieneusi. Es más, no se ha logrado infectar con esta especie ningún animal por lo que se carece de un modelo experimental. Es la especie, por lejos, más prevalentemente detectada en humanos y se sospecha que se trata de una especie específica del hombre. ) Es oportuno señalar dos advertencias respecto al diagnóstico cuando se emplean los métodos de microscopía óptica; a) los esporos pueden provenir de una infección localizada en el aparato respiratorio en la que el huésped ha deglutido secreciones del mismo y los esporos son detectados en las heces, y b) los esporos pueden provenir de un alimento de origen animal que tenía incluidos parásitos en sus tejidos, los que hicieron un tránsito intestinal inofensivo por el tubo digestivo (falsa infección). EPIDEMIOLOGIA Las fuentes y otras vías de infección y/o transmisión de las infecciones humanas aún no han podido ser demostradas fehacientemente, pero tomando en consideración la amplia difusión zoológica de estos parásitos y la muy común descarga al exterior de los esporos por las mas diversas vías de excreción y secreción de los huéspedes, es fácil comprender la abundancia de microsporidios en el medio ambiente y que la exposición humana a ellos es inevitable. Años atrás se efectuaron mediciones serológicas de anticuerpos humanos contra Encephalitozoon cunuculi (cepa murina cultivada in vitro) en sujetos sin signos clínicos de enfermedad y sus resultados, interpretados sobre la base de reactividad cruzada, sugieren la verosimilitud de tal exposición o que realmente pudieran estar crónicamente infectados por estos organismos. Los resultados señalaron alta incidencia sobre todo en habitantes de países tropicales, subtropicales y del mundo en vías de desarrollo (esto es, mal saneamiento ambiental, mala o ausencia de educación para la salud). No ha sido aclarado aún si una infección activa es resultado de una implantación reciente del parásito o de una infección latente adquirida antiguamente. Tampoco ha podido ser verificado la transmisión transplacentaria, evento que ha sido verificado en algunos mamíferos. Posibles fuentes de infección son personas o/y animales infectados.sin embargo, no se ha verificado que las microsporidiosis humanas sean una zoonosis ni se han descubierto vectores invertebrados u hospedadores intermediarios de las infecciones del hombre y de otros mamíferos, posibilidades que tampoco han sido descartadas. La adquisición de parásitos procedentes de humanos infectados es una posibilidad obvia dada la comprobada liberación de esporos por heces, orina, secreciones respiratorias y secreciones conjuntivooculares. Basados en la localización de las lesiones, las vías de infección más probables son la oral, respiratoria y ocular. El pasaje de los parásitos puede producirse directamente de persona a persona o ser vehiculizados por alimentos, bebidas y objetos contaminados. Son fuertemente sospechadas la vía aerosol de productos expectorados y expulsados con violencia por boca o nariz, la inoculación directa en los ojos por dedos

17 contaminados y la transmis ión sexual. En todos los casos depende de la especie microsporidiana considerada. Por otra parte, algunos investigadores sostienen la hipótesis que, dada la remota época en que estos parásitos tan antiguos se relacionaron con el hombre, han alcanzado en la actualidad una bien equilibrada o balanceada relación huésped-parásito, por lo que en los sujetos sanos inmunocompetentes son inofensivos (una suerte de pacto de no agresión, fenómeno del cual La Parasitología tiene numerosos ejemplos), mientras que en los sujetos inmunodeficientes o debilitados actúan agresivamente. TERAPEUTICA. Se han ensayado infinidad de drogas con resultados muy variables y algunos contrapuestos. De todas las experiencias efectuadas, la mas alentadora es el empleo del ALBENDAZOLE. Con éste, los casos de E.bieneusi, logran una notable mejoría clínica pero no alcanza para erradicar o limpiar totalmente de parásitos al huéped. Los pocos casos de E.(S.) intestinalis tratados con Albendazol,, prima face, parecen haber sido totalmente exitosos. GIARDIA LAMBLIA Giardia lamblia Ficha Técnica. Indefinición del nombre (Comité Internacional de Nomenclatura Zoológica) G. lamblia, G. Intestinalis, G. Duodenalis. Parásito obligado y permanente. Monoxeno (ciclo biológico directo o monogenético) Hospedadores: Eurixeno (pero con cepas, razas o subespecies adaptadas total o parcialmente a uno o más hospedadores) Humanos, vacunos, ovinos, conejos, perros, gatos, castores, etc. (investigación aún incompleta, en realización)- La OMS, considera que se trata de una zoonosis, aunque no se conoce su extensión. Patógeno: con cepas de distintos grados de virulencia (baja, intermedia, alta). Básicamente tiene como habitat el lúmen intestinal (primer tercio intestino delgado o intestino proximal), en las criptas, pero por factores derivados del parásito (virulencia) y del hospedador (status inmune, status nutricional, edad-niños y ancianos debilitados-etc) puede invadir la mucosa sin lograr colonizar en ella. PARASITO EXTRACELULAR, INVASOR TISULAR SIN LOGRAR COLONIZAR EN EL MEDIO HISTICO. Patología= Gastroenteritis denominada G IARDIASIS -casos agudos de diarrea acuosa. - casos crónicos con sindrome de malabsorción. -casos asintomáticos. 1- Indefinición del nomb re- Algunos aspectos históricos Antovon Leuwen hoek Lambl Cercomonas intestinales Stiles G. Lamblia, Capítulo que se expone con carácter cultural y formativo. No se requiere memorizar estos datos. 2- Morfología El parásito existe o lleva a cabo su vida con dos estadíos evolutivos bien definidos: Trofozoíto y quiste. No olvidar que se trata de cuerpos tridimensionales (generalmente se aprecia una figura bidimensional). Tamaño de los trofozoítos mm 5-15 mm Forma de los trofozoítos Vistos de frente: - piriformes. - de una lágrima. - de una gota pendiente. Vistos de perfil: - de una cucharita. - de una pera partida por la mitad.

18 ES NECESARIO USAR UN POCO DE IMAGINACION!! Tamaño de los quistes Promedio: 12 x 8 mm. Forma de los quistes Ovoides, unos pocos aparecen esféricos. Trofozoítos Aspecto muy singular, inconfundible, no se repite en otros protozoarios, fácilmente reconocibles. Periplasto - Cuerpos medianos (2) (antes llamados cuerpos parabasales) Citoplasma Núcleos (2) Disco suctorio Con el microscopio óptico es perceptible como una excavación en el sector anterior y ancho del cuerpo. El microscopio electrónico lo muestra como una estructura con la forma de un plato que está aplicada (enchapando) la superficie ventral anterior del cuerpo. Está compuesto por una capa simple de microtúbulos dispuestos paralelamente y en sentido perpendicular a la superficie del cuerpo. No posee aparato de Golgi ni mitocomdrias. Sólo es detectable en muestras fecales líquidas o muy líquidas (velocidad tránsito intestinal muy rápido) También en fluidos (líquidos) aspirados (sondaje) de duodeno yeyuno. En estos casos puede vérselos vivos, activos, móviles durante poco tiempo después de obtenida la muestra (sin agregado de líquido preservante). Quistes. Forma ovoide o elipsoidal, unos pocos esféricos (formas geométrica casi perfectas). Periplasto o membrana = simple, algo más espesa que la del trofozoíto. Muchos muestran una imagen de doble membrana (falso). Se produce contracción citoplasmática por estar en medio hipertónico, lo que hace que el citoplasma se separe de la membrana y simule existir dos membranas. Citoplasma (refringente) Núcleos (4) Haz de fibrillas (axonemas de flagelos) Cuerpos medianos (para unos), primordios de discos suctorios (para otros investigadores). Son detectables en todo tipo de mat, fecal, pero con mayor abundancia en las formadas pastosas y pastosas líquidas raramente están presetnes en los 2-3 primeros días desde el inicio de la diarrea, allí solo trofozoítos. CICLO EVOLUTIVO Parásito monoxeno ciclo biológico directo o monogénetico, ciclo de G. Lamblia: muy sencillo. Formas infectivas: quistes maduros. Vía de infección: oral (10/100 quistes: depende de la cepa, dosis mínima infectiva). Por ingesta. Exquistación o desenquistamiento: inicia en estómago y finaliza en duodeno o primera parte yeyuno. De 1 quiste 2 trofozoítos. Hábitat: intestino proximal (1er.tercio intestino delgado, duodeno y parte yeyuno, aproximadam. 75 cm a 1 metro). En pocos casos, también se establece en vesícula biliar. Localización: Extracelular en lúmen intestinal, específicamente en criptas y entre vellocidades, la mayoría sumergido en la capa mucus - gel. Muchos adheridos con discosuctorio al epitelio mucosa, otros pululan en la capa mucus-gel. Los fluidos del duodeno y yeyuno cuando actúan prolongadamente sobre los trofozoítos. los destruyen, pero éstos no penetran en la capa mucus-gel. Reconocen a las células M y no se adhieren a ellas. Reproducción trofozoítos: división binaria longitudinal (asexual). Nunca invaden la totalidad de las criptas y base de vellocidades de la porción de intestino que constituye el hábitat, antes bien, en las infecciones severas, apenas lo hacen en el 10-20% del total. Tratándose de cepas de alta o intermedia virulencia, o cuando la mucosa intestinal está lesionada, los trofozoítos invaden la pared del intestino, hasta la lámina propia de la mucosa. Sin embargo, no se hacen intracelulares y no colonizan. Probablemente los macrófagos se lo impiden (citotoxicidad innata de estas células-). También invaden cuando existe un déficit inmunológico severo (déficit humoral) pero nunca colonizan. Período incubación (lapso de tiempo que transcurre desde la ingesta inóculo infeccioso hasta aparición primeros signos asíntomas enfermedad): Cuando la infección es sintomática ( no siempre acontece así, muchas infecciones son asintomáticas esto se aclarará más adelante-) el período de incubación es motivo de opiniones diversas. Unos consideran que el mínimo es de 5 a 7 días, otros de 12 días. Los máximos van de 20 a 30 días de duración.

19 Período de prepatente de quistes (el tiempo que transcurre desde la infección por quiste inóculo infeccioso- hasta que aparecen los primeros quistes en las heces: el mínimo: 10 días, opinión en la que coinciden la mayoría). Puede ser más largo. Enquistamiento: Cuando los trofozoítos pierden el hábitat y pasan a ser transportados por el quimo intestinal, se inicia el enquistamiento. Este proceso debe completarse en la última parte de íleon o el ciego. Si no lo logran hasta allí, ya no logran enquistarse. El período prepatente para trofozoítos es más breve, pero estos solo aparecen en heces cuando éstas son líquidas o muy líquidas con velocidad de tránsito intestinal acelerado. Evolución de la infección: AUTOLIMITADA, (4 a 6 semanas) CRONICA ASINTOMATICA CON ALTERNANCIA DE SINTOMATOLOGIA CADA TANTO, CRONICA SINTOMATICA CON SINDROME DE MALABSORCION. Proceso de enquistamiento: - acúmulo de reservas (glucógeno, etc) - condensación citoplasma (pérdida agua) - inmovilización - pérdida porción libre de los flagelos - secreción y excreción (liberación) de productos. - engrosamiento membrana - posteriormente, división de núcleos Causas del enquistamiento No son conocidas o comprobadas, varias hipótesis. De cualquier manera está claro que es una necesidad biológica, necesita determeinarse, perpeturase, propagarse a otros hospedadores. Qué factores pueden determinar la pérdida del hábitat a los trofozoítos? Hipótesis: 1) Exceso de población en una cripta 2) Exceso de sustancias de deshechos metabólicos. 3) Exceso de mucus ( mecanismo defensivo natural) (secreción células caliciformes) 4) Anticuerpos IgA secretores. 5) Respuesta inflamatoria (infiltración celular de mucosa y con pasaje al lúmen) Patrones de excresión (por heces) de quistes (juegan factores imponderables) 1)Excresión ininterrumpida (cotidiana), generalmente en alto número. 2)Excresión intermitente, alternan períodos de días con/sin excreción, con pequeña, regular o mucha cantidad de ellos- (Sin ritmo o esquema aún aclarado) 3)Casos de infecciones (comprobadas por presencia del parásito en material aspirado de duodeno yeyuno) donde se lograron detectar quistes en heces. Motivos desconocidos. FENOMENOS DE PARTICULAR IMPORTANCIA PRACTICA EN RELACION CON EL DIAGNOSTICO. Reinfecciones Después de curados, natural o medicamentosamente, los sujetos son susceptibles a nuevas infecciones. Por regla general, en las personas sanas (status inmune-normal, nutridas, no ancianas o niños muy pequeños), las reinfecciones suelen ser menos sintomáticas, aunque esto depende de la violencia de la cepa. Sin embargo, las personas que viven en regiones de alta endemicidad, como la nuestra, la reiteración de las infecciones con el correr del tiempo conduce a una inmunidad protectora del grado REFRACTARIEDAD (siempre, si se trata de personas sanas). CEPAS de Giardia lamblia 1)Distinto poder infectivo (diferente adaptación biológica a distintas especies (zoológicas) de hospedadores. 2)Distinta virulencia (alta, intermedia, baja) 3)Diferencias en la composición antigénica, especialmente los agentes de superficie de los trofozoítos. 4)Diferencias en los productos de E/S (exc reción/secreción) de los trofozoítos en vida trófica con en los que se excretan/secretan durante el proceso de transformación trofozoíto- quiste. 5)Diferentes ZIMODEMAS. ZIMODEMAS O ZIMODEMES: Método bioquímica que emplea electroforesis para detectar las diferencias entre enzimas que poseen propiedades catalíticas comunes pero estructuras moleculares diferentes (ISOENZIMAS).Esto permite caracterizar cepas o poblaciones de parásitos protozoarios cuando se aplica este procedimiento a un listado de parásitos (parte soluble)obtenida por método de COMPRESION/ DESCOMPRESION.

20 Se parte de un cultivo axénico. RESPUESTA DEFENSIVA (Inespecífica y específica-(inmune). a) Inespecífica -Respuesta inflamatoria in situ (infiltración celular de lámina propia de la mucosa --granulocitos, linfocitos) -Hipersecreción de mucus -Cuando invade-macrófago (acción citotóxica innata)-posterior migración a folículos linfoides para iniciar respuesta inmune específica. Dato de causa aún no aclarada: infiltración celular del epitelio de la mucosa generalizado y de otros epitelios del cuerpo (piel, retina, etc) aunque con grado mucho menor al infiltrado en los puntos de localización. Esto, sobre todo en formas crónicas. b)específica. Resp.inmune -Rol del macrófago cuando invade. -Rol de las células M sobre productos de excreción-secreción (no sobre elementos formes del parásito). *Respuesta Celular. -Balstogénesis de linfocitos T activados (citotoxinas)-incrementa el poder citotóxico de linfocito Killer que migran a la luz intestinal y atacan a los parásitos. -Sobre macrófagos, los que incrementan su acción citotóxica sobre parásitos invasores. *Respuesta. Humoral. -Linfocitos B- anticuerpos (protectores-no protectores la mayoría) Anticuerpos sistémicos: IgM (séricos) IgG IgA IgE (incremento pequeño) La mayoría no protectoras, algunos de acciones no aclaradas. Anticuerpos secretores IgA secretores (al lumen intestinal, a la leche materna) (protectores)- Bloquean la función del disco suctorio (hipótesis) o funcionan como anticuerpos mediadores de citotoxicidad celular (ADCC). Se fijan sobre el parásito del lúmen y resultan luego sensibles a la acción de otras células efectores (granulocitos especialmente) ( hipótesis). Esta es una síntesis de lo que se conoce. No se descarten otros mecanismos. NOTA: El disco suctorio actúa exclusivamente como organoide de fijación (no cumple funciones absortivas de nutrientes). Infecciones reiteradas llevan a la refractariedad Los más sensibles a las acciones del parásito son los inmunodeficientes, particularmente de la deficiencia humoral (defecto congénito de elaboración de inmunoglobulinas anticuerpos-). PATOLOGIA Comprende 2 aspectos: 1)Daños morfológicos y fisológicos evidenciables. 2)Manifestaciones clínicas (signos y síntomas) de enfermedad (INCUMBENCIA DEL MEDICO) GIARDIASIS GASTROENTERITIS (aunque hay otras manifestaciones extraintestinales). 1) Daños evidenciables - Alteraciones de los enterocitos o capa de microvellos (superficie denominada borde en cepillo) Superficie del enterocito. - Desorganización del SR Endoplasmático del enterocito. - Distorción del núcleo. - Aceleración de la descamación del epitelio de la mucosa. - Aceleración de la dinámica o velocidad de la reacción de la capa de células del epitelio de la mucosa - Llegada a las partes altas de la vellocidad de enterocitos inmaduros sin capacidad absortiva de nutrientes y digestiva de discáridos. *) Infiltración celular de la mucosa Inflamación. CONCEPTO DE FENOMENO INFLAMATORIA (ver más adelante sobre el tema). *) Hipersecreción de mucus mucus fuertemente adhesivo a la pared intestinal más allá del hábitat Bloqueo de la superficie intestinal.