5-HIAA ELISA. Inmunoensayo enzimático de diagnóstico in-vitro para la determinación cuantitativa de 5-HIAA en orina humana.

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1 Instrucciones de Uso 5-HIAA ELISA Inmunoensayo enzimático de diagnóstico in-vitro para la determinación cuantitativa de 5-HIAA en orina humana. RE C I B L I N T E R N A T I O N A L G M B H Flughafenstrasse 52a Phone: +49 (0) IBL@IBL-International.com D Hamburg, Germany Fax: +49 (0)

2 1. USO PROPUESTO Inmunoensayo enzimático de diagnóstico in-vitro para la determinación cuantitativa de 5-HIAA en orina humana. 2. IMPLICACIONES CLÍNICAS El tumor carcinoma primario deriva usualmente de las células enterocromaffinas del intestino medio y está localizado frecuentemente en el íleon terminal. Tumores carcinómas secretan generalmente grandes cantidades de indoles. El síndrome carcinoma está generalmente caracterizado por el aumento de la secreción urinaria de acido acético 5-hidroxi-3-indol (5-HIAA), producto final del metabolismo de la serotonina (5-HT). Tradicionalmente, 5-HIAA se testea mediante la diazotización con nitrosonaftol formando un color púrpura. Pero está documentado que otras substancias presentes en la orina pueden interferir dando falsos positivos. Se han hecho intentos para solucinar este problemas mediante la combinación de cromatografía de intercambio de iones y fluorometría. Estos métodos carecen de sensibilidad y consumen mucho tiempo. Recientemente, se han descripto métodos que combinan cromatografía líquida de alto rendimiento con fluorometría en la región ultravioleta del espectro o detección electroquímica para 5-HIAA. Ambos métodos requieren extracción con solventes debido a los numerosos compuestos de interferencia presentes en la orina. El inmunoensayo enzimático 5-HIAA es un método simple y nuevo para la cuantificación de este marcador del síndrome carcinoide en pequeñas muestras de orina. 3. PRINCIPIO DEL ENSAYO El procedimiento de ensayo sigue el principio básico de los ELISAs competitivos, donde existe competencia entre el antígeno biotinilado y el no biotinilado por un número fijo de sitios de unión. La cantidad de antígeno biotinilado unido al anticuerpo es inversamente proporcional a la concentración del analito en la muestra. Cuando el sistema está en equilibrio, el antígeno biotinilado libre se elimina con una etapa de lavado y el antígeno biotinilado unido al anticuerpo se determina empleando una fosfatasa un streptavidin conjugado con fosfatasa alcalina como marcador y p-nitrofenil fosfato como sustrato. La cuantificación se logra por comparación de la actividad enzimática de la muestra desconocida con una curva de respuesta preparada con estándares conocidos. 4. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES 1. Sólo para uso en diagnóstico in-vitro. Sólo para uso profesional. 2. Antes de comenzar el ensayo lea las instrucciones completa y cuidadosamente. Use la versión válida del prospecto que se ofrece con el juego de reactivos. Asegúrese de entenderlo todo. 3. En caso de daño severo del estuche del juego de reactivos, contacte por favor a IBL o a su suministrador en forma escrita antes de transcurrida una semana de la recepción. No utilice los componentes dañados en los ensayos pero guárdelos en forma segura para la reclamación. 4. Tome en cuenta el número de lote y la fecha de caducidad. No mezcle reactivos de diferentes lotes. No use reactivos vencidos. 5. Cumpla con las buenas prácticas de laboratorio y las pautas de seguridad. Use bata de laboratorio, guantes de látex desechables y gafas de protección cuando sea necesario. 6. Los reactivos de este juego que contienen materiales peligrosos pueden causar irritación ocular y cutánea. Vea MATERIAL SUMINISTRADO y las etiquetas para los detalles. Las Hojas de Datos de Seguridad de los materiales para este producto están disponibles en la página de internet de IBL o mediante solicitud directa a IBL. 7. Los reactivos químicos y los reactivos preparados o usados deben ser tratados como desechos peligrosos de acuerdo con las regulaciones nacionales sobre bioseguridad y pautas de seguridad. 8. El personal de limpieza debe ser capacitado por profesionales para el manejo de residuos peligrosos. 9. Evite el contacto con la Solución de Parada. Puede causar irritaciones y quemaduras en la piel. 10. El exceso de Reactivo de Metilación debe destruirse con la adición de 1 ml 0.1 M HCl y debe manejarse como desecho químico, así como el exceso de Reactivo de Dilución. 5. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD El juego de reactivos es enviado a temperatura ambiente y debe ser almacenado a 2-8 C. Manteniéndose alejado del calor o de la luz solar directa. El almacenamiento y estabilidad de muestras y reactivos preparados se detalla en los capítulos correspondientes. La placa de microtitulación es estable hasta la fecha de caducidad del juego de reactivos aún cuando la bolsa haya sido abierta, siempre que se vuelva a cerrar herméticamente y se almacene a 2-8 C. Version / 6

3 6. TOMA Y ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS Algunos alimentos contienen importantes cantidades de serotonina. Además algunos medicamentos puede estimular la liberación de serotonina y conducir a niveles alterados. Los pacientes deben abstenerse de los alimentos ricos en serotonina (por ejemplo aguacates, plátanos, café, ciruelas, piñas, tomates, nueces) así como de algunos medicamentos (por ejemplo aspirina, corticotropina, inhibidores de la MAO, fetacetina, las catecolaminas, reserpina, nicotina). 5-HIAA es sensible a la luz. Mantener en la oscuridad durante la toma de muestras. Orina Se puede emplear tanto la orina espontánea como la acumulada en 24 h. El volumen total de la orina excretada durante un período de 24 h debe ser recogida y mezclada en un solo recipiente que contiene ml de 6 N HCl como preservativo. Determine el volumen total para el cálculo de los resultados. Mezcle y centrifuge las muestras antes de ensayarlas. Almacenamiento: 2-8 C -20 C (Alícuotas) Manténgase alejado del calor o de la luz solar directa. Estabilidad: 7 dias 3 meses Evite congelar y descongelar repetidamente. 7. MATERIALES SUMINISTRADOS Los reactivos suministrados con este Juego de reactivos son suficientes para determinaciones simples en la preparación de la muestra (metilación) y determinaciones duplicadas en el ensayo. A solicitud están disponibles cantidades adicionales de los reactivos. Cantidad Símbolo Componente 1 x 12 x 8 MTP Placa de Microtitulación Tiras separables. revestido con IgG anti-conejo (cabra, policlonal). 1 x 8 ml ANTISERUM 1 x 8 ml BIOTIN 1 x 0.3 ml ENZCONJ CONC 1 x 7 x 1 ml CAL A-G 1 x 2 x 0.5 ml CONTROL 1+2 LYO 1 x 2 ml METHYLREAG 1 x 1 ml HCL 1 x 50 ml ASSAYBUF CONC 1 x 4 ml DILREAG 2 x 50 ml WASHBUF CONC 2 x 13 ml PNPP SUBS 1 x 15 ml PNPP STOP 5-HIAA Antisuero Coloreado en azul. Listo para usar. Contenido: Antisuero (conejo), Solución buffer fosfatada, estabilizadores. 5-HIAA Biotina Listo para usar. Coloreado en Amarillo. Contenido: Solución buffer fosfatada, estabilizadores. Conjugado Enzimático, Concentrado (100x) Contenido: Streptavidin fosfatasa alcalina, Solución Buffer Tris, estabilizadores. Estándar A-G 0; 0.2; 0.55; 1.8; 7.5; 20; 55 mg/l 0; 1.1; 2.9; 9.5; 39.4; 105; 288 µmol/l Listo para usar. Contenido: 5-HIAA (metilado), estabilizadores. Control 1+2, liofilizado Contenido: orina humana (normal y patológico). Por concentraciones / rangos de aceptancia vea las etiquetas. Reactivos de Metilación Coloreado en Amarillo. Listo para usar. Contenido: diclorometano. HCl Listo para usar. 0.1 M HCl. 3 x FOIL Folio Adhesivo Buffer de Ensayo, Concentrado (10x) Contenido: Solución buffer fosfatada, BSA, estabilizadores. Reactivos de Dilución Listo para usar. Contenido: N,N-dimetilformamida. Solución Buffer de Lavado, Concentrado (20x) Contenido: Solución buffer fosfatada, Tween, estabilizadores. Solución de Substrato PNPP Listo para usar. Contenido: fosfato de p-nitrofenil (PNPP). Solución de Parada PNPP Listo para usar. Contenido: 1 M NaOH, 0.25 M EDTA. Version / 6

4 8. MATERIALES REQUIRIDOS PERO NO SUMINISTRADOS 1. Micropipetas (Multipette Eppendorf o dispositivos similares, < 3 % CV). Volúmenes: 20; 25; 50; 100; 1000 µl. 2. Tubos de ensayo desechables de cristal (12 x 75 mm) 3. Vortex 4. Micropipeta multicanal de 8 canales con reservorio de reactivo 5. Frasco lavador, sistema automatizado o semi-automatizado de lavado de placas de microtitración 6. Fotómetro para placas de microtitulación capaz de leer absorbancias a 405 nm (longitud de onda de referencia nm) 7. Agua bidestilada o desionizada 8. Campana de extracción 9. Toallas de papel, puntas para las micropipetas y cronómetro 9. INDICACIONES PARA EL PROCEDIMIENTO 1. Cualquier manipulación inadecuada de las muestras o modificación del procedimiento de ensayo puede alterar los resultados. Los volúmenes a pipetear, los tiempos de incubación, las temperaturas y etapas de pretratamientos tienen que ser efectuados estrictamente siguiendo las instrucciones. Use sólo pipetas u otros dispositivos calibrados. 2. Una vez comenzado el ensayo, se deben completar todas las etapas sin interrupción. Asegúrese de que los reactivos, materiales y dispositivos necesarios estén listos en el momento adecuado. Permita que todos los reactivos y muestras alcancen la temperatura ambiente (18-25 C) y agite suavemente por rotación cada vial de reactivo líquido o muestra antes del uso. Evite la formación de espuma. 3. Evite la contaminación de los reactivos, pipetas pocillos y/o tubos. Emplee una punta desechable nueva para cada reactivo, estándar o muestra. No intercambie las tapas. Tape siempre los viales que no estén en uso. No reutilice los pocillos, tubos o reactivos. 4. Se recomienda ensayar las muestras por duplicado para poder identificar errores potenciales de pipeteo. 5. Use un esquema de pipeteo apropiado según las dimensiones de la placa. 6. El tiempo de incubación afecta los resultados. Todos los pocillos deben ser manipulados en el mismo orden y secuencia de tiempo. Para el pipeteo de soluciones en los pocillos se recomienda una pipeta de 8 canales. 7. El lavado de la placa de microtitulación es un paso importante. Los pocillos insuficientemente lavados conllevan a resultados erróneos. Se recomienda emplear una pipeta multicanal o un sistema automático de lavado. No deje secar los pocillos entre incubaciones. Cuide de no dañar el recubrimiento de las placas durante el enjuague y/o la aspiración. Enjuague y agregue los reactivos cuidadosamente. Al enjuagar cerciórese que todos los pocillos estén completamente llenos con la Solución Buffer de Lavado y que no haya residuos en ellos. 8. La humedad afecta los pocillos y tubos recubiertos. No abra la bolsa hasta que alcance la temperatura ambiente. Los pocillos o tubos que no se empleen deben guardarse inmediatamente en la bolsa resellada con desecante. 10. INSTRUCCIONES PARA LA PREPARACIÓN DEL ENSAYO Para la versión manual y automática El contenido del juego de reactivos para 96 determinaciones puede ser dividido en 3 ensayos independientes. Los volúmenes declarados más abajo son para un ensayo con 4 tiras (32 determinaciones). Si desea reducir el número de estándares de 7 a 6 puede omitir el Estándar G. En tal caso el rango de medición se vea reducido a 3000 µg/l Preparación de componentes liofilizados o concentrados Diluya / disuelva Componente Diluyente Relación Notas 15 ml ASSAYBUF CONC agregue 150 ml CONTROL 1 LYO CONTROL 2 LYO 15 ml WASHBUF CONC agregue 60 µl ENZCONJ CONC Almacenamiento Estabilidad agua bidest. 1:10 Mezcle vigorosamente. 2-8 C 2 semanas Deje reposar durante con 0.1 M HCl 15 min. Mezcle sin 0.5 ml formar espuma. Para disolver los cristales, 300 ml agua bidest. 1:20 temple hasta 37 C. con 6.0 ml Buffer de Ensayo (diluído) 1:101 Mezcle vigorosamente. Prepare fresco y use sólo una vez. Mezcle sin formar espuma. -20 C (Alícuotas) 8 semanas 2-8 C 4 semanas C 30 min Version / 6

5 10.2. Dilución de las muestras Las muestras, que se sospecha contienen una concentración mayor al estándar más alto deben ser diluidas con buffer de ensayo después de la metilación. 11. PROCEDIMIENTO DE ENSAYO Dilución y Metilación de Controles y Muestras de Pacientes (no incluye los Estándares) La preparación de la muestra conlleva a una dilución de 255 veces. Esto ya ha sido considerado al preparar los estándares. No metile los Estándares. Éstos ya han sido metilados. 1. Pipetee 20 µl de cada Control y muestra en los respectivos tubos de vidrio. 2. Luego de este paso, trabaje bajo campana de ventilación. 3. Pipetee 50 µl de Reactivo de Dilución en cada tubo. Mezclar usando un vortex. 4. Pipetee 25 µl de Reactivo de Metilación en cada tubo. Vortex cada tubo inmediatamente después de añandir el reactivo. Nota: El color amarillo de la mezcla reactiva debe permancer estable. La desaparición inmediata del color indica un exceso de acido en la muestra. En este caso agrege otros 25 µl de Reactivo de Metilación! 5. Cubra los tubos. Incube 20 min a TA (18-25 C). 6. Pipetee 5 ml de Buffer de Ensayo diluído en cada tubo. Tape cada tubo y volteelos (en forma manual o con un mezclador) por lo menos 5 veces hasta obtener un buen mezclado. Mezclar usando un vortex. 7. Luego de este paso, puede trabajar fuera de la campana de ventilación. 8. Retire 50 µl del sobrenadante y comience el ensayo ELISA en forma inmediata. El sobrenadante es estable solamente por 1 h a TA (18-25 C) ELISA 1. Pipetee 50 µl de cada Estándar, Control metilado y muestra de pacientes metilada en cada pocillo respectivo de la placa de microtitulación. 2. Pipetee 50 µl de Biotina 5-HIAA en cada pocillo. 3. Pipetee 50 µl de Antisuero 5-HIAA en cada pocillo. 4. Cubra el plato con un folio adhesivo. Incube 60 min a TA (18-25 C) en un agitador orbital (500 rpm). 5. Remueva el folio adhesivo. Descarte la solución de incubación. Lave la placa 3 x con 250 µl de Solución Buffer de Lavado diluida. Remueva el exceso de solución golpeando suavemente la placa invertida sobre toallas de papel. 6. Pipetee 150 µl de Conjugado Enzimático en cada pocillo. 7. Cubra el plato con un folio adhesivo. Incube 60 min a TA (18-25 C) en un agitador orbital (500 rpm). 8. Remueva el folio adhesivo. Descarte la solución de incubación. Lave la placa 3 x con 250 µl de Solución Buffer de Lavado diluida. Remueva el exceso de solución golpeando suavemente la placa invertida sobre toallas de papel. 9. Para añadir la Solución de Substrato y de Parada utilice de ser posible una pipeta de 8 canales. El Substrato y la solución de Paro debe añadirse respetando los mismos intervalos de tiempo. Utilice un sobrevolumen para evitar la formación de burbujas. 10. Pipetee 200 µl de Solución de Substrato en cada pocillo. 11. Incube 30 min a TA (18-25 C) en un agitador orbital (500 rpm). 12. Detenga la reacción del substrato añadiendo 50 µl de Solución de Parada PNPP en cada pocillo.mezcle brevemente el contenido agitando la placa. 13. Mida la densidad óptica con un fotómetro a 405 nm (Longitud de onda de referencia: nm) dentro de los 60 min de haber agregado la Solución de Parada. Version / 6

6 12. CONTROL DE CALIDAD Los resultados son válidos solamente si el ensayo ha sido realizado de acuerdo a las intrucciones. Además el usuario debe atenerse a las Prácticas de Buen Laboratorio (GLP) u otras normas o leyes comparables. Para la determinación del diagnóstico, el usuario y/o el laboratorio deben de tener un sistema validado de acuerdo con las Buenas Prácticas de Laboratorio (GLP). Los valores de los controles del ensayo deben encontrarse dentro de los rangos de aceptación indicados en las etiquetas y el Certificado QC. Si este criterio no se cumple, el ensayo no es válido y debe repetirse. Cada laboratorio debe emplear muestras conocidas como controles adicionales. Se recomienda participar en los programas de aseguramiento de la calidad adecuados. En caso de detectarse alguna desviación, se debe verificar lo siguiente: Fecha de vencimiento de los reactivos, condiciones de almacenamiento, pipetas, dispositivos, condiciones de incubación y método de lavado. 13. CÁLCULO DE RESULTADOS La DO de los estándares (eje-y, lineal) se plotean contra su concentración (eje-x, logarítmico) ya sea en papel semi-logarítmico o empleando un método automático. Se logra un buen ajuste con cubic spline, 4 Parameter Logistics or Logit-Log. Para el cálculo de la curva estándar, use las mediciones obtenidas de los estándares (es aconsejable no emplear valores duplicados). La concentración de las muestras se puede leer directamente de la curva estándar. Las muestras que presenten una señal mayor a la del estándar mayor tienen que ser diluidas según se describe en INSTRUCCIONES PARA LA PREPARACIÓN DEL ENSAYO y analizadas nuevamente. Calcule la excreción de 24 h para cada muestra de orina: µg/24 h = µg/l x L/24 h Conversión: 5-HIAA (mg/l) x 5.25 = µmol/l Curva de Calibración Típica (Ejemplo. No usar para el cálculo!) Estándar 5-HIAA (mg/l) Medio DO DO/DO max (%) A B C D E F G OD/ODmax (%) HIAA ELISA (mg/l) 14. VALORES ESPERADOS Los resultados por si solos no deben ser la única razón para un tratamiento terapéutico, sino que deben correlacionarse con observaciones clínicas y ensayos de diagnóstico. Los sujetos aparentemente sanos presentan los siguientes valores: (97.5 % percentil) 5-HIAA Orina mg/24h µmol/d Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de valores normales. 15. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO La toma de la muestra y almcenamiento tiene un efecto importante en los resultados. Vea TOMA DE MUESTRA Y ALMACENAMIENTO para mayores detalles. Para reactividad cruzada, vea PRUEBAS FUNCIONALES. Version / 6

7 16. PRUEBAS FUNCIONALES Especificidad Analítica (Reactividad Cruzada) Sensibilidad Analítica (Límite de Detección) Precisión Intervalo (mg/l) CV (%) Intra-Ensayo Inter-Ensayo Substancia Reactividad Cruzada (%) 5-HIAA 100 Serotonin-hydrochloride 9.5 indol-3-acido pirúvico 1.0 Melatonina indol-acido acrílico 0.9 Triptamina indol-Acido acético 0.8 L-5-OH-Triptofan Methoxytryptophol Metoxi-DL-Triptofan 0.01 DL-Triptofan mg/l Señal media (Estándar-Cero) - 2DS Linearidad Intervalo (mg/l) Dilución en Serie hasta Intervalo (%) : Recuperación Medio (%) Intervalo (%) % Recuperación después del enriquecimiento Comparación de Métodos versión corta = 1.04 x Toda la noche r = 0.98; n = REFERENCIAS SOBRE EL PRODUCTO 1. Millot S., Begout M. L., Person-Le Ruyet J., Breuil G., Di-Poi C., Fievet J. Pineau P., Roue M., Severe A. Feed demand behavior in sea bass juveniles: effects on individual specific growth rate variation and health. Aquaculture, January (2008), Vol. 274, Issue 1, Hou C Jia F, Liu Y, Li L Brain Research 1095 (2006) : CSF serotonin, 5-hydroxyindolacetic acid and neuropeptide Y levels in severe major depressive disorder. 3. Zuetenhorst JM et al. Daily Cyclic Changes in the Urinary Excretion of 5-Hydroxyindoleacetic Acid in Patients with Carcinoid Tumors. Clin. Chem. 50/9: (2004) 4. Mueck AO et al. Effect on biochemical vasoactive markers during postmenopausal hormone replacement therapy: estradiol versus estradiol/dienogest. Maturitas 38: (2001) 5. Mueck AO et al. Der Effekt von Norethisteron-Acetat auf cgmp und Serotonin als biochemische Marker der endothelialen Gefässfunktion bei postmenopausalen Frauen. J. Menopause 3/1998: 23ff. (1998) Version / 6

8 Symbols / Symbole / Symbôles / Símbolos / Símbolos / Σύµβολα REF LOT Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N.º Cat.: / N. Cat.: / Αριθµός-Κατ.: Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.º: / Lotto n.: / Αριθµός -Παραγωγή: Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser à: / Usado por: / Usar até: / Da utilizzare entro: / Χρησιµοποιείται από: No. of Tests: / Kitgröße: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N.º de Testes: / Quantità dei tests: / Αριθµός εξετάσεων: CONC Concentrate / Konzentrat / Concentré / Concentrar / Concentrado / Concentrato / Συµπύκνωµα LYO IVD Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilisé / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato / Λυοφιλιασµένο In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Médical pour Diagnostics In Vitro. / Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro. / Equipamento Médico de Diagnóstico In Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / Ιατρική συσκευή για In-Vitro ιάγνωση. Evaluation kit. / Nur für Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour évaluation. / Juego de Reactivos para Evaluació. / Kit de avaliação. / Kit di evaluazione. / Κιτ Αξιολόγησης. Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. / Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instruções antes de usar. / Leggere le istruzioni prima dell uso. / ιαβάστε τις οδηγίες πριν την χρήση. Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schützen. / Garder à l abri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Manténgase alejado del calor o la luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. / Να φυλάσσεται µακριά από θερµότητα και άµεση επαφή µε το φως του ηλίου. Store at: / Lagern bei: / Stocker à: / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: / Αποθήκευση στους: Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / Παραγωγός: Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaución! / Cuidado! / Attenzione! / Προσοχή! Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED. Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben. Voir MATERIEL FOURNI pour les symbôles des composants du kit. Símbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS. Para símbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS. Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT. Για τα σύµβολα των συστατικών του κιτ συµβουλευτείτε το ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ. IBL AFFILIATES WORLDWIDE IBL International GmbH Flughafenstr. 52A, Hamburg, Germany IBL International Corp. 194 Wildcat Road, Toronto, Ontario M3J 2N5, Canada Tel.: + 49 (0) Fax: IBL@IBL-International.com WEB: Tel.: +1 (416) Fax: Sales@IBL-International.com WEB: LIABILITY: Complaints will be accepted in each mode written or vocal. Preferred is that the complaint is accompanied with the test performance and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer Symbols Version 3.5 /