Albúmina 22 % I.- Introducción. II.- Características. III.- Presentación

Transcripción

1 Albúmina 22 % I.- Introducción En 1945 Cameron y Diamond establecieron que ciertos sueros anti-d(anti-rh) podían aglutinar glóbulos rojos Rho positivos en presencia de albúmina de bovino pero no aglutinaban las mismas células en un medio salino. La albúmina de bovino se utiliza para aumentar la reactividad de los anticuerpos de los grupos sanguíneos. El mecanismo de acción de la albúmina de bovino fue investigado por Pollack en De sus experimentos el concluyó que la aglutinación de glóbulos rojos cubiertos con anticuerpos, dependía de las dimensiones del anticuerpo involucrado y de las características del medio, como por ejemplo la fuerza iónica. Es así como los anticuerpos IgM de los grupos sanguíneos aglutinan glóbulos rojos en solución salina isotónica pero las moléculas IgG no producen aglutinación. Algunos anticuerpos IgG, especialmente aquellos con especificidad Rh-hr, aglutinarán glóbulos rojos si el potencial zeta, es decir la carga eléctrica efectiva, es cuidadosamente ajustada adicionando coloides y sales. Por otro lado Stroup y MacIlroy en 1965, demostraron que la albúmina también aumenta la sensibilidad del ensayo de antiglobulina indirecto, que se utiliza para demostrar presencia de anticuerpos que se unen a los glóbulos rojos, sin producir aglutinación. El ensayo de antiglobulina indirecto se utiliza en las pruebas de compatibilidad, screening de anticuerpos, identificación y titulación de anticuerpos. En estos casos se incuban el suero y los glóbulos rojos para permitir la unión del anticuerpo a las células antes de hacer el ensayo de antiglobulina directo. II.- Características Solución de albúmina de bovino (fracción V) en solución amortiguadora a ph 7,2. Contiene 0,1 % de Azida de Sodio como preservante. III.- Presentación Frasco gotario x 10 ml

2 IV.- Preparación de la muestra No se requiere preparación especial del paciente antes de tomar la muestra. La sangre debe ser recolectada mediante técnicas médicas aprobadas. Para el test de antiglobulina indirecto se requiere suero fresco ( no más de 48 horas) de preferencia obtenido del coágulo. Si se utiliza plasma en el test de antiglobulina indirecta, no se detectarán los anticuerpos que se unen al complemento ya que el calcio no está disponible. Si se produce una demora en la realización del ensayo la muestra se debe refrigerar entre 2 y 8 ºC. V.- Insumos requeridos Test de Compatibilidad Tubos de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm Pipetas Pasteur Centrífuga Incubador 37 ºC Solución salina isotónica Antiglobulina humana Células de control Lector Titulación de Anticuerpo ( Método antiglobulina/albúmina) Tubos de 10 x 75 mm o 12 x 75 mm Suero humano libre de anticuerpos Pipetas serológicas de 0,2 ml Células de glóbulos rojos que posean el antígeno específico para el anticuerpo que va a ser titulado. Pipetas Pasteur Centrífuga Incubador 37 ºC Solución salina isotónica Antiglobulina humana Células de control

3 VI.- Procedimiento Prueba de compatibilidad 1.- Para cada prueba de compatibilidad marque un tubo 2.- Prepare una suspensión de los glóbulos rojos del dador al 3-5 %. Si lo prefiere los glóbulos rojos pueden ser suspendidos en el plasma o suero del donante. 3.-Con una pipeta Pasteur limpia, agregue dos gotas de suero fresco del receptor al tubo macado. 4.-Con una pipeta limpia agregue una gota de los glóbulos rojos del dador 5.-Agregue luego 2 gotas de la Albúmina al 22 % 6.-Mezcle bien. Si requiere un resultado inmediato, centrifugue y lea antes de seguir con el paso Incube el tubo a 37 ºC por un tiempo mínimo de 15 minutos. (puede incubar hasta 60 minutos) 8.-Centrifugue el tubo durante 1 minuto a 1000 r.p.m. en centrífuga clínica y examine macroscópicamente para determinar si se produce hemólisis y/o aglutinación. 9.- Lave completamente la mezcla células/suero 3 veces llenando el tubo con solución salina isotónica. 10.-Agregue dos gotas de antiglobulina humana a las células sedimentadas. 11.-Mezcle bien y centrifugue a 1000 r.p.m. durante 1 minuto. 12.-Resuspenda las células con agitación suave. Los resultados de detección e identificación deben ser observados macroscópicamente. Los ensayos de compatibilidad debe ser analizados con ayuda óptica. 13.-A las pruebas de antiglobulina negativas, agregue glóbulos rojos sensibilizados con anticuerpo IgG a modo de control del procedimiento. Resultados Interpretación 1.- Hemólisis o aglutinación es un resultado positivo del ensayo y refleja la presencia de una reacción antígeno-anticuerpo. 2.- Si no se produce hemólisis o aglutinación indica la ausencia de una reacción antígeno-anticuerpo. Los ensayos negativos se deben confirmar adicionando células de control de Coombs. a.- Si no se observa aglutinación después de adicionar las células controles de Coombs a un test negativo, significa que el reactivo antiglobulina humana estaba inactivado, neutralizado o que fue omitido, y el resultado negativo se debe considerar inválido. En este caso la detección o identificación del anticuerpo debe ser repetida.

4 b.- Si se observa aglutinación después de adicionar las células controles de Coombs a un test negativo indica que la antiglobulina humana agregada fue capaz de reaccionar y que el resultado negativo es válido. Titulación del anticuerpo Procedimiento 1.-Marque 10 tubos 2.-Prepare una suspensión de glóbulos rojos al 3-5 % en Albúmina Bovina 22 %. 3.-Haga diluciones seriadas del suero del paciente tal como se explica a continuación : a.- A cada tubo a excepción del primero agregue 0,1 ml de suero normal. b.- Con una pipeta de 0,2 ml deposite 0,1 ml del suero del paciente en los dos primeros tubos. c.- Con una pipeta de 0,2 ml limpia, mezcle el contenido del segundo tubo, transfiera 0,1 ml de la mezcla al tubo siguiente y continúe con el mismo procedimiento hasta llegar al último tubo. Descarte 0,1 ml del ultimo tubo. 4.- A los tubos del 1 al 10 agregue una gota de la suspensión de glóbulos rojos en Albúmina. 5.- Mezcle el contenido de cada tubo e incube a 37 ºC por un mínimo de 15 minutos. (puede incubar hasta 60 minutos) 6.- Centrifugue todos los tubos y lea la aglutinación macroscópicamente. 7.- Efectúe el test de antiglobulina en todos los tubos que no estén fuertemente aglutinados. Resultados Interpretación El título del anticuerpo corresponde al valor recíproco de la dilución del último tubo en el cual se detectó reacción. VII.- Limitaciones del Procedimiento 1.- La Albúmina de Bovino no producirá aglutinación de los glóbulos rojos con todos los anticuerpos tipo IgG de los grupos sanguíneos. 2.- Muestras o material contaminado pueden interferir en los resultados finales 3.- Técnicas no adecuadas pueden invalidar los resultados obtenidos con este reactivo.

5 4.- Otros medios que potencien la aglutinación, como la solución de LISS no deben ser utilizados en conjunto con la Albúmina de Bovino. VIII.- Referencias 1.-Pollack,W.A. Study of the factors affecting the zeta potencial and hemagglutination with human isoantibodies. PhD Thesis, Rulgers University, Technical Manual 10 th Ed.American Association of Blood Banks, Arlington, Virginia, 1990, p.279,