MÓDULO DE IHQ GENERAL. Ronda nº33. Antígeno probado: Napsin A. Tejido probado: SEAP-GCP: Pulmón y riñón. LOCAL: Variable.

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1 MÓDULO DE IHQ GENERAL Ronda nº33 Antígeno probado: Napsin A Tejido probado: SEAP-GCP: Pulmón y riñón. LOCAL: Variable. Características de Napsin A: Proteasa citoplasmática de 420 aminoácidos y 45 kda, que pertenece a la familia de peptidasas A1, que codifica el gen NSPSA localizada en el Chr 19q13.3. Se expresa predominantemente en tejido pulmonar y renal. En el pulmón NapA se expresa en los pneumocitos de tipo II, dónde está implicada en la producción de proteína surfactante B, y está regulada por TTF-1. Los macrófagos intralveolares contienen Napsina A, como resultado de su fagocitosis. En el parénquima renal, NapA se expresa en los túbulos renales proximales, dónde participa en el catabolismo proteico lisosomal. Napsin A se expresa en la mayoría de adenocarcinomas pulmonares no mucinosos (60-90%) y en el carcinoma renal papilar (70%). Su expresión disminuye en los adenocarcinomas pulmonares pobremente diferenciados, adenocarcinomas mucinosos y de célula grande (20-30%). En la mayoría de estudios publicados Napsin A no se expresa en el carcinoma de células escamosas de pulmón. Otro de los carcinomas con expresión escasa y focal es el carcinoma renal de células claras (10-40%) y el carcinoma papilar de tiroides (5 %). Finalmente, no se descrito expresión de Napsin A en el carcinoma pulmonar de célula pequeña, ni en carcinomas de mama, gástrico, colorectal, páncreas, hígado, ovario y endometrio. Aplicación del anticuerpo: NapA se utiliza en el diagnóstico diferencial entre adenocarcinoma pulmonar y de células escamosas. Formando parte de un panel de anticuerpos con TTF-1 y p63. 1

2 También se utiliza en al diagnóstico diferencial con el mesotelioma pleural, junto con el TTF-1 y la Calretinina. Se postula que Napsin A muestra al menos la misma sensibilidad que TTF1, pero que su especificidad es aún mayor. En el adenocarcinoma de origen desconocido, Napsin A junto con TTF1 apoyarían un origen pulmonar de la neoplasia, o renal, si se utiliza junto a PAX8. Instrucciones: Los participantes fueron invitados a teñir con Napsin A las preparaciones remitidas por el programa (GCP) que consistía en un fragmento de tejido pulmonar y renal (fijados en formol al 10%, ph 7, durante 24 horas), y su preparación control, devolviendo ambas preparaciones para su evaluación. Número de laboratorios participantes: - Nº Inscritos: 82 - Nº Participantes: 42 (51 %) Estudio de los controles remitidos por el programa GCP: Los resultados de la evaluación han sido los siguientes: Valoración ÓPTIM O, 29%, 29% BUENO, 33%, 33% POBRE, 12%, POBRE 12% REGULAR BUENO ÓPTIMO REGUL AR, 26%, 26% 2

3 Serie2, 16, Serie2, 12, 6 5 Serie2, 10, Serie2, 13, Serie2, 8, 4 4 Serie2, 14, Serie2, Serie2, 17, 19, Serie2, 11, Serie2, 15, Serie2, 5, Serie2, Serie2, 4, Serie2, 1 6, Serie2, 17, 1 9, 1 La mayoría de los centros (62 %) (26/42) obtuvieron una puntuación igual o superior a 12/ 20 considerada como tinción aceptable. De estos, en la mayoría, la puntuación fue considerada buena en la práctica diaria pero mejorable (33 %) (9/42). Tan sólo un 29 % de los centros mostraron una tinción óptima con una puntuación superior a los 16 puntos (12/42). Finalmente, un 38% de los centros obtuvieron una puntuación considerada regular o pobre. Se remitió a los participantes una preparación que incluía un fragmento de tejido pulmonar y renal. La expresión de NapA es citoplasmática y granular difusa. Se consideró como óptima una tinción moderada, granular y citoplasmática de casi todos los pneumocitos de tipo II y macrófagos pulmonar. En el riñón, tinción débil a moderada, granular citoplasmática de la mayoría de las células epiteliales de los túbulos proximales renales. Estudio de los controles de cada centro: Los resultados de la evaluación han sido los siguientes: Valoración ÓPTIM O, 21%, POBRE, 10%, 10% 21% POBRE REGUL AR, 17%, REGULAR 17% BUENO BUENO, ÓPTIMO 52%, 52% 3

4 Serie2, 12, 15 Serie2, 11, Serie2, 16, 4 Serie2, Serie2, 15, 4 17, Serie2, 4, 3 Serie2, Serie2, 13, 14, 3 Serie2, 3 18, Serie2, 9, Serie2, 5, Serie2, 1 8, 1 v La mayoría de los centros (73 %) (31/42) obtuvieron una puntuación igual o superior a 12/ 20 considerada como tinción aceptable. El 52 % de los centros (22/42) obtuvieron una puntuación entre 12 y 15, considerada aceptable en la práctica diaria pero mejorable. Un 21 % de los centros mostraron una tinción óptima o cercana con una puntuación superior a los 16 puntos (9/42). Finalmente, tan sólo 27% de las preparaciones obtuvieron una puntuación regular o pobre (11/42). En las preparaciones remitidas como controles para Napsina A de adenocarcinomas pulmonares, se consideró óptima la tinción moderada a intensa, granular citoplasmática de la mayoría de las células neoplásicas. El problema más frecuentemente detectado fue una intensidad de tinción inferior a la esperada o leve de las células tumorales, y en el riñón, un número de células epiteliales de los túbulos renales teñidas con tinción leve o ausente inferior a la considerada como óptimo en la valoración del GCP. En muchos casos se ha observado un exceso de pretratamiento con degradación excesiva del tejido, tinción irregular de células, y menos frecuentemente una tinción del tejido inespecífica o de fondo. Las tinciones consideradas buenas o regulares, se observó una tinción disminuida a la esperada en las células diana, o bien una tinción no adecuada o irregular de los tejidos. Las principales causas de una tinción buena pero insuficiente fueron: el tipo de anticuerpo utilizado, siendo el que obtuvo mejores resultados el clon IP64, o una escasa concentración del anticuerpo. En cuanto a la utilización del tejido pulmonar y renal como controles, el tejido renal resultó más informativo para la adecuada calibración del protocolo inmunohistoquímico. Finalmente, se podría utilizar como control negativo el colon, ya 4

5 que no deberíamos observar tinción alguna en las epiteliales ni en los macrófagos del estroma. Anticuerpos y métodos evaluados: En el 95% de los centros se remitió la hoja técnica utilizada para la obtención de la tinción inmunohistoquímica. Los anticuerpos utilizados en la realización de la tinción inmunohistoquímica fueron: Clon MRQ-60: 17/40 (43%) Clon IP64: 5/40 (13 %) Policlonales: 11/40 (27 %) Desconocido: 4/40 (10 %) Clon TMU-Ad02: 2/40 (5%) La mayoría de los centros que han obtenido una tinción aceptable, buena o muy buena utilizaron el clon MRQ-60 (55 %) (16/29). Tan sólo un centro obtuvo un resultado pobre utilizando este clon. La mayoría de los centros utilizaron este anticuerpo pre diluido. El rango de diluciones del anticuerpo descritas en los protocolos es entre 1:500 y 1:800, dependiendo de la sensibilidad del protocolo utilizado. Los centros que han utilizado el resto de clones, han obtenido resultados regulares o pobres (entre un 40 y 100%) con tinción claramente insuficiente y débil de células diana tanto en el CGP como en el control local. Es recomendable la utilización de recuperación antigénica mediante pretratamiento con calor con un buffer alcalino como Tris-EDTA/EGTA ph 9 con sistemas de detección de polímeros/ multímeros. En otros casos no consta esta información en el protocolo enviado (4/40) (10%). Por último, no se aconseja sistemas de detección de Biotina por dar lugar a tinciones granulares citoplasmáticas por detección de biotina endógena que podrían confundirse con la tinción de Napsin A. La mejor puntuación obtenida en esta ronda de evaluación con 19 puntos han seguido los siguientes métodos: Método Envision Ventana Ultraview Bloqueo Agua Oxigenada Agua Oxigenada Ventana Automatización Autostainer Link 48 Benchmark XT 5

6 Recuperación antigénica PT Link Ventana Benchmark XT Anticuerpo primario MRQ-60 (prediluido) 20 min. MRQ-60 (prediluido) 8 min. Cromógeno DAB DAKO Ventana Optiview Universal DAB Chromogen Comentarios: En esta ronda el clon MRQ-60 ha demostrado un mayor número de resultados óptimos o buenos para Napsin A. Utilizando algunos clones como 352A-76 o , se han obtenido resultados muy pobres o falsos negativos. En cuanto a la utilización de controles, el tejido renal resultó más informativo para la adecuada calibración del protocolo inmunohistoquímico. Referencias Agackiran Y, Ozcan A, Akyurek N, Nemis L, Findik G, Kaya S. Desmoglein-3 and Napsin A double satín, a useful immunohistochemical marker for differentiation of lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma from other subtypes. Appl Immunohistochem Mol Morphol Jul;20(4): Chernok RD, El-Mofty SK, Becker N, Lewis JS Jr. Napsin A Expression in Anaplastic Poorly Differentiated, and Micropapillary Pattern Thyroid Carcinomas. Am J Surg Pathol May 15 Iqbal J. Role of Napsin A and TTF-1 as a diagnostic marker for lung adenocarcinoma. Arch Pathol Lab Med Feb;137(2):155. Johnson H, Cohen C, Fatima N, Duncan D, Siddiqui MT. Thyroid transcription factor 1 and Napsin A double stain: utilizing different vendor antibodies for diagnosing lung adenocarcinoma. Acta Cytol. 2012;56(6): Mukhopadhyay S, Katzenstein AL. Subclassification of non-small lung carcinomas lacking morphologic differentiation on biopsy specimens: Utility of an immunohistochemical panel containing TTF-1, napsin A, p63, and CK 5/6. Am J Surg Pathol Jan;35(1): Ordónez NG. Napsin A expression in lung and kidney neoplasia: a review and update. Adv Anat Pathol Jan;19(1):

7 Ordonez NG. Value of PAX8, PAX2, napsin A, carbonic anhydrase IX, and claudin-4 immunostaining in distinguishing pleural epitheliooid mesothelioma from metatasic renal cell carcinoma. Mod Pathol Mar 15. Wu J, Chu PG, Jiang Z, Lau SK. Napsin A expression in primary mucin- producing adenocarcinomas of the lung: an immunohistochemmical study. Am J Clin Pathol Feb;139(2): Xu B, Abourbih S, Sircar K, Kassouf W, Aprikian A, Tanguay S, Brimo F. Diagnostic and Prognostic Role of Immunohistochemical Expression of Napsin-A Aspartic Peptidase in Clear Cell and Papillary Renal Cell Carcinoma: A Study Including 233 Primary and Metastasic Cases. Appl Immunohistochem Mol Morphol may 22. Ye J, Hameed O, Findeis-Hosey JJ, Fan L, Li F, McMahon LA, Yang Q, Wang HL, Xu H. Diagnostic utility of PAX8, TTF-1 and napsin A for discriminating metastatic carcinoma from primary adenocarcinoma of the lung. Biotech Histochem.2012 Jan;87(1):