Prof. INTRODUCCIÓN. Bata de laboratorio, Cuaderno de laboratorio, guantes, tapabocas, gorro, marcador vidriográfico

Transcripción

1 Prof. INTRODUCCIÓN En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes moléculas orgánicas en gran cantidad: carbohidratos, lípidos, proteínas y nucleótidos. Todas estas moléculas contienen Carbono, Hidrógeno y Oxígeno. Amás, las proteínas contienen Nitrógeno y Azufre, y los nucleótidos, así como algunos lípidos, contienen Nitrógeno y Fósforo. Diversos análisis laboratorio permiten reconocer la presencia estas moléculas en muestras biológicas, los cuales se basan en la constitución química los compuestos y su reacción con algunos reactivos y colorantes. OBJETIVOS Realizar la terminación como carbohidratos, grasa, proteínas y vitaminas en muestras biológicas que representan diferentes grupos celulares. Intificar diferentes procedimientos cualitativos para el reconocimiento polímeros y monómeros basados en la constitución química estas moléculas. MATERIALES QUE DEBE LLEVAR EL ESTUDIANTE Bata laboratorio, Cuarno laboratorio, guantes, tapabocas, gorro, marcador vidriográfico Muestras biológicas (muestras problema) Grupo 1: porción leche (5 ml), porción manzana, jugo naranja Grupo 2: porción carne res o cerdo, porción harina trigo leudante, jugo guayaba Grupo 3: porción pan, huevo, porción aguacate Grupo 4: salchicha, porción fríjoles frescos, porción melón METODOLOGÍA 1. Ingresar al Laboratorio Biología con su guía trabajo, materiales, muestras requeridas, su bata y cuarno laboratorio. 2. Preparar soluciones patrón presencia/ausencia. Con el objetivo tener un patrón presencia o ausencia un biocompuesto en una muestra, se realizarán los procedimientos cualitativos con los reactivos reveladores carbohidratos, grasas

2 Prof. y proteínas utilizando el reactivo puro representativo cada una las biomoléculas en cuestión y un patrón don no se adicionará el biocompuesto para revisar el sarrollo la reacción únicamente con agua. Para esto se tendrá en cuenta la guía preparación la Tabla 1. Se utilizarán dos tubos para cada uno los procedimientos, ya que en uno ellos se adiciona el biocompuesto y en el otro únicamente agua como se scribe en el siguiente ejemplo: Tubo 1. Presencia Glucosa Tubo 2. Ausencia Glucosa 1mL + solución Glucosa 1mL + El tubo 1 mostrará la reacción Benedict si hay Glucosa y el tubo 2 mostrará la reacción si no hay glucosa. Se preparán todos los tubos con soluciones patrón para tener una guía que nos permita comparar la reacción con una muestra la que no conozcamos si tiene o no el biocompuesto (muestra problema).

3 Tabla 1. Preparación reacciones patrón para el reconocimiento Tubo Biocompuesto Reactivo patrón 1 Carbohidrato 1 ml Glucosa monosacárido: Azúcar (10%) reductor 2 Carbohidrato monosacárido: Azúcar reductor 3 Carbohidrato Polisacárido: Almidón 4 Carbohidrato Polisacárido: Almidón Reactivo revelador 2 ml Benedict (CuSO4) + Calentamiento en baño serológico Resultado (+)Amarillo, naranja, terracota Fundamento Los monosacáridos tienen por reductor porque su grupo carbonilo (C=O) se pue oxidar a ácido (COOH), bido a la reducción otros compuestos como el Fe 3+ o Cu 2+. Como el reactivo Benedict está compuesto carbonato sodio, citrato sodio y sulfato cobre el cual es color azul, cuando reaccionan con el azúcar reductor se forma óxido cobre (I), color rojo. 1 ml Agua (-) Azul No hay azúcar reductor, por lo tanto el color resultante sigue siendo el l reactivo Benedict: azul. 1 ml Almidón (+) Violeta, El almidón es un polisacárido que pue formar (1%) negro complejos coloreados con el yodo que está presente en el reactivo Lugol. Este reactivo se entrelaza en las canas ramificadas l almidón generando esta coloración. 1 ml Agua 2 ó 4 gotas (-) Amarillo No hay almidón, por lo tanto el color resultante sigue Lugol siendo el l reactivo Lugol: amarillo 5 Proteína: Reacción Biuret 6 Proteína: Reacción Biuret 7 Proteína: Xantoprotéica 2 ml Albúmina huevo 2 ml NaOH (10%) + 3 ó 5 gotas CuSO4 (0,5%) (+) Rosado, violeta Los enlaces peptídicos que unen los aminoácidos las proteínas cuando se ponen en contacto con un álcali concentrado, forman una molécula compleja nominada biuret. Esta a su vez, en contacto con CuSO4 genera una coloración azul-violeta. 2 ml Agua (-) Azul No hay enlaces aminoácidos, por lo tanto el color resultante sigue siendo el l CuSO4: azul o un precipitado amarillo 2 ml Albúmina huevo 3 gotas HNO3 (+) Coagulación amarillenta En la reacción xantoproteica, el HNO3 reacciona con el radical fenilo los aminoácidos que lo contienen, radical que se transforma en hidroxi-benceno, que da el

4 8 Proteína: Xantoprotéica 2 ml Agua (-) Incoloro No hay aminoácidos bencénicos, por lo tanto no se genera reacción. 9 Lípido: Grasa 1 ml aceite + 2 ml Agua 4 ó 5 gotas Sudán III (+) Anillo rojo en la superficie 10 Lípido: Grasa 2 ml Agua (-) Rosado sin anillo 11 Vitamina C 5 gotas 12 Vitamina C 5 gotas agua solución ácido ascórbico 5 ml solución (vitamin C) lugol + almidón (azul) El Sudán III es un reactivo que pue colorear las grasas s naranja hasta rojo. No hay grasas, por lo tanto el color resultante sigue siendo el l reactivo Sudán III: rosado. (+) Clarificación La solución lugol + almidón oxida la vitamina C (ácido la coloración ascórbico) hasta ácido shidroascórbico e iones yoduro. azul (-) Coloración azul No hay vitamina C, por lo tanto el color la reacción sigue siendo azul.

5 3. Analizar las muestras biológicas (muestras problemas) para reconocer cuáles están presentes y cuáles no. Cada grupo tendrá 18 tubos ensayo que se berán repartir la siguiente forma: Cada tubo con la inicial la muestra, por ejemplo, Leche: L1, L2, L3, L4, L5, L6 Cada tubo con la inicial la muestra, por ejemplo, Manzana: M1, M2, M3, M4, M5, M6 Cada tubo con la inicial la muestra, por ejemplo, Naranja: N1, N2, N3, N4, N5, N6 Preparación las muestras: Si la muestra es líquida, adicionar 2 ml en cada tubo con pipeta Pasteur. Si la muestra es sólida, se be macerar en el mortero y se adicionará agua stilada para obtener una muestra acuosa, y se adicionará ahora a cada tubo. Para el análisis grasas se realizará un procedimiento adicional como se scribe a continuación: en un beaker adicionar una porción muestra y 2 ml ácido acético. Luego filtrar y retener la fracción sólida. A esta fracción retenida en el papel filtro, adicionar 2 ml éter. En el volumen filtrado quedarán las grasas extraídas. Adicionar el Sudán III para la terminación las grasas.

6 RESULTADOS Y DISCUSIONES Tome nota los resultados todos los grupos: Muestra Glucosa Almidón Proteína (Biuret) Proteína Lípidos (Xantoprotéica) Vitamina C Qué significa el resultado (+) ó ( ) en cada muestra Correspon el biocompuesto a la muestra procesada? Por qué no se encontró el biocompuesto en esa muestra? CONCLUSIONES Redacte mínimo tres conclusiones l trabajo que se hizo en el laboratorio. Deben ser personales.