Adalitza Guillen, Maivelin González, Liliana Gallego*, Benny Suárez, Henny Luz Heredia, Tulia Hernández, María Naranjo & Juancarlos Salazar

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1 BOLETÍN DE MALARIOLOGÍA Y SALUD AMBIENTAL Enero-Julio 2013, Vol. LIII (1): Presencia de protozoarios intestinales en agua de consumo en la comunidad 18 de Mayo. Estado Aragua-Venezuela, 2011 Presence of intestinal protozoans in water of consumption in 18 de Mayo Community. Aragua State-Venezuela Adalitza Guillen, Maivelin González, Liliana Gallego*, Benny Suárez, Henny Luz Heredia, Tulia Hernández, María Naranjo & Juancarlos Salazar RESUMEN La transmisión de parásitos intestinales a través del agua representa un problema de salud pública a nivel mundial. Considerando la importancia del agua como uno de los recursos renovables más importantes para el hombre por su utilidad, abundancia y amplia distribución en la naturaleza, la contaminación de ésta con excretas humanas y animales, favorecen la transmisión de infecciones parasitarias. A fin de determinar la presencia de protozoarios intestinales en el agua para consumo humano del pozo profundo en la comunidad 18 de Mayo, municipio Francisco Linares Alcántara y en 10 casas seleccionadas de la misma comunidad, se tomaron muestras de 20 litros en cada punto, por duplicado, y se aplicó la técnica de concentración por floculación, para posteriormente realizar observación directa utilizando solución salina y lugol; y se empleó el método de Kinyoun. Adicionalmente, al agua del pozo se le realizó el análisis fisicoquímico. Se observó presencia de protozoarios patógenos y comensales en 90% de las muestras provenientes de las viviendas. En las muestras del pozo profundo se evidenciaron quistes de Giardia intestinalis, Entamoeba coli y ; no se observó la presencia de coccidios ni microsporidias intestinales. La desinfección del agua del pozo que surte esta comunidad es de suma importancia, además de recomendar a las comunidades el tratamiento del agua de consumo. Palabras clave: Agua de consumo humano, protozoarios intestinales, transmisión. SUMMARY The transmission of intestinal parasites through water represents one of the world s most prominent public health problems. Water is one of the most important renewable resources for the man, for its usefulness, abundance and wide distribution in the nature, but human and animal excretion contamination in potable water favors the transmission of parasitic infections. In order to determinate the presence of intestinal protozoans in drinking water from the deep-wells and in 10 selected houses in the 18 de Mayo community of Francisco Linares Alcantara municipality, Aragua State, two 20 liter water samples were taken and processed through the concentration by flocculation technique for direct observation using physiological saline solution and lugol, and the Kinyoun coloration technique. Additionally, physicochemical analysis was conducted on the well water. Pathogenic and commensal protozoans were observed in 90% of the analyzed samples. Cysts of Giardia intestinalis, Entamoeba coli and were found in the deep-well sample but not intestinal coccidia and microsporidia. The disinfection of the well water that supplies this community is really important, and it is recommended that the community s drinking water be routinely treated. Key words: Water of human consumption, intestinal protozoans, transmission. INTRDUCCIÓN Las parasitosis intestinales se definen como una infección del aparato gastrointestinal causada por protozoarios o helmintos, que afectan a individuos independientemente del estado inmunológico, edad y condición socioeconómica (Botero & Restrepo, 2003). Constituyen un problema de salud pública por las patologías que ocasionan en niños y adultos y su prevalencia, tanto a nivel mundial como en Venezuela, representando un signo de alarma, pues están ubicadas dentro de las cinco primeras causas de consultas médicas. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que cada año se presentan 500 millones de casos de diarreas en niños menores de cinco años, entre 3 y 4% de estos casos terminan con Servicio Autónomo Instituto de Altos Estudios Dr. Arnoldo Gabaldon (MPPS). Maracay, Estado Aragua - Venezuela. *Autor de correspondencia: lilianagallego444@hotmail.com 29

2 Presencia de protozoarios intestinales la muerte. Estas enfermedades son el resultado de la pobreza, la desnutrición y un saneamiento ambiental deficiente, particularmente de inadecuados sistemas de abastecimiento de agua e incorrecta disposición de las excretas (OMS, 2006). Las infecciones parasitarias ocasionadas por protozoarios dan origen a diversos procesos gastrointestinales, que suelen ir acompañados por diarreas acuosas o sanguinolentas, dolor abdominal y fiebre. Las diarreas ocupan el tercer lugar entre las principales causas de muerte en niños menores de cinco años, representando así el 17% de todas las muertes a nivel mundial (OMS/OPS, 2004). El ciclo de vida de estos parásitos se inicia a través de la ingesta de agua o alimentos contaminados; pueden ser transmitidos en forma vegetativa (trofozoítos) o quística, siendo esta última la forma infectante para el hombre (Botero & Restrepo, 2003). El agua es un vehículo importante de agentes patógenos causales de diversas enfermedades en el humano, las cuales afectan frecuentemente a la población. Las comunidades rurales a nivel mundial han estado al margen de la verificación de la calidad del agua que utilizan para consumo humano. Existen reportes de comunidades con alta incidencia de enfermedades gastrointestinales y parasitarias, cuyo origen se ha atribuido a la deficiencia en la calidad del agua de pozo que utilizan para consumo (Fuentes et al., 2007). Estadísticas epidemiológicas a nivel mundial señalan que todas las semanas mueren unas personas a causa de enfermedades relacionadas con la escasa calidad del agua potable y la falta de saneamiento, reportándose que más del 90% de las personas afectadas son niños menores de cinco años (OMS & UNICEF, 2005). Venezuela no escapa de esta realidad, pues se observó que las enfermedades infecciosas intestinales por transmisión hídrica y alimentos correspondieron al 6,6%; 6,2%; 11,1% y 11,3% de las causas de consulta médica para los años 2006, 2007, 2008 y 2009, respectivamente, correspondiendo a la sexta causa de consulta para los años 2006 y 2007 y la tercera causa para los años 2008 y 2009 (MPPS, 2006, 2007, 2008, 2009). La prevalencia de las parasitosis por protozoarios en Venezuela, varía según la región, reconociéndose como los de mayor relevancia y los que comúnmente se encuentran en agua las especies: Giardia intestinalis, Entamoeba histolytica/e. dispar, 30 Entamoeba coli,, Blastocystis sp., Cryptosporidium sp., microsporidias, Cyclospora cayetanensis e Isospora belli (Botero & Restrepo, 2003). En el estado Aragua, las enfermedades infecciosas y parasitarias por transmisión hídrica y alimentos se encontraron como la tercera causa de consulta médica para el año 2009, correspondiendo al 7,1% (MPPS, 2009). Por su parte, el Municipio Francisco Linares Alcántara resultó ser el segundo con mayor casos de diarrea en el estado (CORPOSALUD- Aragua, 2012). Estudios anteriores en el agua de consumo humano en la comunidad Francisco de Miranda, perteneciente a dicho municipio y cercano a la comunidad 18 de Mayo reportaron la presencia de protozoarios patógenos, tales como: Blastocystis sp. y G. intestinalis, causales de diarrea, en un 80,64% (González et al., 2000). La Norma Sanitaria de Calidad del Agua Potable en Venezuela, establece en su artículo 10, que ésta no debe contener agentes patógenos: virus, bacterias, hongos, protozoarios, ni helmintos, en tal razón se hace de vital importancia, verificar el monitoreo del cumplimiento de esta norma a nivel nacional. Se hace necesario el estudio del principal vehículo de las enfermedades parasitarias, causantes del deterioro de la salud de la población (MSAS, 1998). La evaluación precisa y a tiempo de la calidad parasitológica del agua contribuiría a disminuir la morbi-mortalidad y las tasas de reinfección entre la población de la comunidad 18 de Mayo del municipio Francisco Linares Alcántara del estado Aragua. Al determinar la presencia de protozoarios intestinales en agua de consumo humano, se pueden orientar las medidas preventivas al momento de utilizar el agua y alertar a los entes responsables de la calidad de la misma para que se adopten las medidas de control necesarias, lo que repercutirá en la mejora de la calidad de vida de sus habitantes. MATERIALES Y MÉTODOS Tipo de investigación La presente investigación es de campo, enmarcado dentro del tipo descriptivo y transversal, donde se determinó la presencia de parásitos intestinales en aguas de consumo humano de la comunidad 18 de Mayo, municipio Francisco Linares Alcántara, del estado Aragua (Venezuela), durante el primer trimestre del año Bol. Mal. Salud Amb.

3 Guillen A. et al. Población y muestra La población estuvo representada por el pozo profundo que surte la comunidad y 18 casas, 9 ubicadas en la calle Los Pinos y 9 en la calle Juan Landaeta de la comunidad 18 de mayo, del municipio Francisco Linares Alcántara, Estado Aragua. Dichas calles, reciben agua por tubería directa del pozo profundo. Para el cálculo de la muestra se trabajó con un muestreo no probabilístico intencional: desde la ubicación del pozo se seleccionaron las viviendas ubicadas cada 40 metros pertenecientes a la calle Los Pinos y la calle Juan Landaeta hasta completar 200 metros de distancia en relación al pozo, estando la muestra conformada por el pozo profundo que distribuye el agua de consumo a la comunidad, 5 casas de la Calle Los Pinos y 5 casas de la Calle Juan Landaeta con un total de 11 puntos de muestreo (Fig. 1). Procedimiento experimental Se realizó visita a la comunidad, con el propósito de informar a los integrantes del Consejo Comunal 18 de Mayo sobre la finalidad del estudio, censar las viviendas y obtener el consentimiento informado para la ejecución del trabajo. Una vez obtenidos estos datos, se identificó el pozo profundo 18 de Mayo y se seleccionaron los puntos y la distancia en metros para la captación de las muestras de agua (Fig. 2). Para el control de la recolección de las muestras, se utilizó una ficha a fin de llevar el registro de la identificación por número de muestra y sitio de evaluación. El muestreo se inició en el mes de enero y culminó en febrero 2011, comprendiendo de esta manera un período de dos meses, con recolección de las muestras de forma semanal. Técnica y proceso para recolección de muestras Las muestras de agua fueron recolectadas en envases plásticos, boca ancha, tapas herméticas, y esterilizados, de 20 litros de capacidad, utilizándose dos envases por punto de muestreo. La recolección se realizó directamente de la toma de agua para consumo, Fig. 1. Distribución de los puntos de muestreo en la comunidad 18 de Mayo, municipio Francisco Linares Alcántara del estado Aragua, Vol. LIII, Nº 1, Enero-Julio,

4 Presencia de protozoarios intestinales Fig. 2. Esquema para la captación de la muestra en los diversos puntos en la comunidad 18 de Mayo, municipio Francisco Linares Alcántara del estado Aragua, Adicionalmente, se realizó el análisis físico químico del agua proveniente del pozo, en el laboratorio de agua de la Dirección de Salud Ambiental del Ministerio del Poder Popular para la Salud (DGSA/MPPS). Análisis de datos Los datos recolectados se tabularon empleando la herramienta ofimática Excel, a fin de calcular las prevalencias parasitarias, verificar las frecuencias y analizar los porcentajes en las muestras procesadas. previo flameo para evitar la contaminación externa. Los envases fueron identificados con el número de muestra correspondiente, hora y fecha de recolección. Una vez obtenidas las muestras, las mismas se trasladaron al Laboratorio de Epidemiología del Servicio Autónomo Instituto de Altos Estudios Dr. Arnoldo Gabaldon (IAE/MPPS), para ser procesadas por el método de floculación. Análisis de las muestras para la determinación de parásitos A fin de concentrar los posibles parásitos en las muestras se aplicó el método de Floculación, el cual consiste en una combinación de reactivos, que aumentan la densidad de los parásitos de manera que estos precipiten. Para ello se procedió a añadir 10 ml de cloruro de calcio (ClCa 2 ) 1M por cada litro de muestra y 10 ml carbonato de sodio (NaHCO 3 ) 1M por litro de muestra. Posteriormente, se midió el ph ajustándolo a 10 con hidróxido de sodio (NaOH) 3N y se dejó sedimentar por un lapso mínimo de cuatro horas. Se extrajo el sobrenadante sin remover el sedimento y se agregó ácido sulfámico (NH 2 SO 3 H) hasta la completa disolución, luego se trasvasó a tubos plásticos de 15 ml para centrifugarlos a r.p.m. durante 15 minutos a 15ºC. Se extrajo el sobrenadante de cada tubo y se hicieron varias mezclas por muestra, las cuales se enrasaron hasta 15 ml con buffer fosfato salino (PBS), se centrifugó, se eliminó el sobrenadante y se prepararon mezclas con los sedimentos de cada tubo (Vesey & et al., 1993). Se obtuvo de esta manera la muestra a la cual se le aplicaron los métodos de solución salina fisiológica 0,85%, Lugol y Kinyoun descritos por Botero (2003). Para el análisis, se examinaron las preparaciones en microscopio óptico con el objetivo de 10X, 40X y 100X. 32 Consideraciones éticas El estudio fue realizado previo consentimiento de los habitantes de la comunidad "18 de Mayo". RESULTADOS Se procesaron un total de 10 muestras de agua por duplicado provenientes de las viviendas; de las cuales 9/10 (90%) resultaron positivas a la presencia de protozoarios intestinales. El 88,9% de las muestras se encontraban poliparasitadas, mientras que una sola muestra estaba monoparasitada con G. intestinalis. En la Tabla I, se señalan los géneros y especies de protozoarios aislados del agua de consumo humano Tabla I. Distribución total de protozoarios observados en el agua de las viviendas correspondientes a la calle Los Pinos y Juan Landaeta de la comunidad 18 de Mayo, municipio Linares Alcántara. Estado Aragua, Casa Nº Protozoarios (quistes) 1 Giardia intestinalis Entamoeba coli Blastocystis sp. 2 Negativo 3, 4, 6 y 8 Giardia intestinalis 5 Giardia intestinalis Entamoeba coli Giardia intestinalis Blastocystis sp. Blastocystis sp. Bol. Mal. Salud Amb.

5 Guillen A. et al. recolectada en cada uno de los 10 puntos ubicados cada 40 metros a partir del pozo profundo. Se pudo observar que E. nana estaba presente en mayor número de muestras (8/10), seguido por G. intestinalis (7/10) y con menor frecuencia, Blastocystis sp. (3/10) y E. coli (2/10), siendo patógenos para el ser humano las especies G. intestinalis y Blastocystis sp., los restantes corresponden a especies comensales, indicadores de contaminación fecal. En lo que respecta a la muestra procedente del pozo profundo 18 de Mayo, se realizó en primera instancia el análisis físico-químico, los resultados se muestran en la Tabla II. Es importante destacar que los parámetros físico-químicos cumplen con lo establecido con las normas sanitarias de calidad de agua potable publicada en la Gaceta Oficial de la República de Venezuela Nº de fecha , sin embargo, no se encontró la presencia de cloro residual, lo que indica que no se está utilizando ningún sistema que garantice la potabilización del agua que se distribuye. La muestra recolectada del pozo profundo también fue analizada para determinar la presencia de protozoarios, identificándose las especies: G. Tabla II. Análisis químico del agua del pozo profundo de la comunidad 18 de mayo, municipio Linares Alcántara, estado Aragua, Parámetros unidades Valor máximo aceptable Resultados Temperatura (ºC) VNE 25 Turbiedad (UNT) VNE 0,5 ph a 25ºC 6,5-8,5 7,2 Conductividad específica a 25ºC (Micromhos/cm) VNE 326 Dureza total (mg/l) Sólidos totales disueltos (mg/l) Calcio (mg/l) VNE 48 Magnesio (mg/l) VNE 9,6 Hierro total (mg/l) 0,3 0,0 Magnesio total (mg/l) 0,5 0,0 Cloruro (mg/l) Cloro residual (mg/l) 0,3-0,5 0,0 Floruro (mg/l) 0,6-1,5 0,4 Sulfatos (mg/l) ,6 Nitritos (mg/l) 0,03 0,0003 Parámetros (Unidades) Resultados Alcalinidad total (mg/l) 62 Bicarbonato (mg/l) 75,6 Carbonato (mg/l) 0,0 Hidróxidos (mg/l) 0,0 ÍNDICE DE LANGELIER -0,7 Dióxido de carbono libre (mg/l) 7,7 VNE: Valor No Establecido Fuente: Laboratorio de Agua Dirección General de Salud Ambiental, Vol. LIII, Nº 1, Enero-Julio,

6 Presencia de protozoarios intestinales intestinalis, E. nana y E. coli, dichos parásitos coinciden con los encontrados en las muestras provenientes de las viviendas analizadas y ubicadas alrededor del pozo. DISCUSIÓN En el presente trabajo se determinó la presencia de protozoarios intestinales en agua de consumo humano de las viviendas en la comunidad 18 de Mayo, encontrándose una elevada prevalencia, dado que 90% de las muestras analizadas fueron positivas, resultado superior a lo reportado por Costamagna et al. (2005), quienes analizaron aguas recreacionales provenientes de piscinas y el Arroyo Napostá en la ciudad de Bahía Blanca (Provincia de Buenos Aires, Argentina), evidenciando la presencia de parásitos intestinales en el 50% de las muestras estudiadas, y lo referido por González et al. (2000) quienes al analizar el agua de consumo humano de la comunidad de Francisco de Miranda del estado Aragua, reportaron una prevalencia de 80,64% para protozoarios patógenos, tales como: Blastocystis sp. y G. intestinalis. En relación al agua proveniente del pozo profundo 18 de Mayo, se observó la presencia de quistes de G. intestinalis, E. nana y E. coli. Resultados similares han sido demostrados por Pérez et al., (2008) quienes lograron identificar quistes de G. intestinalis y E. coli en pozos profundos de Trujillo (Perú), adicionalmente estos autores detectaron otros géneros y especies tales como: Blastocystis, C. cayetanensis, Cryptosporidium sp. y Balantidium coli, los cuales no se encontraron en este estudio. Por su parte Lura et al. (2002), realizaron un estudio de aguas subterráneas que les permitió comprobar la presencia de quistes y ooquistes de protozoarios entre los cuales se encuentran: E. histolytica/e. dispar, G. intestinalis y Cryptosporidium sp., coincidiendo con este estudio, la presencia de quistes de G. intestinalis. Estos autores llevaron a cabo el análisis físico-químico del agua proveniente de esa fuente, encontrando que todas las muestras estudiadas estuvieron dentro del rango de los valores considerados normales, similar a lo obtenido en el análisis físico-químico del agua del pozo profundo, sin embargo, es importante destacar que la concentración del cloro residual en la misma se encontraba ausente, lo que va en contra de 34 la Norma Sanitaria de Calidad del Agua Potable, la cual establece que la concentración de cloro residual libre en cualquier punto de la red de distribución debe encontrarse entre 0,3 y 0,5 mg/l, por lo que este factor podría constituir una de las causas de la frecuencia parasitaria encontrada. En el estudio realizado, no se observó la presencia de coccidios ni microsporidias intestinales. A diferencia de la investigación realizada por Castro et al. (2009) al Noroeste de España en Galicia, quienes detectaron Cryptosporidium parvum, C. andersoni, C. hominis y ensamblajes A-I, A-II, E de G. intestinalis en aguas superficiales. Para ello, recolectaron muestras en 22 puntos en la cuenca principal, en el origen y la desembocadura de los tres ríos más importantes de la ciudad. De igual manera, Campos et al. (2008), identificaron ooquistes de Cryptosporidium en aguas subterráneas de Bogotá (Colombia). En el estudio de Costamagna et al. (2005) anteriormente citado, se determinó la presencia de parásitos de importancia sanitaria para el hombre en el arroyo Napostá, en aguas recreacionales (piscinas públicas) y en aguas de consumo humano. Las formas parasitarias observadas en aguas del arroyo Napostá correspondientes a protozoarios fueron quistes de Giardia sp., Entamoeba sp., Endolimax sp., ooquistes de Cryptosporidium sp., y huevos de helmintos como Hymenolepis diminuta, Toxocara sp., Trichostrongylus sp., Ascaris sp. y larvas de nemátodes. En el agua de las piscinas evaluadas se identificaron quistes de Giardia sp., Entamoeba sp., Endolimax sp., huevos de Hymenolepis diminuta, Toxocara sp., Trichostrongylus sp., Ascaris sp. y larvas de nemátodes. En lo referente a las aguas de consumo lograron identificar ooquistes de Cryptosporidium sp., a diferencia del presente estudio. Es de resaltar, que según las normas sanitarias de calidad del agua potable publicado en la Gaceta Oficial de la República Bolivariana de Venezuela Nº en el año 1998 por el Ministerio de Sanidad y Asistencia Social (MSAS), el Artículo 10 establece que el agua potable no debe contener agentes patógenos: virus, bacterias, hongos, protozoarios ni helmintos, al contrario del presente trabajo donde se demuestra la presencia de parásitos, lo cual certifica que el agua analizada no es apta para consumo, a lo que se suma la ausencia de cloro residual, lo cual es Bol. Mal. Salud Amb.

7 Guillen A. et al. indicativo de que el pozo no recibe ningún tipo de tratamiento clorado, por lo que resulta importante educar a los habitantes de la comunidad acerca del tratamiento de agua de consumo. AGRADECIMIENTOS Al Servicio Autónomo Instituto de Altos Estudios Dr. Arnoldo Gabaldon. Dirección General de Salud Ambiental, en especial la Lcda. Ruth Vera y la Lcda. Carolina Salas. Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (IVIC). Hidrocentro. Universidad de Carabobo, Sede Aragua. Departamento de Parasitología. Consejo Comunal de la Comunidad 18 de Mayo, municipio Francisco Linares Alcántara del estado Aragua (Venezuela). Conflictos de intereses Ninguno. REFERENCIAS Botero D. & Restrepo M. (2003). Parasitosis humanas (4º ed). Fondo Editorial CID. Medellín, Colombia. Campos C., Cárdenas M. & Guerrero A. (2008). Comportamiento de los indicadores de contaminacion fecal en diferentes tipos de agua de la Sabana de Bogotá (Colombia). Univ. Sci. 13: Castro J., García I., Almeida A., González M., Carreira J. & Mezo M. (2009). Detection of Cryptosporidium spp. and Giardia duodenalis in surface water: a health risk for humans and animals. Water Research. 42: Costamagna S., Visciarelli E., Luchi L. & Basualdo J. (2005). Parasitosis en agua del Arroyó Napostá, aguas de recreación y de consumo en la ciudad de Bahia Blanca (Provincia de Buenos Aires Argentina). Parasitol. Latinoam. 60: CORPOSALUD-Aragua (2012). Boletín Epidemiologico Semana 01 [Documento en línea]. Disponible en: gov.ve/web/archivos/boletines2012/boletin01. pdf [Consultado: Mayo 5, 2011] Fuentes A., Campas O., Aguilar G. & Meza M. (2007). Calidad microbiológica del agua de consumo humano de tres comunidades rurales del sur de sonora (México). RESPYN. 8: González G., Bolívar G. & Fernández I. (2000). Determinación de la calidad del agua de consumo mediante análisis bacteriológico y parasitológico en la comunidad Francisco de Miranda, Edo. Aragua. Rev. Fac. Farm. 40: Lura M., Beltramino D., Abramovich B., Carrera E., Haye M. & Contini L. (2002) El agua subterranea como agente transmisor de protozoos intestinales. Rev. Chil. Pediatr. 73: MSAS (1998). Normas Sanitarias de Calidad de Agua: Año 1997 [Gaceta Oficial de la República de Venezuela Nº de fecha ], Caracas. MPPS (2006). República Bolivariana de Venezuela. Información Epidemiológica Sobre Morbilidad. Venezuela Caracas. MPPS (2007). República Bolivariana de Venezuela. Información Epidemiológica Sobre Morbilidad. Venezuela Caracas. MPPS (2008). República Bolivariana de Venezuela. Información Epidemiológica Sobre Morbilidad. Venezuela Caracas. MPPS (2009). República Bolivariana de Venezuela. Información Epidemiológica Sobre Morbilidad. Venezuela Caracas. OMS/OPS (2004). Salud y Ambiente. Washington, D.C. USA. OMS (2006). Guías para la calidad del agua potable [Documento en línea]. Disponible: http// gdwq3_es_fulll_ lowsres.pdf. [Consultado: Mayo 5, 2010] OMS & UNICEF (2005). El Agua Fuente de Vida [Documento en línea]. Disponible: waterforlife.pdf [Consultado: Mayo 2, 2011] Vol. LIII, Nº 1, Enero-Julio,

8 Presencia de protozoarios intestinales Pérez G., Rosales M., Valdez R., Vargas F. & Córdova O. (2008). Detección de parásitos intestinales en agua y alimentos de Trujillo, Perú. Rev. Peru. Med. Exp. Salud Púb. 25: Vesey, G; Slade, J; Byrne, M; Shepherd, K y Fricker, C. (1993). A new method for the concentration of Cryptosporidium oocysts from water. J. Appl. Bacteriol. 75: Recibido el 01/08/2012 Aceptado el 06/03/ Bol. Mal. Salud Amb.