Comparación cualitativa del Plantago major con manejo agrícola y Plantago major silvestre. Dr. Eduardo Arguedas, Sheril Garita, Valeria Hurtado

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1 Comparación cualitativa del Plantago major con manejo agrícola y Plantago major silvestre. Dr. Eduardo Arguedas, Sheril Garita, Valeria Hurtado Facultad de Farmacia, Universidad de Iberoamérica. San José, Costa Rica. RESUMEN El presente trabajo es un estudio sobre la planta medicinal Plantago major para comprobar la presencia de metabolitos segundarios en hojas de la planta recolectadas entre los meses de noviembre y diciembre en guápiles, en comparación con las hojas de la misma planta pertenecientes al laboratorio Lisan. Se estudiaron los metabolitos secundarios de ambos extractos, para verificar si existe igual concentración porcentual en espectroscopia de masas de ambos a pesar de las diferencias en su cultivo. ABSTRACT The present work is a study on the medicinal plant Plantago major to check the presence of secondary metabolites in leaves of the plant collected between the months of November and December in Guapiles, in comparison with the leaves of the same plant belonging to the Lisan laboratory. The secondary metabolites of both extracts were studied, to verify if there is equal percentage concentration in mass spectroscopy of both despite the differences in their farming. 1

2 1. INTRODUCCIÓN El Plantago major, conocida en Costa Rica como llantén, es una planta herbácea y anual perteneciente a la familia plantaginácea, caracterizada por su bajo tamaño de alrededor de 10 a 50 centímetros debido a su corto rizoma, sus hojas son en forma de glabras, de color verde, basal, con siete nervaduras y dispuestos en roseta. Es una planta de común crecimiento en nuestro país, se encuentra en la mayor parte del territorio nacional, principalmente en la región central como San José, Alajuela y Cartago, también se encuentra en gran cantidad en la zona Atlántica. Plantago major es una herbácea perenne, de tallos subterráneos no ramificados. Popularmente, es conocida como llantén mayor, llantén común o llantén grande. Por ser una planta de fácil localización, no se cultiva, se considera una maleza. Existen especies relacionadas a P. major, como lo son P. lanceolata y P. psyllium. 1 En sus hojas se han identificado compuestos flavonoides como leuteonina, apigenina y derivados glucosidados, metabolitos secundarios como iridoidesy vebascósidos, además de compuestos fenólicos simples como ácido p-hidroxibenzoico, ácido gentísico, ácido protocténico, ácido clorogénico y ácido caféico. Es una hierba que generalmente crece junto con el zacate, se desarrolla en climas templados y cálidos del mundo. Se le han atribuido propiedades astringentes, antiinflamatorias, analgésicas, antiulcerosantes, antihistamínicas, antiparasitarias, antivirales, antibacterianas, expectorantes y antitumorales. 2 P. major es polinizada por el viento. El fruto es una pequeña cápsula que, cuando madura, se abre transversalmente dejando caer las semillas que contiene. Se producen más de semillas por planta, estas tienen forma ovalada, tamaño muy reducido y un ligero sabor amargo; se localizan de 8 a 16 semillas por cápsula. Con el clima húmedo, las semillas 2 se vuelven pegajosas, lo que provoca que se adhieran a los animales y, de esta manera, logran dispersarse. El endospermo representa la mayor parte de la semilla y cubre completamente al embrión; las células del endospermo están constituidas por gruesas paredes de celulosa, cuyo lumen celular contienen proteínas y gran cantidad de aceites. 3 Por medio de las características y propiedades que posee la planta Plantago major, es que se desea cualificar los principios activos y metabolitos secundarios de plantas con crecimiento silvestre y otras cosechadas en viveros para el uso de los laboratorios Lisan, considerando las características del clima tropical muy húmedo presentes en la zona de guápiles donde se obtuvieron las hojas de llantén silvestre. 2. MATERIALES Y METODOS. Reactivos Cloroformo Reactivo de Dragendorff Metanol Agua Materiales Cristalería o Balón de 1 litro o Espátula acanalada o Agitador de vidrio o Kitasato o Viales o Peseta o Embudo separador o Probeta o Prensa universal o Calentador o Soporte de metal o Pastilla de agitación o Papel filtro Equipo de laboratorio utilizado Balanza analítica

3 Equipo de reflujo Rota vapor BÜCH Rotavapor R-200 Agilent technologies 6850 Network GC System. Detector FID. Cromatógrafo de gases Perkin Elmer Spectrum BX FT -IR System Perkin Elmer, Lambda 25 UV/VIS Spectromter Agilent technologies 5975.Cromatogafo de masas. Procedimiento Extractos de Plantago major con manejo agrícola y silvestre para separar los metabolitos: 1. Se pesó el extracto de ambos P. major. 2. Se hicieron extractos para separar los metabolitos 3. Se hicieron los extractos con metanol y cloroformo 4. Se realizaron los dos extractos en reflujo por una hora a partir de la primera gota, con el llantén molido del laboratorio farmacéutico lisan y el otro recolectado en guápiles (80 gramos de llantén silvestre) 5. Se agregó metanol cantidad suficiente para que tapara toda la materia prima. 6. Se colocó el líquido en el equipo de rotavapor a una temperatura de 37 C durante 20 min. 7. Se colocó el residuo en un vial y se procedió a leer en infrarrojo, ultravioleta y masas. presencia de una banda cm -1, además se observan bandas importantes en cm -1 y cm -1 lo que corresponde fundamentalmente a los grupos alquilo y eventualmente pueden tener apantallados sistemas aromáticos; en cm -1 señalando esta banda a los verbascósidos y con bandas adyacentes que podrían ser relacionadas a la hidrolisis de algunos de los componentes como son el ácido caféico entre otros. También podemos observar picos referentes a los sistemas aromáticos a cm -1, cm -1 y cm -1 es son porque pueden ser mono di tri sustituidos. %T 120, I-901-1/ CHCl3 3377,2 3007,9 2359,9 1549,1 1462,0 1376,4 1239,3 1165,5 1040,6 917,9 764,6 833,3 795,8 722, ,2 1738, ,6 3. RESULTADOS. Se realiza las espectroscopias infrarrojas de ambos sistemas a estudiar como lo son el sistema como manejo agrícola y el sistema silvestre en el espectro infrarrojo del sistema como manejo agrícola podemos observar la 3-10,0 3800, ,0 cm-1 Posteriormente se realiza el espectro infrarrojo de la fuente silvestre y nos podemos dar cuenta que poseen bandas similares en los cm -1 en los cm -1, cm -1, hay una banda más que se refiere a las insaturaciones cm -1 también mantiene cm -1 que posiblemente es la de los

4 verbascósidos y mantiene las bandas referentes a los aromáticos. Por lo que se puede observar que las comparaciones relacionadas con el infrarrojo parecen ser muy similares a pesar las fuentes son diferentes y el origen de donde se obtuvieron las muestras también es diferentes. Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de 24.56% y un m/z 133 unidades de masa aparecen los derivados piranósidos tipo Glucitol / manitol / Sorbitol. Espectroscopía de gases acoplado a masas para el extracto silvestre: Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de % encontramos derivados de los ácidos hexanoicos que tiene un m/z 256 unidades de masa. Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de 6.88 % y un m/z 337 unidades de masa aparecen las docosenamidas. Con un tiempo de retención min y una área porcentual relativa de 1.80 aparece la presencia del fitol con m/z obtenido es de 140 unidades de masa. Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de 0.93 % y un m/z 165 unidades de masa aparece la vitamina E. Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de 12.39% y un m/z 278 unidades de masa donde aparece el 9, 12, 15 ácido octadecatrienoico. Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de 0.35 % y un m/z 400 unidades de masa aparecen el campesterol. Con un tiempo de retención de min y un área porcentual relativa 24.17% se obtienen sustancias relacionadas al ácido clorogénico relacionadas con el ácido caféico y el glucósido correspondiente y un m/z 281 unidades de masa. Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de 1.16 % y un m/z 499 unidades de masa aparecen los sitosteroles. 4

5 La cromatografía de gases asociada a la espectroscopia de masas del extracto Plantago major (llantén) de manejo agrícola: Con un tiempo de retención de min y un área porcentual relativa 12.45% se obtienen sustancias relacionadas al ácido clorogénico relacionadas con el ácido caféico y el glucósido correspondiente y un m/z 281 unidades de masa. Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de 28.8 % y un m/z 341 unidades de masa donde aparece la adamantilacetamida.. Con un tiempo de retención de 17,096 min y una área porcentual relativa de 7,28 % y un m/z 341 unidades de masa aparecen las eicosenamidas. Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de % y un m/z 337 unidades de masa aparecen las docosenamidas. Con un tiempo de retención de min y una área porcentual relativa de % y un m/z 414 unidades de masa donde aparecen los sitosteroles CONCLUSIONES La comparación de los picos cromatográficos permite cualificar el Plantago major de manejo agrícola y Plantago major silvestre y la utilización de bandas ultravioletas para medir absorciones y determinar las concentraciones, son también factibles en los métodos establecidos. Se realizó un estudio retrospectivo en el cual se logró comprobar las propiedades de la planta con respecto a la información existente sobre esta. Se realizaron análisis espectroscópicos utilizando ultravioleta, infrarrojo, cromatografías de masas asociada a gases lo que permitió establecer los principales metabolitos segundarios existentes en la planta. Se realizaron espectroscopias de gases asociadas a masa donde se encontraron metabolitos secundarios: 9, 12, 15 ácido octadecatrienoico, fitol, ácido caféico, vitamina E, Sitoesteroles, entre otros. Este trabajo contribuye con la posibilidad de buscar marcadores y

6 que estos puedan medirse cuantitativamente. 5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Blanco B, Saborío A, Garro-Monge G. Descripción anatómica, propiedades medicinales y uso potencial de Plantago major (llantén mayor) [Internet]. Revistas.tec.ac.cr [cited 2 February 2018]. Available from: marcha/article/view/ Química analítica II: Introducción al aseguramiento de la calidad en laboratorios analíticos. Universidad Nacional de Lujan; Plantago major - ficha informativa [Internet]. Conabio.gob.mx [cited 3 February 2018]. Available from: mexico/plantaginaceae/plantagomajor/fichas/ficha.htm 6