DIRECCION DE LUCHAS SANITARIAS DIRECCION NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL

Transcripción

1 Informe del Programa de Vigilancia Epidemiológica Para la Influenza Aviar y la Enfermedad de Newcastle en aves domésticas, en la República Argentina Año 2007 Programa de Aves y Granja DIRECCION DE LUCHAS SANITARIAS DIRECCION NACIONAL DE SANIDAD ANIMAL

2 ÍNDICE 1. Resumen Introducción Objetivos Poblaciones Bajo Estudio Unidades Primarias de Muestreo Pruebas Diagnósticas Vigilancia Epidemiologica Activa para la I.A. y la E.N. en Aves Industriales Estrategia de Monitoreo para la Influenza Aviar Resultados del Monitoreo Serológico para la I.A. en Gallinas de Postura Resultados del Monitoreo Serológico para la I.A. en Planteles de Aves Reproductoras Estrategia de Monitoreo para la Enfermedad de Newcastle Resultados del Monitoreo Serológico para la E.N. en pollos de engorde Vigilancia Epidemiológica Activa para la I.A. y la E.N. en Aves de Traspatio Resultados del Monitoreo Serológico y Virológico en predios de aves de traspatio Resultados del Monitoreo Serológico y Virológico en Ferias y Exposiciones Rurales Atención de Notificaciones de Mortandad y/o Sospechas de Enfermedad Controles de Importación Discusión y conclusiones Página 2 de 29

3 1. Resumen El presente informe contiene las acciones y resultados del Programa de Vigilancia Epidemiológica para la Influenza Aviar (I.A.) y la Enfermedad de Newcastle (E.N.) realizadas durante el año 2007 por el Programa de Enfermedades de las Aves con la colaboración del Personal de Campo de la Dirección Nacional de Sanidad Animal, los Jefes de Servicio de los Frigoríficos de aves habilitados por el Senasa y la Coordinación de Virología y Biología Molecular de la Dirección de Laboratorios y Control Técnico del Senasa. Durante el año 2007, se procesaron muestras de aves correspondientes a 991 predios de aves comerciales y de aves de producción familiar y 282 planteles de aves reproductoras. Estas muestras fueron extraídas en plantas de faena habilitadas por el Senasa, en granjas de reproducción, en granjas de gallinas de postura, en producciones no comerciales o familiares y en ferias exposiciones rurales. Se exponen los resultados obtenidos y las conclusiones a las que los mismos permiten arribar. 2. Introducción La Influenza Aviar y la Enfermedad de Newcastle son consideradas enfermedades exóticas en las aves industriales (aves de producción tecnificada) y en las aves de producción familiar (aves de traspatio) de la República Argentina. La Dirección Nacional de Sanidad Animal del Senasa, es el organismo rector en el programa de prevención para la I.A. y para la E.N., sigue las pautas establecidas en el programa específico, en la legislación nacional y en las normas internacionales, bajo el marco general del Plan Nacional de Sanidad Avícola. Página 3 de 29

4 La Vigilancia Epidemiológica para la E.N. y la I.A. se encuentra determinada por el riesgo de introducción de estas enfermedades; el cual se analiza anualmente en función de la ocurrencia de las mismas en otros países de la región y en resto del mundo; y por las posibilidades prácticas de acceso a las muestras y la capacidad operativa del laboratorio. Las acciones de la Vigilancia Epidemiológica se orientan hacia la detección temprana de ambas enfermedades y en el caso de ocurrir las mismas la implementación inmediata de las medidas de contingencia y erradicación contenidas en la legislación vigente. 3. Objetivos Enfermedad de Newcastle El objetivo de la Vigilancia Epidemiológica para la enfermedad de Newcastle es establecer la presencia o ausencia de actividad de cepas patógenas del virus de la E.N. y conocer los niveles de protección de las aves industriales vacunadas contra la enfermedad. Influenza Aviar El objetivo de la Vigilancia Epidemiológica para la Influenza Aviar es establecer la presencia o ausencia de anticuerpos contra la Influenza Aviar o del virus de la I.A. de declaración obligatoria de baja patogenicidad. 4. Poblaciones Bajo Estudio Los muestreos realizados cubren a la totalidad de la población de aves domesticas susceptibles de infección, distribuidas en las siguientes subpoblaciones: a) Reproductoras abuelas de las líneas pesadas y reproductoras padres de líneas pesadas y livianas, b) Gallinas de alta postura, c) Pollos de engorde, d) Aves de traspatio o de producción familiar. 5. Unidades Primarias de Muestreo Página 4 de 29

5 1) Reproductoras Abuelas y Padres: Núcleos de reproducción. 2) Gallinas de Alta Postura (gallinas ponedoras de huevos comerciales): Lotes de faena proveniente de una misma granja y granjas comerciales. 3) Pollos de engorde: Lotes de faena proveniente de una misma granja. 4) Aves de traspatio: Predios (gallineros familiares) en jurisdicción de la oficina local de Senasa y aves que ingresan a ferias y exposiciones rurales. 6. Pruebas Diagnósticas Como prueba tamiz para el diagnóstico de la Influenza Aviar se utilizó el test de Elisa de anticuerpos (Test de Elisa Indirecto) o la prueba de Inmunodifusión en Agar Gel (IDAG). En aquellas muestras que resultaron positivas a la prueba de Elisa indirecto, se utilizo la prueba de IDAG para su confirmación. Como prueba tamiz para el diagnóstico de la Enfermedad de Newcastle se utilizó la prueba de Inhibición de la Hemoaglutinación. Se describen a continuación la totalidad de las pruebas diagnósticas utilizadas en la Dirección de Laboratorios y Control Técnico (DILAB) del Senasa durante el año Para la Influenza Aviar: Diagnóstico serológico: Prueba de Inmunodifusión en Agar Gel (IDAG) para la detección de anticuerpos circulantes tipo A, con una especificidad del 95 % y una sensibilidad del 90% para gallinas y del 60 % para otras especies de aves, reactivos provistos por NVLS-USDA. 1 Test de Elisa de anticuerpos 2, también para la detección de anticuerpos del virus de la influenza de tipo A. Este ensayo presenta una especificidad mayor al 99% y una sensibilidad del 95%. 1 National Veterinary Services Laboratory, United States Department of Agriculture. 2 IDEXX Flock Check Página 5 de 29

6 Test de Inhibición de la Hemoaglutinación (H.I.) subtipo específico (principalmente para los subtipos H5, H7 y H9), reactivos provistos por NVLS-USDA. Diagnóstico virológico: aislamiento viral mediante el cultivo en embriones de gallina SPF 3. Se utiliza también, con los fluidos alantoideos de los cultivos de huevos embrionados la prueba rápida de Elisa de captura de antígeno para detección directa del antígeno de Influenza A 4. Diagnóstico molecular: por la técnica de RT-PCR (Transcripción Reversa - Reacción en Cadena de la Polimerasa) en tiempo real, reactivos provistos por Applied Biosystems. Para la Enfermedad de Newcastle: Diagnóstico serológico: por prueba de la Inhibición de la Hemoaglutinación (HI) para detectar y establecer títulos de anticuerpos circulantes IgM's e IgG's, cuya sensibilidad y especificidad es mayor al 95%. Diagnóstico virológico: aislamiento viral mediante el cultivo en embriones de gallina SPF, con una sensibilidad y especificidad del 99% y posterior tipificación por prueba de IPIC. Diagnóstico molecular: por la técnica de RT-PCR en tiempo real, reactivos provistos por Applied Biosystems. Resultados Obtenidos En el Cuadro Nº 1 figuran la cantidad de muestras negativas, discriminadas según motivo de ingreso, que fueron procesadas para el diagnóstico de Influenza Aviar y Enfermedad de Newcastle, por distintas pruebas diagnosticas. 3 Specific Pathogen Free 4 Directigen Flu A Página 6 de 29

7 Cuadro Nº 1: Vigilancia Epidemiológica (V.E.) para la I.A. y E.N.: Muestras negativas de diversos origenes, procesadas según técnicas serológicas, moleculares y/o virológicas Diagnóstico para la Influenza Aviar Serológico Diagnóstico para la Enfermedad de Newcastle Diagnóstico Virológico para Molecular la I.A. y E.N. Serologico Molecular Motivo de ingreso de las muestras V.E. en pollos de engorde V.E. en gallinas de postura V.E. en Aves de Traspatio V.E. en Aves Reproductoras V.E. en Aves Ornamentales Notificaciones de mortandad, sospecha de enfermedad o investig. epidemiológica Elisa de Ac. y/o IDAG Inhibición de la Hemoaglutinación (A/H5, H7) Real Time RT- PCR (A/H5 y H7) Inoculación en huevos embrionados y Directigen Flu A Test Inhibición de la Hemoaglutinación Real Time RT- PCR (Paramyxovirus tipo I) Control de Importación Control de Exportación Monitoreo en Aves Silvestres TOTAL Vigilancia Epidemiologica Activa para la I.A. y la E.N. en Aves Industriales 7.1. Estrategia de Monitoreo para la Influenza Aviar. Se confirió prioridad al muestreo en la población de gallinas de alta postura en virtud de considerarse a este tipo de aves como de mayor riesgo, por las características de menor nivel de bioseguridad que revisten las granjas, la presencia de aves de diferentes edades dentro de las mismas, su largo ciclo vital y por tanto la mayor probabilidad de que en una granja pueda existir, sin manifestación clínica, una cepa de virus de baja patogenicidad. Página 7 de 29

8 En segundo lugar se otorgó importancia para el muestreo a las aves reproductoras abuelas y padres, debido a que las mismas representan la base genética de la producción del país y su ciclo productivo necesariamente implica una permanencia de los lotes por largos períodos de tiempo Resultados del Monitoreo Serológico para la I.A. en Gallinas de Postura Para el monitoreo serológico de la Influenza Aviar en la población de gallinas de postura se realizaron muestreos a campo en establecimientos avícolas comerciales dedicados a la recría y producción de huevos para consumo además de muestreos en plantas de faena de gallina. La selección de granjas de gallina, en el muestreo a campo, se realizo en base a su densidad y distribución geográfica. Asimismo se eligió entre aquellos establecimientos avícolas comerciales que presentaban algunas de las siguientes características: Se hallaran en zonas con elevada densidad de granjas, con distintos niveles de bioseguridad o con distintos tipos de producción. Se hallaran en zonas que pudieran existir aglomeraciones de distintas especies de aves (patos, gansos, codornices, etc.) Se hallaran en zonas que pudieran tener contacto frecuente con aves silvestres, especialmente aves silvestres acuáticas, por lo cual se debían encontrar en cercanías de fuentes de agua El número de granjas o lotes de faena a muestrear se calculó en base al número de establecimientos de gallina de postura registrados en las oficinas locales de Senasa de todo el país, con una prevalencia esperada del 1% y una confianza del 95%. Asimismo el número de 20 muestras de suero a tomar en cada predio o lote de faena, se consideró de tal manera de asegurar la detección de un animal positivo, con una probabilidad del 95%, asumiendo una prevalencia de sero-positividad intra predio menor o igual al 15%. Página 8 de 29

9 En el Cuadro Nº 2.- Figuran el número de granjas y número de muestras de suero de gallinas de postura obtenidas por provincia, procesadas para el diagnóstico serológico de la Influenza Aviar, con resultados negativos. En 9 granjas, en donde se obtuvieron entre 20 ± 1 muestras de suero totales por granja, se detectaron sueros positivos al test de Elisa de ac. para I.A., en un porcentaje que varió entre 5 al 25%. Todos los sueros positivos resultaron negativos a las pruebas de IDAG. Cuadro Nº 2: Número de granjas y número muestras negativas a I.A., procesadas por las pruebas de ELISA de Ac. y/o IDAG, obtenidas en granjas de gallinas de postura, año 2007 PROVINCIA Nº de Granjas Nº de Muestras BUENOS AIRES CORDOBA ENTRE RIOS TOTAL En el Cuadro Nº 3.- Figuran la cantidad de lotes y muestras negativas, obtenidas en plantas de faena de gallinas, según provincia, que fueron procesadas para el diagnóstico serológico de la Influenza Aviar. Un 85% de los lotes muestreados corresponden a gallinas ponedoras comerciales, el resto corresponde a muestras de suero de lotes de aves reproductoras obtenidas en la faena. El 77% de las muestras de suero se obtuvieron en 2 frigoríficos de las localidades de Paraná, Entre Ríos y Lincoln, Buenos Aires. En 2 lotes gallinas, con origen en la provincia de Entre Ríos, de 20 muestras totales obtenidas en cada lote, se obtuvieron sueros positivos a Elisa indirecto en un porcentaje del 5 y del 10%, los sueros positivos resultaron negativos a las pruebas de IDAG. Página 9 de 29

10 Cuadro Nº 3: Número de lotes y número de muestras negativas a I.A. procesadas por el test de ELISA de Ac. y/o IDAG, obtenidas en plantas de faena de gallinas, año 2007 PROVINCIA Nº de Lotes Nº Muestras BUENOS AIRES CORDOBA CATAMARCA 2 40 ENTRE RIOS MENDOZA SANTA FE 2 40 RIO NEGRO 1 20 SALTA 1 20 SAN JUAN 1 20 TOTAL Mapa Nº 1: Distribución de las granjas de gallinas muestreadas a campo y en la faena para el diagnóstico serológico de la Influenza Aviar Resultados del Monitoreo Serológico para la I.A. en Planteles de Aves Reproductoras Página 10 de 29

11 Las aves reproductoras fueron muestreadas en el marco del Plan Nacional de Sanidad Avícola. Once laboratorios reconocidos para este Plan enviaron al laboratorio del Senasa las muestras correspondientes a núcleos de aves reproductoras. Como subunidad de muestreo se adopto el núcleo, en razón que dentro de cada uno, todas las aves tienen la misma edad, obedecen a un mismo manejo sanitario-productivo, son atendidas por las mismas personas y permanecen aisladas de otras aves. De acuerdo al diseño de muestreo para el año 2007 (Prevalencia estimada menor o igual al 15%, con un nivel de confianza del 95%), se tomaron muestras para análisis serológico de al menos 20 aves por núcleo. Se recibieron 5480 muestras de suero correspondientes a 292 núcleos de reproducción de 27 empresas. El 75,7% de los núcleos muestreados corresponden a reproductoras padres pesadas, el 15,4% a reproductoras abuelas de las cuatro empresas existentes en el país y el 8,9% restante a reproductoras padres livianas. El 61% de los núcleos correspondientes a 10 empresas, fueron muestreados al menos dos veces durante el año Cuadro Nº 4: Número de núcleos y muestras de suero, negativos a I.A. procesadas por el test de ELISA de Ac. y/o IDAG, obtenidas en nucleos de reproductores, año 2007 CATEGORIA Nº NUCLEOS Nº MUESTRAS REP. PADRES LIVIANAS REP. ABUELAS PESADAS REP. PADRES PESADAS TOTAL muestras de suero correspondientes a 17 núcleos de reproductoras pesadas, resultaron positivas a I.A. por la técnica de Elisa de ac., en un Página 11 de 29

12 porcentaje variable del 5% al 35%. Todos los sueros fueron sometidos a la prueba de Inmunodifusión en Agar Gel, con resultados negativos. Asimismo 918 muestras de hisopados cloacales pertenecientes a 10 núcleos, con porcentajes mayores a los esperados de positividad intra núcleo por la prueba de Elisa de ac. fueron procesadas por la prueba de PCR-RT en tiempo real, resultando negativos a Influenza Aviar. En el cuadro Nº 5 se muestra la distribución por provincia de los núcleos de aves reproductoras muestreadas para el diagnostico serológico de I.A. Cuadro Nº 5 : Distribución por provincia de los núcleos de reproductores muestreados (n=292), año 2007 PROVINCIA NUCLEOS BUENOS AIRES 48% CATAMARCA 2% CORDOBA 4% ENTRE RIOS 30% LA RIOJA 1% SAN LUIS 6% SANTA FE 9% Página 12 de 29

13 Mapa Nº 2 : Distribución de los núcleos de reproductoras muestreados para el diagnostico serológico de la I.A 7.2. Estrategia de Monitoreo para la Enfermedad de Newcastle Si bien la vacunación contra la Enfermedad de Newcastle no es obligatoria en aves comerciales, por lo general los lotes de pollos de engorde reciben 1 ó eventualmente 2 dosis de vacunas vivas y/o inactivadas elaboradas en base a cepas lentogénicas (cepas Tipo B1). Las aves reproductoras y gallinas de postura de huevo comercial son vacunadas durante la cría y recría con un mínimo de 3 vacunas, seguida generalmente por una vacuna aplicada antes de la producción. Debido a las vacunaciones sistemáticas que reciben las aves de postura, los niveles de anticuerpos permanecen lo suficientemente elevados al final del ciclo productivo como para dificultar la interpretación de los resultados serológicos, por este ultimo motivo el monitoreo serológico para la E.N. se realiza en la población de pollos de engorde Resultados del Monitoreo Serológico para la E.N. en pollos de engorde Página 13 de 29

14 El muestreo se realizó en la población de pollos de engorde en faena, a fin de evaluar los niveles de anticuerpos obtenidos mediante la prueba de Inhibición de la Hemoaglutinación, resultado que se debe a la respuesta inmune activa a la vacunación o bien al desafío viral en campo. El número de lotes de faena a muestrear se calculó en base al número de establecimientos dedicados a la cría y engorde de pollos, es decir, 3500 granjas registradas en las oficinas locales de Senasa de todo el país, con una prevalencia esperada del 1% y una confianza del 95%. De acuerdo al diseño para el año 2007 (prevalencia de sero-positividad intra predio menor o igual al 15% y un nivel de confianza del 95%) se solicitaron 20 muestras de aves por lote. Fueron procesadas 5569 muestras de suero por la técnica de Inhibición de la Hemoaglutinación, correspondientes a 282 lotes de faena. En el gráfico Nº 1 figura el porcentaje de lotes de faena, cuyos sueros fueron obtenidos en plantas de faena de pollos de engorde, enviados y procesados por la técnica de Inhibición de la Hemoaglutinación (HI) para la Enfermedad de Newcastle, según la ubicación de la granja de origen. El 80% de los lotes muestreados corresponden a granjas situadas en la provincia de Entre Ríos y de Buenos Aires. Grafico Nº 1: Lotes procesados por HI para la E.N., por provincia de origen de los pollos de engorde (n=282), jundic./2007 RIO NEGRO 4% SANTA FE 11% BUENOS AIRES 37% NEUQUEN 1% ENTRE RIOS 43% CORDOBA 4% Página 14 de 29

15 - En la provincia de Buenos Aires, se enviaron muestras provenientes de 12 frigoríficos de aves, totalizando 105 lotes. La mayor cantidad de muestras provienen de granjas de los partidos de San Andrés de Giles, General Pueyrredón, Roque Pérez, Monte y Cañuelas. - En la provincia de Entre Ríos, se enviaron muestras de 12 frigoríficos de aves, totalizando 120 lotes. La mayor cantidad de muestras provienen de granjas de los departamentos de Uruguay y Colón. - En la provincia de Santa Fe, enviaron muestras 6 frigoríficos de aves, totalizando 32 lotes. La mayor cantidad de muestras provienen de granjas del departamento de Las Colonias. - En las provincias de Córdoba y Río Negro, la totalidad de los lotes fueron enviados por 1 frigorífico de cada provincia. En el gráfico N 2, se muestran los resultados serológicos expresados como los promedios geométricos (GMT) de los títulos de anticuerpos hallados por la técnica de HI (Logaritmo en base 2) para la E. de Newcastle, utilizando 4 unidades hemoaglutinantes, en lotes de pollos parrilleros sero positivos. Grafico Nº 2 : Frecuencias Relativas de las Medias Geometricas de los Titulos de HI en lotes de faena de pollos parrilleros, jun.-dic./2007. Frecuencia Relativas de lotes de faena seropositivos (n=257) 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% < > 300 GMT (Log 2 ) El 8,9% de los lotes faenados (n=25) resultaron sero negativos. De los lotes sero positivos el 90% presentó GMT menores a 50, de estos últimos el 64% Página 15 de 29

16 presentó GMT menores a 10, el 14% presentó GMT entre 11 y 20 y el 12% restante presentó GMT entre 21 y 50. Los resultados serológicos de los promedios geométricos de los títulos de anticuerpos hallados por la técnica de HI para la E. de Newcastle (GMT menores a 50) para las aves en edad de faena (35 a 55 días), con una o dos dosis de vacunación se interpretan como normales. Mapa Nº 3: Distribución por origen de los lotes muestreados en plantas de faena de pollos parrilleros, para el diagnostico serológico de la Enf. De Newcastle. 8. Vigilancia Epidemiológica Activa para la I.A. y la E.N. en Aves de Traspatio Para las aves de producción familiar o de traspatio, se consideró como unidad de muestreo a la jurisdicción de la Oficina Local de la Dirección Nacional de Página 16 de 29

17 Sanidad Animal, en razón de que este tipo de aves no se encuentran aisladas entre sí, sino que conviven en pequeñas unidades poblacionales. Durante el año 2007 se definieron cuatro áreas o regiones geográficas, atendiendo al potencial de riesgo de introducción de los virus de la I.A. y la E.N., en base a los conocimientos de la epidemiología de estas enfermedades y las características socioeconómicas y productivas de cada zona: Zona A: Está conformada por el grupo de provincias fronterizas en las cuales podría existir grupos de aves más expuestos al riesgo por encontrarse en zonas limítrofes con países/regiones con Enfermedad de Newcastle endémicos o en vías de erradicación (Bolivia, Paraguay y Brasil). Asimismo en esta zona se presenta un importante tráfico vecinal fronterizo, lícito o ilícito de aves vivas o productos avícolas. La zona A incluye las provincias de Salta, Jujuy, Formosa y Misiones y parte de las provincias de Chaco y Corrientes. Zona B: Debido a que la introducción de estas enfermedades en las aves industriales podría ocurrir a través del contacto con otras aves comerciales, a través del contacto con aves de traspatio o a través del hombre o fomites, la zona B esta conformada por el conjunto de provincias/localidades que presentan una elevada densidad de explotaciones avícolas industriales, con aglomeración de distintas especies de aves, distintos tipos de producción, diferentes niveles de bioseguridad y un gran movimiento de aves industriales y trabajadores directa o indirectamente vinculados a la producción avícola industrial. Esta zona incluye la provincia de Entre Ríos y algunos departamentos de la Provincia de Buenos Aires, Santa Fe, Córdoba, Río Negro y Neuquén. Zona C: En la Argentina se pueden encontrar una gran diversidad de ambientes acuáticos, los que se estima que son utilizados por más de 200 especies de aves acuáticas, migratorias y residentes. Se define la zona C como aquella conformada por las localidades, en donde las aves domésticas de los predios de traspatio, podrían llegar a tener contacto con este tipo de aves (es decir zonas cercanas, en un radio de 5 a 10 Km. de lagunas, humedales, ríos, bañados y áreas marítimas costeras), o zonas que se hallen en las rutas de paso de aves acuáticas migratorias. Zona D: Conformada por el resto de zonas/provincias del país. Página 17 de 29

18 8.1. Resultados del Monitoreo Serológico y Virológico en predios de aves de traspatio Cuadro Nº 6 : Cantidad de muestras de aves de traspatio que ingresaron y fueron procesadas para el diagnostico de la I.A. y la E.N., año 2007 NUMERO Y TIPO DE MUESTRAS TIPO DE AVE Hisopados Hisopados TOTAL Sueros Cloacales Traqueales GALLINA o GALLO POLLO PATO PAVO GANSO SIN ESPECIFICAR TOTAL GENERAL Durante el año 2007 fueron muestreados por los agentes de las oficinas locales de Senasa 464 predios de aves de traspatio. Las muestras provenientes de un mismo predio de aves fueron procesadas para diagnóstico de la Enfermedad de Newcastle y la Influenza Aviar por distintas técnicas, ver Cuadro N 7. Se detalla en el Cuadro Nº 8 la distribución por provincias de los predios de traspatio muestreados en todo el país. Concentrándose en su mayoría en las zonas de mayor producción avícola comercial (Buenos Aires, Entre Ríos, Córdoba y Santa Fe) y en algunas provincias limítrofes (Corrientes, Misiones, Chaco, Formosa y Salta). Página 18 de 29

19 Cuadro Nº 7 : Número de predios y muestras negativas a I.A. y E.N., según prueba diagnostica realizada. Diagnóstico Prueba Diagnóstica Número de predios Número de muestras Influenza Aviar ELISA de Ac. y/o IDAG Influenza Aviar Inhibición de la Hemoaglutinación (A/H5 y H7) 2 10 Influenza Aviar Real Time RT-PCR (A/H5 y H7) Enfermedad de Newcastle Enfermedad de Newcastle Influenza Aviar y Enfermedad de Newcastle Inhibición de la Hemoaglutinación RT-PCR en tiempo real (Paramyxovirus tipo I) Inoculación en huevos embrionados y Directigen Flu A Test En el gráfico Nº 3, se muestran los resultados serológicos expresados como los promedios geométricos de los títulos de anticuerpos hallados por la técnica de HI (Log2) para la E. de Newcastle (utilizando 4 UHA) en predios de aves de traspatio sero positivos. Gráfico Nº 3: Frecuencias Relativas de las Medias Geometricas de los Titulos de HI en predios de aves de traspatio, jun.-dic./2007 Frecuencia Relativas de predios de aves de traspatio seropositivos (n=363) 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% < > 300 GMT (Log 2 ) Página 19 de 29

20 El 21 % de los predios de traspatio (n=97) resultaron sero negativos. De los predios sero positivos el 84.3% presenta GMT menores a 10 y el 7.16 % presenta GMT entre 11 y 50. El 7.99% restante presenta GMT mayores a 50. La totalidad de las muestras se interpretan como resultado negativo a la infección por la Enf. De Newcastle. En aquellos lotes, donde el 50 % o más de las muestras arrojaron títulos de HI para la E.N. iguales o mayores a 1024, se procesaron los hisopos correspondientes para aislamiento viral, con resultados negativos. Cuadro Nº 8: Cantidad de predios de aves de traspatio muestreados por provincia, para el diagnostio de la I.A. y la E.N., año 2007 PROVINCIA Nº DE PREDIOS PROVINCIA Nº DE PREDIOS BUENOS AIRES 161 MISIONES 23 CATAMARCA 2 NEUQUEN 3 CHACO 12 RIO NEGRO 15 CHUBUT 5 SALTA 11 CORDOBA 43 SAN JUAN 2 CORRIENTES 53 SAN LUIS 11 ENTRE RIOS 31 SANTA FE 32 FORMOSA 23 SANTIAGO DEL ESTERO 7 LA PAMPA 18 TIERRA DEL FUEGO 3 LA RIOJA 2 TUCUMAN 2 MENDOZA 5 TOTAL GENERAL 464 Página 20 de 29

21 Mapa Nº 4: Distribución geográfica de los predios de aves de traspatio muestreados por oficina local Resultados del Monitoreo Serológico y Virológico en Ferias y Exposiciones Rurales El 70% de las muestras de aves ornamentales fueron obtenidas en la Exposición de Ganadería, Agricultura e Industria, realizada en el Predio Ferial de la Sociedad Rural Argentina en barrio de Palermo, Ciudad Autónoma de Bs. As. durante el mes de agosto del año Las restantes muestras fueron tomadas en gallinas de raza en la Exposición Rural de Chivilcoy y en la Asociación de Criaderos de Aves de Coronel Pringles. En la 121 Exposición de Ganadería, Agricultura e Industria Internacional, se obtuvieron muestras de 77 predios de aves con origen en las provincias de Buenos Aires, Entre Ríos, Santa Fe, Córdoba y San Luis. Las localidades y/o partidos de origen fueron San Miguel, Lobería, Garín, Nueve de Julio, Morón, Chacabuco, San Antonio de Areco, Lujan, Santa Rosa, las Flores, Ramallo, La Plata, Ayacucho, Tandil, Capilla del Señor, Villarino, Roque Perez, Olavaria, Página 21 de 29

22 Valentín Alsina, Veinticinco de Mayo, Marcos Paz, Verónica, Rauch entre otros en la Provincia de Buenos Aires. Las localidades de Gualeguaychú y Concordia en la provincia de Entre Ríos. La localidad de Rosario en la provincia de Santa Fe y las localidades de San Justo y Río Cuarto en la provincia de Córdoba. Durante el muestreo se obtuvieron 365 hisopados cloacales y 210 sueros, pertenecientes a aves de raza entre gallinas, pavos, patos y gansos. De los sueros procesados para I.A. por la prueba de Inmunodifusión en Agar Gel, se obtuvieron 207 sueros negativos y tres muestras reaccionantes a Influenza Aviar tipo A. Se analizaron la totalidad de las muestras mediante la técnica RT-PCR en Tiempo Real para detectar Influenza Tipo A. Dos de las muestras analizadas - un hisopado individual y un pool de cinco hisopados - resultaron positivas a Influenza tipo A y negativas a los virus de Influenza subtipos H5 y H7. La totalidad de las muestras fueron inoculadas en huevos embrionados resultando negativas al aislamiento de virus hemoaglutinantes en primer pasaje por embriones. La presencia de aves positivas a la prueba de Inmunodifusión en Agar Gel y a la técnica de RT-PCR, llevó a una investigación epidemiológica a campo en el establecimiento de origen de las muestras, que se describe posteriormente. Se realizó además la prueba HI para el virus de la Enf. De N.C. Los resultados serológicos fueron negativos en el 7% de las muestras y presentaron un GMT menor a 10 en el 93% de los casos. Cuadro Nº 9: Número muestras de aves ornamentales negativas a I.A. y E.N., según prueba diagnostica realizada, obtenidas en Ferias y Exposiciones Rurales Diagnóstico Prueba Diagnostica Número de muestras Influenza Aviar Inmunodifusión en Agar Gel 265 Influenza Aviar Real Time RT-PCR (A/H5 y H7) 591 Enfermedad de Newcastle Inhibición de la Hemoaglutinación 235 Influenza Aviar y Enfermedad de Newcastle Inoculación en huevos embrionados y Directigen Flu A Test 591 Página 22 de 29

23 9. Atención de Notificaciones de Mortandad y/o Sospechas de Enfermedad Se describen brevemente a continuación alguna de las notificaciones de mortandad en aves y/o sospechas de enfermedad atendidas por el personal de Senasa, durante el año 2007: 1) Provincia de Buenos Aires, Partido de General Rodríguez (Marzo 2007) A través de una denuncia realizada por el veterinario municipal, la oficina local de Senasa de Gral. Rodríguez notificó la presencia de aves muertas y enfermas en un establecimiento familiar con un total de 9 aves. Cuatro personas de dicha familia fueron atendidas en el Hospital Posadas afectadas de miositis e hipertermia. El diagnóstico presuntivo del grupo familiar fue intoxicación. En el laboratorio de Senasa se recibieron aves para su análisis. Se descarto la presencia de I.A. y E.N.. En las necropsias se hallaron lesiones compatibles con tuberculosis, caquexia y/o parasitosis. 2) Provincia de Córdoba, Departamento de Colón, Unquillo (Junio 2007) El día 14 de junio se recibió una denuncia de la Patrulla Ambiental, dependiente de la Policía de la Provincia de Córdoba, sobre una mortandad de aves silvestres en un Cementerio de Mascotas ubicado en una zona rural de la localidad de Unquillo. Personal de la Coordinación Temática de Sanidad Animal de Córdoba procedió a la inspección del establecimiento y de los predios vecinos en base a lo normado. La propiedad está constituida por aproximadamente una hectárea, la mitad corresponde al citado cementerio y la otra fracción a la casa del encargado poseedor de un gallinero con aprox. diez gallinas para consumo familiar. Se constató la mortandad de alrededor de 500 aves silvestres, principalmente catitas serranas (Bolborhynchus aurifrons) y en menor cantidad tordos (Molothrus bonariensis) y palomas. Los cadáveres se encontraron en su mayor número alrededor de los árboles y diseminados por todo el establecimiento. Se evidenció la caída de aves en pleno vuelo y signos nerviosos en aves convalecientes (espasmos, aleteos, contracciones, parálisis espásticas de los miembros pélvicos), algunas aves muertas permanecían aferradas a las ramas Página 23 de 29

24 de los árboles. Se constataron aves carroñeras en el lugar alimentándose de los cadáveres, pero no se encontraron aves de éstas especies muertas ni con sintomatología nerviosa. Las aves de corral de consumo familiar no presentaban mortandad ni signos clínicos de enfermedad. El personal de Epidemiología de la Provincia tomó muestras de agua y de alimentos (maíz) que serían analizados en un laboratorio local. El personal de Senasa realizó la toma de muestras aves silvestres, se procedió también al enterramiento sanitario de las aves muertas y se instruyó al personal encargado del predio sobre el manejo de los cadáveres que en lo sucesivo pudieran aparecer. Todas las muestras resultaron negativas a la I.A. y la E.N. El diagnóstico presuntivo fue toxicidad por plaguicidas agrícolas. 3) Provincia de Buenos Aires, Departamento Pilar (Agosto 2007) El 6 de agosto el propietario de una granja avícola de gallinas de postura ubicada en la Localidad de Pilar (Lat. 34,50144º S., Long. 58,92275º O.) realizó una denuncia de sospecha de Enfermedad de Newcastle en la Oficina Local de Pilar, dado que observó en su granja aves decaídas, con chasquido, diarrea, y algunas con torsión de cuello. En la visita realizada se notificaron 100 aves muertas, 50 sanas y 50 enfermas. Como consecuencia, se procedió a la interdicción del establecimiento y se tomaron las medidas sanitarias previstas, obteniéndose 50 muestras de sueros e hisopados cloacales. Las muestras analizadas resultaron negativas a la I.A. y la EN. 4) Provincia de Buenos Aires, Partido de Lújan. (Agosto 2007) Debido a la presencia de serología positiva a I.A. por la prueba de IDAG y a la detección de virus de I.A. tipo A por la prueba de RT-PCR en pavos ornamentales en la Exposición Rural de Palermo (Ver página 19), se realizó una investigación epidemiológica en el establecimiento de origen de dichas aves. El establecimiento avícola ubicado en la localidad de Luján, Provincia de Buenos Aires (Lat. 34,64989º S.; Long. 59,14236º O.), se dedica a la cría y reproducción de aves de raza u ornamentales, observándose tres tipos de crianza: Aves en confinamiento (en jaulas individuales en local cerrado) Página 24 de 29

25 Grupos de 10 a 30 aves, en corrales, delimitados por alambre tejido en todo su perímetro y en el techo. Aves que deambulan en condiciones de semilibertad con encierre nocturno. Cabe destacar la presencia de lagos artificiales en el perímetro del establecimiento. Ninguna de las aves presentes en el establecimiento manifestaba signos clínicos de enfermedad. TIPO DE AVES CANTIDAD TOTAL EXISTENTE Nº de hisopados obtenidos Nº de sueros obtenidos PAVOS GALLINAS DE RAZA PATOS FAISANES PALOMAS La totalidad de los hisopados fueron analizados mediante la técnica de RT- PCR resultando negativas a Influenza Aviar tipo A. Estas muestras también resultaron negativas al aislamiento de virus hemoaglutinantes en primer pasaje por embriones de pollo. 39 sueros resultaron negativos a la prueba de IDAG, mientras que 22 sueros de pavos resultaron positivos a I.A. Estos sueros fueron sometidos a las pruebas de H.I. para los subtipos H3, H5, H6, H7 y H9. Solo 3 muestras resultaron positivas al subtipo H6. Se concluye que las aves han estado infectadas con el virus de influenza aviar, posiblemente a través del contacto directo o indirecto con aves silvestres. Se continúa con la investigación. Página 25 de 29

26 5) Provincia de Entre Ríos, Departamento de Paraná, Nueva Paraná (Septiembre 2007) El 14 de septiembre en la DILAB del Senasa se recibieron muestras de aves silvestres denominada Garza Bruja (Nicticorax nicticorax) provenientes de una mortandad ocurrida en el departamento de Paraná. Las muestras resultaron negativas para la I.A. y la Enfermedad de Newcastle. A la necropsia se determinó caquexia, emaciación y parasitosis. No se observaron lesiones compatibles con enfermedades causadas por virus hemoaglutinantes. 6) Provincia de Santiago del Estero, Departamento Ojo de Agua, Villa Ojo De Agua (Noviembre de 2007) El 22 de noviembre el Centro Regional NOA Sur notificó una mortandad de aves silvestres en las costas y en el cauce del río Utis y del río Dulce, (Lat ,7 S; Long ,8 O) en una extensión aproximada de 200 Km., en jurisdicción de los Departamentos Mitre, Quebrachos y Salavina. Las aves encontradas muertas eran de las especies Biguá (Phalacrocórax olivaceus)., Mirasole Chico (Ixobrychus involucris) y Cala o Maca (Podiceps sp). En la inspección realizada se observaron aves muertas, con decaimiento así como también aves sin signos clínicos de enfermedad. Las muestras resultaron negativas a Influenza Aviar y Enf. De Newcastle. 10. Controles de Importación Si bien los monitoreos realizados en las aves vivas importadas no forman parte del programa de vigilancia activa para la I.A. y E.N., se resumen los resultados a continuación debido a que estos controles constituyen una parte importante del plan de prevención del ingreso de estas enfermedades al país. Por cada lote importado de planteles de aves industriales se toman al azar 20 pollitos BB hembras y 10 pollitos BB machos, en las reproductoras abuelas se toma la misma cantidad de pollitos por cada línea (macho y hembra). En la importación de aves ornamentales se muestrean el total de las aves importadas. Página 26 de 29

27 Durante el año 2007 se importaron 41 lotes de aves comerciales y 3 lotes de aves silvestres. El 49% de los lotes comerciales importados fueron reproductoras abuelas de las líneas pesadas provenientes en su totalidad de Estados Unidos y Brasil; el 51% restante lo constituyeron reproductoras padres de las líneas livianas provenientes de Alemania, Francia, España y Brasil. La totalidad de las muestras resultaron negativas a: Micoplasma Gallisepticum y M. Sinoviae, Salmonella sp., Influenza Aviar y Enfermedad de Newcastle. Cuadro Nº 10: Número de muestras de aves obtenidas de lotes importados de aves comerciales (n: 41) o silvestres (n 3 lotes = 82 aves) durante el año 2007, Negativas a I.A. y E.N. Diagnostico y prueba diagnostica utilizada Diagnostico Molecular para la influenza Aviar (RT-RT-PCR) Diagnostico Molecular para Paramyxovirus tipo I (por prueba de RT-RT-PCR ) Diagnostico virológico para IA y EN (por cultivo en huevos embrionados de gallina) Diagnostico Serológico de IA (Inmunodifusión en Agar Gel o ELISA indirecto) Diagnostico de Chlamidya sp. (por prueba de ELISA de Ac.) Diagnostico de Mg, Ms y Salmonelosis (por pruebas de ARP para Mg y Ms y diagnostico bacteriológico de Salmonelosis Aviar) Total de Muestras Analizadas Número de muestras Discusión y conclusiones El sistema de vigilancia clínico en aves industriales presenta una baja sensibilidad para la detección de estas enfermedades por cuanto no se recibieron muestras para realizar el diagnóstico diferencial con otras afecciones aviares. Teniendo en cuenta que en aves vacunadas contra la E.N. o en casos de infección por virus de influenza aviar de baja patogenicidad muchas veces se puede manifestar mortandad leve o signos clínicos leves respiratorios o digestivos, se debe tener la duda diagnóstica sobre si es o no una infección causada por estas enfermedades. Para ello se requiere la difusión de los criterios diagnósticos y de vigilancia para estas noxas entre los veterinarios responsables sanitarios de las empresas avícolas. Página 27 de 29

28 El diseño estadístico realizado para el muestreo de aves de traspatio en base a las diferentes zonas consideradas de riesgo, no mostró una diferencia importante en cuanto a sus resultados. Se requiere para el nuevo programa de V.E. del año 2008, concentrarse en diferentes supuestos. Asimismo se requiere profundizar sobre las características de esta población en cuanto a su número y distribución. Desde el año 1998 el Senasa ha generado información periódica y sistematizada acerca del grado de inmunidad y ausencia de cepas del virus de Newcastle patógeno en las aves domesticas del país. En la producción comercial, los lotes de aves cuentan con un programa de vacunación de aplicación a todas las aves, esto supone impedir el ciclo de diseminación viral al existir inmunidad en las aves susceptibles. En comparación con las muestras de lotes de pollos en faena obtenidas en el año 2006, durante el año 2007 se obtuvieron mayor cantidad de lotes sero negativos. Con referencia a los lotes sero positivos, se obtuvieron un 20% más de lotes con títulos de GMT menores a 10%. No hay aparente actividad viral y se recomienda sostener la vacunación sistemática a las aves susceptibles. Las aves de traspatio, en su gran mayoría no se encuentran vacunadas y por lo tanto se consideran centinelas de las enfermedades de las aves industriales, con respecto a la Enfermedad de Newcastle, durante el año 2007 no se han aislado cepas patógenas del virus de N.C. en dichas aves. La capacitación en el diagnóstico de I.A., la incorporación de nuevo equipamiento y nuevas técnicas permitió durante estos tres últimos años aumentar la sensibilidad en la detección de anticuerpos o virus que pudieran circular en la población de aves domésticas o silvestres. A su vez a partir del año 2006, se organizó una red de vigilancia epidemiológica para la I.A. en aves silvestres constituida por instituciones públicas y privadas, entre las que se encuentra el Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) que a través de sus laboratorios realizó los diagnósticos en muestras obtenidas de aves silvestres vivas o provenientes de la caza deportiva. De esta manera se recogieron cerca de 3000 muestras de hisopados cloacales de aves silvestres, que resultaron negativas a los virus de I.A. de notificación obligatoria (H5 y H7). Sin embargo se han documentado detecciones de virus de influenza aviar de notificación no obligatoria (no H5 ni H7). Los resultados obtenidos hasta el momento permiten concluir, con una confianza del 95% que de existir la Enfermedad de N.C. y de la I.A en el país, su prevalencia en aves domésticas seria menor al 1%. La Argentina no se encuentra exenta del riesgo de ingreso de estas enfermedades. Sin embargo, la industria cuenta con instrumentos de prevención elementales: la bioseguridad de los establecimientos avícolas industriales y la vacunación sistemática contra la E.N. Se requiere entonces Página 28 de 29

29 continuar profundizando en el buen uso de estas herramientas, el Senasa por su parte debe fiscalizar el cumplimiento de la normativa vigente en materia de bioseguridad. Asimismo este servicio debe: continuar monitoreando las poblaciones de aves susceptibles para la detección temprana de ambas enfermedades, dar continuidad a la capacitación del personal de campo en la toma y envío de muestras, atención de sospechas de enfermedad o notificaciones de mortandad y detección clínica de estas enfermedades. Página 29 de 29