Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017
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- Rafael Miguélez Espejo
- hace 6 años
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1 AUTOANTICUERPOS: DE LA IMAGEN AL DIAGNÓSTICO ANTICUERPOS ANTI-CITOPLASMÁTICOS Y MITOTICOS MI Alarcón Torres Servicio de Análisis Clínicos Hospital Universitario de Gran Canaria-HUGCDN 1
2 Mitocondrias CITOPLASMA CELULAR Lisosomas Membrana nuclear Nucleolo Nucleo Ribosomas R E rugoso Ribosomas Ap de Golgi Retículo endoplasmático liso Centriolos Vacuolas Vesículas Membrana celular 2 Citoesqueleto
3 AC ANTI CITOPLASMA DE CELULA HEp-2 3
4 Consenso internacional sobre estandarización de la nomenclatura de los patrones sobre células Hep-2 (ICAP) 4
5 PROPUESTA ICAP En cada patrón definido debe constar de 4 conceptos básicos: Nombre: Golgi-like Descripción morfológica: Polar citoplásmico Identificación de autoantígeno: Giantina, golgin-160 Relevancia clínica: Descripción 5
6 Patrones citoplasmáticos AC-15 AC-23 6
7 Nivel competente Nivel experto 7
8 PATRONES CITOPLASMÁTICOS EN CÉLULAS HEp-2 Código Competente Experto Anticuerpo AC-15 Fibrilar Lineal Actina AC-16 Fibrilar Filamentoso Citoqueratina y vimentina AC-17 Fibrilar Segmental Tropomiosina, a-actinina AC-18 Moteado Puntos discretos Lisosomas, GW AC-19 Moteado Denso Fino PL7/PL12 AC-20 Moteado Fino Jo1, OJ, EJ AC-21 Reticular Mitocondrias AC-22 Golgi Golgi AC-23 Rods and Rings IMPDH2 8
9 AC-15: Fibrilar Lineal Nivel competente Nivel experto 9
10 AC-15: Fibrilar Lineal Tinción Fibras del citoesqueleto, con pequeños depositos granulares Cables de actina estriados que atraviesan el eje de las células Asociación clínica Actina / miosina Hepatitis crónica activa - EMTC Cirrosis hepática Miasthenia gravis Actina - Hepatitis autoimmune Enf Crohn CBP VHC - Hemodialisis (long term) Raro en EAS
11 Ac Anti-músculo liso Antígeno diana : Actina y F-actina Asociación clínica: HAI-1 CBP, EAS Métodos de detección: IFI HEp2 IFI Tejido estomago de rata IBlot (F-Actina) Tinción AC-15:Citoplasmática fibrilar lineal 11
12 AC-16: Fibrilar Filamentoso Nivel competente Nivel experto 12
13 AC-16: Fibrilar Filamentoso Tinción Microtubulos y filamentos intermedios, se extiende desde el borde nuclear Asociación clínica Anti-Vimentina Reacción cruzada con ac anti-hélice, - Enferm. infecciosas o inflamatorias - Hemodiálisis a largo plazo - Sujetos sanos Anti-Queratina - Enf. hepática alcohólica (69%) - Común en EAS y psoriasis 13
14 AC-17: Fibrilar Segmental Nivel competente Nivel experto EKL Chan, CA von Muhlen. ICAP
15 AC-17: Fibrilar Segmental Se asocia a ac anti-α-actinina, vinculina y tropomiosina Tinción Mayor tinción de segmentos cortos, cuerpos densos, a lo largo de las fibras Asociación clínica - Miastenia gravis, - EII: E. Crohn y Colitis ulcerosa 15
16 AC-18: Moteado Puntos discretos Nivel competente Nivel experto Autoantigenos: Anti-argonaute2 (Ago/Su): Componente de puntos GW (GWB), GW182 16
17 AC-18: Moteado Puntos discretos Se asocia a: Ac anti- cuerpos GW y lisosomas* (Ag: GW182, Ago2/Su) Tinción Granular brillante en cuerpos GW en el citoplasma de las células en interfase con alto numero durante finales de S y G2 fases del ciclo Asociación clínica - CBP, SAF, EAS, - procesos neurológicos y autoinmunes (*) no hay evidencia molecular para sustentar que este patrón, esté asociado a objetivos lisosomales 17
18 AC-18: Moteado Puntos discretos EKL Chan, 18 CA von Muhlen. ICAP 2014
19 AC-19: Denso Fino y Homogéneo Nivel competente Nivel experto 19
20 AC-19: Denso Fino y Homogéneo Se asocia a ac anti-sintetasas y ribosomas Antígenos frente a PL7, PL12, Proteina P ribosomal Tinción Homogénea nuboso y mate en el citoplasma Asociación clínica - Síndrome anti-sintetasa, PM/DM, - RNP rib, LES, LES neuropsiquiátrico 20
21 Ac anti-sintetasa: PL7/PL12 Antigeno diana: Anti-PL-7 Anti-PL-12 Sintetasa de treonil ARNt Sintetasa de alanil ARNt Asociación clínica: Anti-PL7/PL12 (Solomon J. 2011) Frecuente en mujeres (PL7-63% y PL12-75%) Mayor incidencia de EPI (70-100%) Menor incidencia de miositis (<50%) Pronóstico depende de la severidad de la EPI Respuesta a tto inmunosupresor variable Ac Anti-PL7: En sujetos con EPI y ANA y anti-jo1 (-), Anti PL7 en el 77% de casos, con afectación muscular, Raynaud y Artritis en 42% de casos EUMYONET (PL7): (Labirua-Iturburu, 2012) - 18/964 (1.87%); 83 % en mujeres. - EPI 78%, Miositis 75%, Artritis 56%, Raynaud 40%, Fiebre 30% y Pericarditis en 22%. - Otros ac asociados: ANA, Ro52 y SSa/Ro Método de detección: - IFI- Hep-2: AC-19: Citoplasmático denso fino - IB: Ag recombinante 21 Anti PL12 Solomon J. J Bras Pneumol Labirua Iturburu A, Medicine,2012
22 AC-20: Moteado fino Nivel competente Nivel experto Autoantigeno: Histidil-Sintetasa 22
23 Patrón AC-20: Fino Moteado-AC20 fino Tinción Pequeñas gránulos dispersos en el citoplasma, sobre todo homogéneo o bien densa con fondo moteado Asociación clínica - Síndrome Jo-1 (miositis y EPI) - Síndrome anti-sintetasa, PM / DM - Esclerodermia limitada - Enfermedades neurológicas - Derrame pleural idiopático Anti-Jo1 23 y PL12 - EPI
24 Ac anti-sintetasas:jo1/pl1, OJ, EJ Antígeno diana : Enzimas citoplasmáticas: Anti-Jo1/PL1 Sintetasa Histidil RNAt Anti-EJ Sintetasa de glicina ARNt Anti-OJ Sintetasa de isoleucil ARNt Anti Jo-1 Asociación clínica: 20-40% pacientes con MII 48% en PM, ES=95%, Artritis 90% Con frecuencia está asociado a EPI (60-70%) Relacionado con la actividad de la MII Se asocia a anti- Ro52 con EPI severa y extensa Método de detección : IFI Hep2, ELISA, IBlot Tinción AC-20:Citoplasmática moteado fino 24
25 AC-21: Moteado Reticular Nivel competente 25
26 AC-21: Moteado Reticular Se asocia a ac anti-mitocondriales: 1) Piruvato dehidrogenasa E2 (PDC-E2/M2*) 2) Cadena ramificada del complejo E2 (BCOADC-E2) 3) 2-oxo glutarato dehidrogenasa complejo E2 (OGDC-E2) 4) Subunidad E1 de PDC 5) E3 BP/proteina X * PDC-E2, antígeno mas importante en la patogenesis de la CBP Tinción Granular brillante grueso filamentoso y moteado Asociación clínica CBP Esclerosis sistémica (43%), SSj Ac centroméricos frecuentemente asociados Raro en otras EAS 26
27 Ac anti-mitocondrias Antígeno diana : M1 a M9: M2 (Piruvato deshidrogenasa) M4 (Sulfito Oxidasa) M9 (Glucógeno Fosforilasa A) Asociación clínica: En CBP, presenta Ac. anti-m2, M4, M8 y M9 M2: Marcador de CBP (prevalencia 95%) M4 y M8: baja prevalencia, asociados a M2 M9: estadíos iniciales de CBP (82%) Método de detección: IFI-Hep-2, IFI-Tejido de riñón de rata ELISA (detecta y cuantifica subtipo M2), IBlot: anti-m2, anti-3e-bpo Tinción: AC-21: Citoplasmática moteado reticular 27
28 AC-22: Citoplasmático Polar-Golgi Nivel competente Autoantigenos: Giantina/Macrogolgina, golgina95/gm130, golgina-97, golgina-160 y golgina
29 AC-22: Citoplasmático Polar-Golgi Tinción Golginas: Aparato de Golgi Asociación clínica Raro en el SSj LES, AR, EMTC, y otras EAS Ataxia cerebelar idiopática, Degeneración cerebelar paraneoplásico Infecciones virales - EBV y VIH 29
30 AC-23: Rods and Rings (R&R) Nivel competente Autoantigeno: Inosin-5-monofosfato dehidrogenasa 2 30
31 AC-23: Rods and Rings (R&R) Se asocia al antígeno IMPDH2 (inosin-5-monofosfato dehidrogenasa 2) y otros Tinción Distintas varillas y estructuras de anillos en el Citoplasma de celulas en interfase. Algunos R&R también se encuentran en núcleo Asociación clínica VHC, post tratamiento IFN/ Ribavirina, resistencia al tto Raro en LES Hashimoto Sujetos sanos 31
32 Ac anti-citoplasma - HEp-2 Ac-19 y AC-20 Moteado Moteado AC-21 Reticular AC-15 Fibrilar Criterios Clínicos Inmunoblot Inmunoblot Triple tejido /Inmunoblot Anti-Sintetasas (Jo1, EJ, OJ, PL7, PL12) y SRP(*) Anti-SSa y Anti-Ro52 (*) Anti-Mitocondrias (M2, BPO) Anti-músculo liso (Actina) SAS, DM/PM SS CBP HAI 32
33 Autoantígeno: Ac anti-srp SRP (Signal Recognition Particle): Proteina de 54 kda y 72 kda del complejo citoplasmático de 6 RNA-proteínas (Proteínas-7SL RNA) Asociación Clínica: Presente en 5% de pacientes con MII, ES 93% % Polimiositis y 2-3% Dermatomiositis - Relacionado con la actividad de la MII - No se asocia a otros Ac Síndrome de miopatía necrotizante - Altos niveles de CK - Enfermedad severa y Afectación miocárdica - Rápida progresión y Mal Pronóstico - Resistencia y mala respuesta a tto - Supervivencia % Método de detección: - Patrón IFI-Hep-2: No definido por la ICAP Citoplasmático débil moteado granular denso y difuso - IB: Ag recombinante 33
34 Autoantígeno: No pertenece al complejo scrnp. Proteína de 52 kda es una ubiquitin-ligasa E3 de la familia de proteínas TRIM 21 (tripatite motif protein) de localización citoplasmática Asociación Clínica 20% en SSc: l-ssc 60% y d-ssc 36%, asociado a EPI MII: PM, DM, S. Overlap y CBP (80%). Inf. viricas y neoplasias 62% Tb asociado a HAI y SLA 76-96% Asociado a otros Ac: Ssa/Ro 60 kda, 90% LES y SS, 72% Jo1 60%, EPI mas severa y extensa (Vacnsa, 2009) Otras Antisintetasas, 99% Tb Cent B y A, Scl70, RNA poliii, Pm/Scl y Ku, 60% Valor pronóstico Ac anti-ro52/trim21 Método de detección - Patrón IFI: No definido por la ICAP Citoplasmático no especifico o negativo en HEp-2 y Moteado fino en HEp2000 (transfectadas con Ro) - ELISA, IB: Ag recombinantes 34 Anti-anti-Jo1/Anti-Ro52/TRIM21: Severidad EPI Miositis Afectación articular Riesgo de cáncer MII: DM (24%), PM (27%), MCI (21%) Otros: S. Sjögren, LES, SScl
35 INMUNOTRANSFERENCIA EN LINEA (LIA) 35
36 Patrones mitóticos AC-24 AC-28 36
37 Nivel experto 37
38 AC-24: CENTROSOMAS Nivel experto Sinónimo Antígenos Asociados Centriolos Pericentrina, Nineína, Cep250, Cep110 Enfermedades Asociadas Raro en ES, Fenómeno de Raynaud, Infecciones (virales y por micoplasmas) Descripción Centriolos, visibles como pequeños puntos nítidos (1-2/célula) en citoplasma o en los polos del huso mitótico. 38
39 AC-25: HUSO MITÓTICO Nivel experto Sinónimo Huso mitotico Antígenos Asociados HsEg5 Enfermedades Asociadas Raro en SSj LES y otras conectivopatías. Descripción Tinción en las fibras del huso entre los polos en células en mitosis, junto con una tinción con forma de pequeños conos en los polos. Las fibras del huso pueden teñirse tanto en patrones parecidos a NuMA como en algunos no-numa. Los patrones NuMA conllevan tinciones moteadas en el núcleo. 39
40 AC-26: HUSO MITÓTICO like Nivel experto Sinónimo Antígenos Asociados Enfermedades Asociadas Descripción MSA-1v, Centrofilina NuMA SSj, LES Y otros Tinción granular nuclear con tinción de fibras del huso mitótico 40
41 AC-27: PUENTE INTERCELULAR Nivel experto Sinónimo Cuerpo medio Antígenos Asociados Ninguno Enfermedades Asociadas Descripción Raro en ES, Fenómeno de Raynaud, Tumores malignos Tinción del puente que une las dos células hijas al final de la división celular, pero antes de que las células se separen totalmente. 41
42 AC-28: ENVOLTURA CROMOSÓMICA MITÓTICA Nivel experto Sinónimo Antígenos Asociados Proteína de cobertura cromosómica, antígeno de células en división, autoantígeno de cromosomas mitóticos (MCA) Histona H3 modificada, MCA-1 Enfermedades Asociadas Raro en lúpus discoide (LED), Leucemia linfocítica crónica (LLC), SSj, Polimialgia reumática. Descripción Tinción punteada en el borde de los cromosomas de células en profase y metafase, sin ninguna tinción en células en interfase 42
43 RECOMENDACIONES Desde la CEI/SEQC recomendamos, en consenso con la GEAI/SEI: 1.- Utilizar la nomenclatura estandarizada para definir los patrones de IFI, tal como se establece en el Consenso Internacional sobre nomenclatura de Patrones de células Hep Configurar en los SIL e informes del laboratorio, la definición de los patrones de células HEp-2, nucleares y citoplasmáticos, al menos a nivel competente, tal como se indica en dicho Consenso 3.- Realizar la búsqueda y confirmación de las distintas especificidades de forma ordenada y racional, tomando como base la imagen, siguiendo siempre las pautas establecidas en las GPC 4.- Utilizar los algoritmos de consenso internacionales y criterios clínicos establecidos para el diagnóstico de EAI para lograr una mejor adecuación de la demanda y rentabilidad de las pruebas de Autoinmunidad
44 44
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49 PL12 49
50 PL12 50
51 51
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54 Muchas Gracias 54
Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2015
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