RIDASCREEN Spezifisches IgE
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- Carla Murillo Castro
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1 RIDASCREEN Spezifisches IgE Art. n.: A 0249 IgE específica, 1 Disco de Alergenos incl. reactivos Art. n.: A 0049 Disco de Alergenos Art. n.: A 0041 IgE específica, Kit de reactivos, para 1-96 determinaciones Art. n.: A 0040 IgE específica, Juego de reactivos, para determinaciones Art. n.: A Estándar de IgE específica y kit de control R-Biopharm AG, Landwehrstr. 54, D Darmstadt, Germany Tel.: +49 (0) / Telefax: +49 (0)
2 1. Área de aplicación Para el diagnóstico in vitro. El test RIDASCREEN Spezifisches IgE es un enzimoinmunoensayo (EIA) para la determinación cuantitativa de anticuerpos de IgE específicos en suero humano. El test se debe aplicar para la confirmación de una alergia en caso de sospecha fundada de acuerdo a la anamnesis y al diagnóstico invivo. También como esclarecimiento en los casos de resultados del diagnóstico invivo no coincidentes con la anamnesis se puede con este test detectar anticuerpos de IgE específicos contra posibles alergenos. 2. Resumen y explicación del test La tarea del sistema inmunológico es la defensa contra bacterias patógenas, virus y otros microorganismos. La reacción de defensa sirve como protección del organismo al tener el primer contacto con agentes patógenos y también como una inmunización frente a contactos repetidos. A todas las reacciones alérgicas les ha precedido igualmente un primer contacto asintomático en el cual se formaron ya anticuerpos específicos de la clase E (anticuerpos IgE). En la repetición del contacto con el alergeno desencadenante reaccionan estos anticuerpos IgE con el alergeno y conducen a la liberación de mediadores (casi siempre mastocitos) como histamina, leucotrieno, prostaglandinas etc., los que por su parte conducen a los síntomas de la alergia. Con la detección de estos anticuerpos específicos de IgE en el suero es posible identificar los alergenos desencadenantes cuando existen reacciones alérgicas. Pero con este análisis también se pueden descubrir ya sensibilizaciones sin síntomas. Se trata de un test del tipo alergo-sorbente enzimático (EAST) sobre la base de discos de celulosa. Todos los reactivos descritos en el punto 4 (A0041 y A0040) han sido validados con los discos de alergenos de la Firma R-Biopharm (A0049). Si se utilizan estos reactivos con discos de otros fabricantes le corresponde al usuario la responsabilidad de la validación del test. 3. Fundamento del test Los alergenos están fijados sobre discos de celulosa. Para realización de la prueba se colocan los discos de alergeno en los pocillos de una microplaca de titulación o se encuentran ya en ésta según solicite el médico. Los sueros de los pacientes y los estándar así como los controles negativos y positivo se pipetean sobre los discos correspondientes y se incuban a 37 C. De esta forma se unen los anticuerpos IgE 2 RIDASCREEN Spezifisches IgE
3 alergeno-específicos al alergeno. El material que no se une se elimina mediante lavado. Seguidamente se adiciona anticuerpo antihumano IgE conjugado con fosfatasa alcalina. El conjugado que no se une se elimina mediante lavado. Después se añade sustrato, el cual es desfosforilado por la enzima conjugada que lo convierte en un producto amarillo. La intensidad de la coloración amarilla es proporcional a la cantidad de anticuerpos alergeno-específicos en el suero. La determinación se realiza de forma fotométrica a 405 nm y con la longitud de onda de referencia a 620 nm. Algunos alergenos se acoplan a través del HSA (albúmina de suero humano) al disco de celulosa. Para éstos se requiere el uso adicional de un disco de HSA para incluir los alergenos unidos de forma alergeno-no específica. Estos alergenos están identificados en las listas de códigos de R-Biopharm AG con la indicación - HSA. 4. Contenido del envase Tabla 1: Contenido del envase Kit de reactivos para 1-96 determinaciones (Art. n. A 0041) Plate 1-96 det. 1 Microplaca de titulación DiscS DiscC DiscA AllergyWP 60 ml Standard µl Standard µl Standard µl Standard µl Discos estándar, cantidad que desee el cliente Discos de control, cantidad que desee el cliente Discos de Alergenos, cantidad que desee el cliente (no forma parte del kit de reactivos A 0041) Buffer de lavado, conc. 16 veces; NaN 3, al 1% Color de la tapa: marrón Suero estándar 1, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 0,35; en solución de proteína estabilizada, Suero estándar 2, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 0,70; en solución de proteína estabilizada, Suero estándar 3, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 3,50; en solución de proteína estabilizada, Suero estándar 4, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 17,50; en solución de proteína estabilizada, 3 RIDASCREEN Spezifisches IgE
4 Standard µl Control µl Control 150 µl Conjugate 6 ml AllergySub 12 ml AllergyStop 12 ml Suero estándar 5, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 50,00; en solución de proteína estabilizada, Control positivo de IgE, diluido Suero humano, listo para el uso, concentración: véase etiqueta; en solución de proteína estabilizada, Color de la tapa: tapa roja pequeña Control negativo de IgE, diluido Suero humano, listo para el uso, concentración: véase etiqueta; en solución de proteína estabilizada, Color de la tapa: tapa azul pequeña conjugado IgE anti-humano, (conejo); listo para el uso; anticuerpos conjugados con fosfatasa alcalina en solución estabilizada de proteína, Color de la tapa: azul Solución de sustrato, solución de pnpp en dietanolamina, listo para el uso, Color de la tapa: negro Solución de parada, 0,2 N NaOH, EDTA al 7%, listo para el uso, Color de la tapa: verde Tabla 2: Contenido del envase Kit de reactivos para determinaciones (Art. n. A0040) Plate det. 2 Microplacas de titulación DiscS DiscC DiscA AllergyWP 2 x 60 ml Standard µl Standard µl Discos estándar, cantidad que desee el cliente Discos de control, cantidad que desee el cliente Discos de Alergenos, cantidad que desee el cliente (no forma parte del kit de reactivos A 0040) Buffer de lavado, conc. 16 veces; NaN 3 al 1% Color de la tapa: marrón Suero estándar 1, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 0,35; en solución de proteína estabilizada, Suero estándar 2, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 0,70; en solución de proteína estabilizada, 4 RIDASCREEN Spezifisches IgE
5 Standard µl Standard µl Standard µl Control µl Control 150 µl Conjugate 12 ml AllergySub 2 x 12 ml AllergyStop 12 ml Suero estándar 3, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 3,50; en solución de proteína estabilizada, Suero estándar 4, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 17,50; en solución de proteína estabilizada, Suero estándar 5, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 50,00; en solución de proteína estabilizada, Control positivo de IgE, diluido Suero humano, listo para el uso, concentración: véase etiqueta; en solución de proteína estabilizada, Color de la tapa: tapa roja pequeña Control negativo de IgE, diluido Suero humano, listo para el uso, concentración: véase etiqueta; en solución de proteína estabilizada, Color de la tapa: tapa azul pequeña conjugado IgE anti-humano, (conejo); listo para el uso; anticuerpos conjugados con fosfatasa alcalina en solución estabilizada de proteína, Color de la tapa: azul Solución de sustrato, solución de pnpp en dietanolamina, listo para el uso, Color de la tapa: negro Solución de parada, 0,2 N NaOH, EDTA al 7%, listo para el uso, Color de la tapa: verde Tabla 3: Contenido del envase Kit de estándar y controles (Art. n. A ) DiscS 40 Discos de estándar DiscC 8 Standard µl Standard µl Discos de control, discos de celulosa acoplado con alergeno de control Suero estándar 1, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 0,35; en solución de proteína estabilizada, Suero estándar 2, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 0,70; en solución de proteína estabilizada, 5 RIDASCREEN Spezifisches IgE
6 Standard µl Standard µl Standard µl Control µl Control 300 µl Suero estándar 3, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 3,50; en solución de proteína estabilizada, Suero estándar 4, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 17,50; en solución de proteína estabilizada, Suero estándar 5, diluido Suero humano; concentración (en IU IgE/ml): 50.00; en solución de proteína estabilizada, Control positivo de IgE, diluido Suero humano, listo para el uso, concentración: véase etiqueta; en solución de proteína estabilizada, Color de la tapa: tapa roja pequeña Control negativo de IgE, diluido Suero humano, listo para el uso, concentración: véase etiqueta; en solución de proteína estabilizada, Color de la tapa: tapa azul pequeña 5. Reactivos y su almacenamiento El kit de prueba se debe almacenar a 2-8 C y después de abierto se puede usar hasta la fecha de vencimiento de la etiqueta. El buffer de lavado diluido se puede conservar 4 semanas como máximo si se mantiene a 2-8 C. La contaminación microbiana se debe evitar. Después de la fecha de vencimiento no se asumen garantías de calidad. Se debe evitar por todos los medios una contaminación de la solución de sustrato con el conjugado, ya que esto tiene como consecuencia una coloración del sustrato. Se debe evitar la incidencia directa de la luz sobre el sustrato para prevenir su descomposición o coloración debido a hidrólisis. Si ocurre una coloración no se deberá utilizar más el sustrato. Véase también el punto 10. Control de calidad Indicios de reactivos vencidos. 6 RIDASCREEN Spezifisches IgE
7 6. Reactivos adicionales necesario s accesorios requeridos 6.1. Reactivos Agua destilada o desionizada 6.2. Accesorios Fotómetro para microplacas de titulación (con filtros de 405 y 620 nm), Rango de medición de la DO de 0-3,5 Lavador automático para microplacas de titulación o instrumento para lavar las manos (peine, bomba, recipientes para reservorio de buffer y residuos). Incubadora para 37 C Micropipeta µl Pipeta de 8 canales o de paso múltiple Probeta (1000 ml) 7. Medidas de seguridad Sólo para el diagnóstico in vitro. Este test debe ser realizado solamente por personal de laboratorio calificado. Se deben observar las líneas directivas de trabajo para laboratorios médicos. Las instrucciones para el uso del test deben cumplirse estrictamente. No se debe pipetear las muestras o reactivos con la boca así como también evitar el contacto con piel lesionada o mucosas. Durante el trabajo con las muestras deben usarse guantes desechables y lavar las manos después del test. En los locales donde se trabaje con las muestras o reactivos de prueba no está permitido fumar, comer o beber. Los sueros de control del kit (sueros estándar, controles positivo y negativo) fueron verificados y no contienen HIV ni HCV-Ak así como tampoco HbsAg y sífilis CFR No obstante Ud. debe considerarlos, al igual que las muestras de pacientes y otros materiales con los cuales entre en contacto, como potencialmente infecciosos y manejarlos en correspondencia con las regulaciones de seguridad nacionales. Los sueros estándar, los controles, el conjugado y el concentrado de buffer de lavado contienen azida de sodio como agente de conservación. Se debe evitar por tanto el contacto con la piel o mucosas. Al contacto con tuberías de plomo o cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. 7 RIDASCREEN Spezifisches IgE
8 Todos los componentes del kit se requiere que sean eliminados debidamente y bajo responsabilidad propia después de su uso. Todos los materiales y reactivos que entren en contacto con muestras potencialmente infecciosas se requiere que sean tratados con agentes desinfectantes adecuados o se sometan a autoclave por lo menos una hora a 121 C. 8. Recolección y almacenamiento de las muestras El test fue desarrollado para el examen de suero humano. Después de la extracción de sangre se debe separar el suero lo antes posible de los coágulos para evitar la hemólisis. Las muestras se deben guardar en frío o congeladas hasta que se realicen los test. Evite por todos los medios congelar y descongelar el suero varias veces, así como su contaminación microbiana. El empleo de sueros inactivados por el calor, o lipémicos, hemolíticos, ictéricos o turbios puede conducir a resultados falsos. Tabla 4: Almacenamiento de las muestras Suero sin diluir Suero sin diluir 2-8 C -20 C 2-8 C 1 semana > 1 semana 7 horas 9. Realización del test 9.1. Generalidades Antes de su uso se deben llevar todos los reactivos, los sueros de pacientes y la microplaca de titulación a la temperatura ambiente (20-25 C). Los reactivos se deben mezclar bien inmediatamente antes de su empleo. Después de su uso se debe guardar inmediatamente el kit de prueba a la misma temperatura 2-8 C. Los discos estándar, de control, y de alergenos no pueden ser usados más de una vez cada uno. Los reactivos y los discos no se deben usar cuando el envase esté dañado o los recipientes hayan perdido su hermeticidad. No está permitido intercambiar o combinar componentes de kits de distintos lotes. Una desviación de los tiempos de incubación predefinidos y de las temperaturas conlleva un desplazamiento de la curva estándar en comparación con el certificado. 8 RIDASCREEN Spezifisches IgE
9 Una desviación grande de los valores de la curva estándar conduce a resultados inválidos del test. Se debe evitar la incidencia directa de la luz solar durante la realización del test. Se recomienda cubrir la microplaca de titulación. Para la incubación de las microplacas de titulación no se debe usar una cámara húmeda! 9.2. Preparación del buffer de lavado Cada frasco de concentrado de buffer de lavado AllergyWP se rellena con agua destilada hasta 1000 ml. Los cristales que pudieran encontrarse en el buffer concentrado se deben solubilizar primeramente con calor (baño María a 37 C) Transferencia de los discos de alergenos a la microplaca de titulación. Cuando se suministra la microplaca de titulación Plate ya todos los discos DiscS, DiscC, y DiscA están colocados según el protocolo del cliente. Para cada suero de paciente que debe ser examinado a alergenos HSA, se ha incluido un disco de HSA adicionalmente a los alergenos. En el envio del kit de reactivos y de los discos de alergenos DiscA en tiras separables, tanto los discos de estandares DiscS, como los discos de controles DiscC y de los discos de alergenos DiscA deben ser separados y colocados en el marco correspondientemente al protocolo de trabajo. Para cada suero de paciente que debe ser examinado a alergenos HSA, se debe incluir una cavidad con un disco de HSA adicionalmente a los alergenos Primera incubación El buffer presente en las cavidades debe ser retirado totalmente por aspiración. A cada uno de los pocillos se pipetean 50 µl de los sueros estándar Standard 1, Standard 2, Standard 3, Standard 4 y Standard 5, de los controles positivo Control + y negativo Control - y de los sueros de los pacientes de acuerdo al protocolo de trabajo. Se recomienda el empleo de los 5 estandares. A continuación se cubre la placa y Plate se incuba durante 60 min a 37 C Lavar Las cavidades se lavan llenándolas 6 veces con buffer de lavado diluido y su posterior aspiración. La última aspiración se debe realizar lo mas cuantitativa posible, considerando que los discos permanecen en las cavidades. Si se emplea un lavador automático (recomendado) se enjuaga cada vez con 700 µl de buffer de lavado diluido aspirándolo simultáneamente (posición adecuada de 9 RIDASCREEN Spezifisches IgE
10 rebose). El ajuste correcto del instrumento a las dimensiones del tipo de placa empleado se debe garantizar previamente. Cuando se utilice un dispositivo de lavado manual se trabaja en cada paso de lavado con el máximo volumen de capacidad. No utilizar pipetas para el lavado. Tanto para el lavado automático como para el manual se debe dirigir el chorro de líquido al borde del disco, de manera que los discos al adicionar el buffer de lavado giren alrededor de su eje, con lo cual se logra un mejor lavado. No se debe reducir ni los pasos de lavado, ni tampoco los tiempos de lavado e incubación Segunda incubación Adición de 50 µl conjugado Conjugate a las cavidades ocupadas. A continuación de cubre la placa y Plate se incuba durante 60 min a 37 C Lavar Lavar según el punto Tercera incubación y medición Pipetear rápido y seguido 100 µl de la solución de sustrato AllergySub a todos los pocillos ocupados. A continuación de cubre la placa y Plate se incuba durante 15 min a 37 C. Con la adición de 50 µl de solución de parada AllergyStop a cada cavidad se termina la reacción. La medición de la absorbancia se efectúa a 405 nm contra la longitud de onda de referencia a 620 nm a través de los discos de alergeno. La placa se puede medir de nuevo dentro de las 24 horas, si se conserva fría y tapada. 10. Control de calidad Indicios de reactivos vencidos Para cada determinación en la placa se debe incluir también el estándar 1-5 (con doble determinación) así como para el control de calidad un control positivo y uno negativo. El test ha transcurrido correctamente, si el valor de la DO 405/620 del estándar 5 es > 1,0 y las clases EAST obtenidas para los controles a 405/620 nm se encuentran en el rango de valores que se plantea en la hoja de datos adjunta. Una desviación de los valores requeridos, lo mismo que una turbidez o coloración amarilla del sustrato antes de ser transferidos a las cavidades, puede ser un indicio del vencimiento de los reactivos. Si los valores predefinidos no se cumplen, se deben verificar los siguientes puntos antes de repetir el análisis: 10 RIDASCREEN Spezifisches IgE
11 Durabilidad de los reactivo empleados Funcionamiento correcto de los instrumentos utilizados (por ej. la calibración) Ejecución correcta del test Control visual de los componentes del kit con respecto a contaminación o pérdida de hermeticidad; una solución de sustrato amarillenta no se debe volver a usar. Si al repetir la determinación se obtienen nuevamente valores incorrectos Ud. debe dirigirse al distribuidor local de R-Biopharm. Se recomienda incluir siempre sueros propios positivos como controles y documentar las clases EAST obtenidas cada vez. 11. Evaluación e interpretación Resultados de los análisis de sueros Base de los cálculos Para la evaluación del test se requiere establecer una curva de calibración. Para ello se incluyen en cada placa los estándares en determinación doble. Para crear la curva de calibración se representan los valores promedios de la absorbancia de la doble determinación de los estándares como función de las concentraciones correspondientes (IU/ml) en forma semilogarítmica punto por punto (diagrama de y-lin-/x-log). Las concentraciones de los anticuerpos específicos de IgE se pueden determinar a partir de la curva de calibración con los valores de DO medidos y es necesario convertirlos entonces a clases EAST (ver Tabla 5). La evaluación también se puede realizar con programas apropiados, La calibración de la curva estándar del test RIDASCREEN Spezifisches IgE se efectúa con la preparación internacional de referencia 2nd WHO IRP 75/502 for human IgE. 11 RIDASCREEN Spezifisches IgE
12 Concentraciones, Clases de EAST, Evaluaciones Tab. 5: Relación entre el valor IU/ml obtenido, las clases de EAST y titulante de IgE alergeno-específico de suero del paciente IU/ml Clase EAST Contenido alergeno-específico de IgE ( ) no detectable o apenas existente ( ) bajo ( ) elevado ( ) claramente elevado ( ) alto ( ) muy alto * 6 ( 6.0) * extremadamente alto * se determina por extrapolación lineal, ya que se miden sólo 5 estándar en el test Interpretación de los resultados de los alergenos con discos de HSA Para determinados casos de alergenos como metales, muchos productos químicos y medicamentos así como algunos aditivos de alimentos están presentes en el disco de celulosa no como tales directamente, sino acoplados a albúmina de suero humano (HSA). Para la eliminación de una asignación no específica de una alergia o para su exclusión contra HSA se aplica en todos los casos solamente el suero del paciente al alergeno-hsa y al HSA que estén examinándose. El cociente calculado de la siguiente fórmula expresa un resultado cualitativo: Q = DO (Alergeno-HSA) DO (HSA) para Q 2 el resultado del test es negativo; para Q > 2 el resultado del test es positivo. 12 RIDASCREEN Spezifisches IgE
13 Interpretación de los resultados con los discos de múltiples alergenos Tabla 6: Relación entre el valor IU/ml obtenido, las clases EAST y evaluación del suero del paciente en discos de múltiples alergenos IU / ml Clase EAST Evaluación 0 0,34 0 negativo 0,35 1 positivo En un resultado positivo se debe examinar el suero correspondiente respecto a reacciones específicas a los diferentes alergenos individuales. 12. Limitaciones del método Las concentraciones de IgE que se determinan con este sistema analítico permiten hacer conclusiones sobre el grado de sensibilización del paciente en relación con los alergenos individuales verificados o sobre las mezclas de ellos. No es posible a partir del valor de concentración de IgE obtenido deducir una relación con la manifestación o gravedad de síntomas clínicos. Los resultados obtenidos siempre deben interpretarse de conjunto con el cuadro clínico. Debido a la ausencia de un estándar nacional e internacional y por causa de la posible diferencia de las soluciones empleadas en el Prick test y los extractos alergénicos usados en los test in vitro, existe la posibilidad de que haya resultados discrepantes entre los test in vivo y los diferentes test in vitro. También directamente después de manifestarse reacciones anafilactoides puede ser que los valores de titulación de IgE medidos sean falsos negativos o demasiado bajos. En caso de resultados discrepantes entre el diagnóstico in vivo e in vitro se debe repetir el test después de 3-4 semanas. Si existen otras discrepancias deben realizarse por un alergólogo otros exámenes in-vivo como el test de provocación. Los test de provocación pueden desencadenar un choque anafiláctico. Un resultado positivo también puede estar condicionado por reactividad cruzada del alergeno examinado con otros alergenos. Tampoco puede ser excluida la posibilidad de que al fabricarse los discos de alergeno hayan faltado epitopos desencadenantes de alergias lo que podría conducir a resultados negativos falsos. 13 RIDASCREEN Spezifisches IgE
14 13. Características de rendimiento Tabla 7: Varianza inter-ensayos, Base del cálculo fueron las clases EAST con 1 decimal. Inter-ensayos Clase EAST 1-2 Clase EAST 3-4 Clase EAST 5-6 Alergenos probados G6, T3, W6, D2, E1, M6, G6, T3, W6, D2, E1, I3, M6, F37, F4, F17, F49, F85, SX1, K82 G6, T3, W6, D2, I3, F27, F4, F85, K82 Cantidad Ensayos / Alergeno Valor promedio de controles de dilución 8 por cada 4 repl. 8 por cada 4 8 por cada 4 / alergeno repl. / alergeno repl. / alergeno 11,7 % 3,44 % 3,65 % Tabla 8: Varianza inter-ensayos, Base del cálculo fueron las clases EAST con 1 decimal. Intra-ensayos Clase EAST 1-2 Clase EAST 3-4 Clase EAST 5-6 Alergenos probados Cantidad repl. / alergeno Valor promedio de controles de dilución Sensibilidad G6, T3, W6, D2, E1, G6, T3, W6, D2, E1, I3, G6, T3, W6, D2, I3, F27, M6, F2, F37, F4, F17, M6, F37, F4, F17, F49, F4, F85, K82 K82 F85, SX1, K ,69 3,86 3,88% La sensibilidad fundamental del kit de análisis referido a la detección de material estándar calibrado sobre la base del estándar de la WHO está por debajo de 0,24 IU/ml. La sensibilidad se determinó mediante diluciones sucesivas del suero estándar. Criterio: El valor del promedio (DO ) del paso de dilución con un contenido de IgE de 0,229 IU/ml se diferencia del valor promedio del blanco en más del doble de la desviación estándar (intervalo de confianza de 95 %). La sensibilidad del diagnóstico se encuentra por debajo de 0,35 IU/ml Especificidad Se probó una selección de alergenos representativos de 11 grupos con diferentes sueros comparándolos contra los de otro proveedor de sistemas de diagnóstico invitro. El resultado fue una especificidad de 91,2 % 14 RIDASCREEN Spezifisches IgE
15 Bibliografía 1. Kersten, W., von Wahl, P.G., Lange, C.E., Wenning, J.: Empfehlungen zur invitro Diagnostik allergischer Erkrankungen [Recommendations for the in-vitro diagnostics of allergies]. Allergologie, Jg. 23, No. 6, (2000) 2. Kjellman, N.I.M.: Prediction and prevention of atopic allergy, Allergy 37, (1982) 3. Debelic, M.: Die klinische Bedeutung der Bestimmung von Serum-Gesamt IgE und spezifischem IgE für die Diagnostik und Verlaufsbeobachtung allergischer Krankheitsbilder [The clinical significance of the determination of serum-total IgE and specific IgE for the diagnostics and observation of the progress of the clinical pictures of allergies]. Therapiewoche 29, (1979) 4. Urbanek, R,: Papier-Radio-Immuno-Sorbent-Test (PRIST) - IgE-Spiegel bei nicht allergischen und allergischen Kindern [Paper-radio immuno sorbent test (PRIST) IgE level for children with and without allergies], Monatsschrift Kinderheilkunde 125, (1977) 5. Kjellman, N.I.M., et al.: Serum IgE levels in healthy children quantified by a Sandwich technique (PRIST), Clin. Allergy 6, (1976) 6. Turner, K.J.: IgE globulins and immunity. Medical Journal of Australia 2, 846 (1974) 7. Johannson, S.G.O.: Raised levels of a new immunoglobulin class (IgND) in asthma. Lancet II, (1967) 8. Ishizaka, K., Ishizaka, T., Hornbook, M.M.: Physico-chemical properties of human reaginic antibody. IV. Presence of a unique immunoglobulin as a carrier of reaginic activity. Journal of Immunology 97, 75 (1966) 9. Bennich, H.H., et al.: Immunoglobulin E, a new class of human immunoglobulin. Bulletin World Health Organisation 38, 151 (1964) 15 RIDASCREEN Spezifisches IgE
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