Sistema de autentificación de queso con D.O.P. Idiazabal

Transcripción

1 Sistema de autentificación de queso con D.O.P. Idiazabal PROCESO DE ACREDITACIÓN ELISA JIMÉNEZ 11/24/2014 1

2 INTRODUCCIÓN Queso D.O.P Idiazabal Producto de alto valor añadido Producido con leche cruda procedente de ovejas de raza Latxa y/o Carranzana (BOE nº 289 de ) Necesidad: controlar posible inclusión de leche procedente de razas no autorizadas (Assaf, Awassi y Lacaune) 11/24/2014 2

3 OBJETIVOS Proyecto GAZTARIA Objetivo: desarrollo de una herramienta de análisis genético capaz de evidenciar la presencia de leche procedente de razas Assaf, Awassi y Lacaune en el proceso de producción de queso con D.O.P. Idiazabal Validación de la metodología desarrollada Acreditación de la metodología bajo la norma ISO17025 por ENAC Alcance de acreditación: leche y queso 11/24/

4 DESARROLLO Fases iniciales 1. Recopilación de muestras de sangre de distintas razas de oveja Elaboración del perfil genético de cada raza 2. Búsqueda de marcadores genéticos diferenciadores SNPs 3. Optimización de metodologías de extracción ADN leche y queso Alto contenido en grasa, bajo porcentaje de células de oveja /24/2014 4

5 DESARROLLO Búsqueda de Marcadores Genéticos Análisis de genotipado de SNPs (polimorfismos de nucleótido único Infinium Ovine 50K SNP Beadchip (Illumina Inc., EEUU) Análisis de SNPs simultáneamente Determinación de SNPs útiles Programa WEKA (algoritmo RANKER) SNPS LATXA/CARRANZANA vs ASSAF/AWASSI (n=3) (LA1,LA2,LA3) LACAUNE (n=3) (LN4, LN5, LN6) Imagen /24/2014 5

6 RESULTADOS Análisis de Genotipado Análisis de 6 SNPs: RT-PCR sondas Taqman MGB Sistema LC480 Roche Fluorescencia: Alelo 1 marcado FAM /Alelo 2 marcado VIC Asignación de muestras problema: software Geneclass2.0 Comparación de genotipos problema con panel de referencia Obtención de score de asignación Imagen: Taqman Applied Biosystems Imagen: Wikipedia 11/24/2014 6

7 RESULTADOS Procedimiento laboratorio MUESTREO Leche/Queso EXTRACCIÓN DNA Kit Qiagen/Stratec GENOTIPADO 6 SNPs TaqMan MGB Probes/Roche LC480 ASIGNACIÓN INDIVIDUOS Geneclass 2.0 Imagen: Roche Applied Science 11/24/2014 7

8 VALIDACIÓN Validación 2014 Análisis de 742 muestras Sangre fresca/congelada n = 381 Queso curado n = 183 Leche fresca/congelada n = 178 Parámetros EFICIENCIA (Aciertos/Total) >95% ESPECIFICIDAD (Verdaderos negativos/negativos) >94% SENSIBILIDAD (Verdaderos positivos/positivos) > 94% REPRODUCIBILIDAD (Misma muestra, distintos análisis) > 90% 11/24/2014 8

9 ACREDITACIÓN Acreditación Elaboración de manuales de análisis Creación de plantillas de análisis: Macros Excel Visual Basic Normalización de datos Cálculo de genotipos Asignación de muestra problema a población de referencia Solicitud de acreditación Noviembre 2014 Fecha estimada de auditoría: Enero-Febrero 2015 Obtención? SI: HERRAMIENTA ELEMENTO DE CONTROL NO: SUBSANACIÓN NO CONFORMIDADES 11/24/2014 9

10 ACTIVIDADES FUTURAS Futuros pasos Subsanación de no conformidades halladas durante la auditoría Posibilidad de validación de cuantificación: elaboración de quesos a partir de mezclas artificiales de leche empleando leches con certificado de raza Posibilidad de inclusión de nuevas razas en el futuro Evaluación de muestras suministradas por CRDO Idiazabal y unidades de queso puestas a la venta Difusión de resultados en jornadas sectoriales y publicaciones técnicas 11/24/

11 T Txatxarramendi ugartea z/g Sukarrieta, Bizkaia Herrera Kaia, Portualdea z/g Pasaia, Gipuzkoa Astondo Bidea, Edificio 609 Parque Tecnológico de Bizkaia Derio, Bizkaia 11