Modulo IHQ General. Ronda Nº33

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1 SEAP Calle Ancora, 3, º B 5 MADRID Tfno. y Fax MAIL: SEAP@SEAP.ES Programa de Garantía de Calidad en Patología Modulo IHQ General Ronda Nº33 Antigeno probado: WT-1 Tejido probado: Trompa y riñón Instrucciones: Se solicitó a los participantes en la ronda teñir con WT-1 la preparación remitida. Preparaciones de tejidos fijados en formol tamponado al %, ph 7 durante horas. Asimismo se solicito teñir con WT-1 una preparación propia usada como preparación control. Ambas preparaciones fueron devueltas para su evaluación, así como las condiciones y protocolos de tinción utilizados. Número de laboratorios participantes: -Inscritos: -Contestados: 5(79%) Estudio de los controles remitidos por el programa GCP: Considerando que una puntuación igual o superior a 1 se considera aceptable el 1% de las preparaciones remitidas así se consideraron, por otra parte un 19 % obtuvieron una puntuación menor de 1. 1

2 Dentro del grupo de las valorables, solo un 9% fueron valoradas como óptimas (puntuación mayor o igual a 1) Los principales problemas detectados fueron principalmente: Tinciones ligera o muy ligeras, Presencia de Fondo entre ligero y moderado, Pretatamientos excesivos y tincion en bastantes casos que se considero como inadecuada o de fondo en citoplasma de cellas endoteliales. Estudio de los controles de cada centro: De igual forma que antes, considerando una puntuación igual o mayor que 1, como tinción adecuada y mayor o igual que 1 como tinción óptima, los resultados muestran un % de tinciones adecuadas, de las cuales un % del total fueron consideradas como óptimas. Un % de las tinciones evaluadas, fueron consideradas como no adecuadas por el grupo de evaluadores. Los problemas mas frecuentemente encontrados fueron: El exceso de pretratamiento, la débil intensidad de tinción y la presencia de fondo, igual que en el caso de los controles GCP. Tejidos utilizados como control por los diferentes centros, fueron principalmente bloques con ovario, peritoneo, riñón y trompa. Autoevaluación: La autoevaluación es una parte primordial del programa. Se solicita a un Técnico Especialista y a un Patólogo del centro que evalúen la tinción del control enviado por el GCP y del control local, siguiendo los mismos criterios expuestos anteriormente. Los resultados fueron los siguientes: Control del GCP:

3 1 TÉCNICO LOCAL WT- 1 (GCP) 1 PATÓLOGO LOCAL WT- 1 (GCP) Como se puede observar en los gráficos la percepción local sobre los resultados de la técnica es superior a la valoración de los observadores externos, siendo de un 57% los casos valorados como tinción optima por los técnicos y un 5% de los patólogos. Control local: 1 TÉCNICO LOCAL WT- 1 (LOCAL) 1 PATÓLOGO LOCAL WT- 1 (LOCAL) De igual modo en el caso de los controles locales, la percepción local sobre los resultados de la técnica es superior a la valoración de los observadores externos, siendo del 5% los casos valorados como tinción optima por los técnicos y el 5% en el caso de los patólogos. Inmunotinción Óptima: Una tinción nuclear fuerte y distinta en prácticamente todas las células epiteliales y musculares lisas de la trompa de Falopio. Una tinción nuclear fuerte y distinta en prácticamente todas las células neoplásicas del carcinoma seroso de ovario. A moderada a fuerte tinción nuclear en las células del estroma de la carcinoma endometrioide uterino. No tinción de los túbulos renales o el adenocarcinoma de pulmón. Se esperaba una reacción citoplasmática en una variedad de células, por ejemplo, células endoteliales, células musculares lisas y células plasmáticas y aceptado para el clon mab F-H. *Nordic Immunohistochemical quiality control Assessment Run 3

4 Anticuerpo empleados En base a los datos extraídos de las fichas técnicas enviadas por los participantes en la ronda, los anticuerpos mas usados son de. Dako () Roche () Leyca, Master Diagnostica y otros en mucha menor proporcion Mas del 95% usaron el clon F-H La mejor puntuación obtenida en esta ronda de evaluación con 19 puntos las han obtenido los siguientes métodos: Protocolo con el que se obtuvo mejor puntuación (/ control GCP): o Método: Envision FLEX o Automatización: Dako Autostainer o Recuperación antigénica con calor: si o Tampón y Ph: 7. o Anticuerpo primario: H-F o Cromógeno: DAB min o Método: Ventana o Automatización: Benchmark o Recuperación antigénica con calor: si o Tampón y Ph: 7. o Anticuerpo primario: H-F o Cromógeno:.DAB min Protocolo con el que se obtuvo mejor puntuación (/ control Local): o Método: Ventana o Automatización: Benchmark o Recuperación antigénica con calor: si o Tampón y Ph: 7. o Anticuerpo primario: H-F o Cromógeno:.DAB min Comentarios El gen WT1 localizado en el cromosoma 11p13 codifica para un factor de transcripción, que juega un papel principal en el desarrollo de órganos genitourinarios. Hay por lo menos ocho isoformas. WT1 se sintetiza y reside en el citoplasma en una forma inactiva. Cuando se activa a través de la fosforilación se transloca al núcleo. WT1 influye en la proliferación celular mediante la supresión de bcl- y la regulación de cadherina y p53. En el epitelio normal, la expresión de WT1 nuclear se limita en gran medida a ovario (epitelio superficial y quistes de inclusión) y el tubo de Falopio, mientras que WT1 no

5 se encuentra en el epitelio endometrial o cervical. En cuanto a las células no epiteliales, WT1 nuclear se encuentra en mesotelio y algunas células estromales submesoteliales, las células estromales del tracto genital femenino, las células no germinales testiculares, y riñón (podocitos), las células madre de médula ósea CD3 +, y algunos células esplénicas. Aunque identificada originalmente como un gen supresor de tumor, una variedad de neoplasias están asociadas con WT1. Algunos casos muestran mutación del gen WT1 que conducen a la pérdida de su actividad supresora. En otros casos parece que de tipo salvaje WT1 se acumula debido a mutaciones en las vías mas abajo. Entre los tumores epiteliales, WT1 nuclear se expresa fuertemente en el carcinoma seroso de ovario (97% de los tumores, por lo general una reacción generalizada, carcinoma seroso peritoneal, carcinoma de ovario transicional, y aproximadamente la mitad de carcinoma endometrioide de ovario (grado y 3). También adenoma metanéfrico es positivo. Expresión de WT1 nuclear ha sido documentada en un pequeño porcentaje de otros diversos carcinomas tales como carcinoma de células claras de ovario, carcinoma seroso papilar uterino, carcinoma endometrioide uterino, carcinoma de células renales (cromófobo y papilar), carcinoma de mama, carcinoma de pulmón y carcinoma pancreáticobiliar. Dentro de los tumores no epiteliales, WT1 nuclear se expresa fuertemente en la gran mayoría de mesotelioma maligno y los tumores del estroma del cordón sexual. WT1 Nuclear además se ha demostrado en el tumor de Wilms (alrededor de 5% de los casos que implican, epiteliales, estromales y los elementos blastemal), tumor rabdoide maligno, tumor adenomatoidea, sarcoma del estroma endometrial, leiomiosarcoma uterino, tumor de Müller mixto, así como en algunos linfomas malignos (linfoblásticas y linfoma de Burkitt), y la mayoría de los casos de leucemia aguda. En el tumor desmoplásico de células pequeñas redondas (DSRCT), WT1 nuclear se expresa en la gran mayoría de los casos debido a una anomalía cromosómica específica, t (11; ) (p13; q1) que fusiona EWS con WT1 que conduce a la producción de una proteína quimérica con la actividad reguladora de la transcripción. Sin embargo, en la proteína quimérica se pierde el C-terminal de manera que la expresión puede no ser detectado con el N-terminal dirigida mab clon F-H. En rabdomiosarcoma, la diferenciación rhabdomyoblastic en el tumor de Wilms, neuroblastoma y, una tinción citoplásmica (pero no nuclear) para WT1 puede ser visto. WT1 no se demuestra en el sarcoma / tumor neuroectodérmico primitivo periférico de Ewing. WT1 se utiliza particularmente para distinguir mesotelioma maligno y carcinoma seroso de ovario de carcinomas no seroso.en cuanto a mesotelioma maligno, calretinina y WT1 son superiores a citoqueratina 5/, N-cadherina y trombomodulina. WT1 también es aplicable para el diagnóstico diferencial de los tumores pequeños de la infancia celular. Bibliografia - Carpentieri DF, Nichols K, Chou PM, Matthews M, Pawel B, Huff D. The expression of WT1 in the differentiation of rhabdomyosarcoma from other pediatric small round blue cell tumors. Mod Pathol. Oct;15():-. 5

6 - Goldstein NS, Uzieblo A. WT1 immunoreactivity in uterine papillary serous carcinomas is different from ovarian serous carcinomas. Am J Clin Pathol. Apr;117(): Goldstein NS, Bassi D, Uzieblo A. WT1 is an integral component of an antibody panel to distinguish pancreaticobiliary and some ovarian epithelial neoplasms. Am J Clin Pathol. 1 Aug;11():-5. - Hill DA, Pfeifer JD, Marley EF, Dehner LP, Humphrey PA, Zhu X, Swanson PE. WT1 staining reliably differentiates desmoplastic small round cell tumor from Ewing sarcoma/primitive neuroectodermal tumor. An immunohistochemical and molecular diagnostic study. Am J Clin Pathol. Sep;11(3): O'neill CJ, Deavers MT, Malpica A, Foster H, McCluggage WG. An Immunohistochemical Comparison Between Low-Grade and High-Grade Ovarian Serous Carcinomas: Significantly Higher Expression of p53, MIB1, BCL, HER-/neu, and C-KIT in High-Grade Neoplasms. Am J Surg Pathol. 5 Aug;9(): Ordonez NG. The diagnostic utility of immunohistochemistry in distinguishing between mesothelioma and renal cell carcinoma: a comparative study. Hum Pathol. Jun;35(): Ordonez NG. The immunohistochemical diagnosis of mesothelioma: a comparative study of epithelioid mesothelioma and lung adenocarcinoma. Am J Surg Pathol. 3 Aug;7(): Waldstrom M, Grove A. Immunohistochemical expression of Wilm's tumor gene protein in different histologic subtypes of ovarian carcinomas. Arch Pathol Lab Med. 5 Jan;19(1):5-.