UNIVERSIDAD DE CHILE FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS ESCUELA DE GRADUADOS

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1 UNIVERSIDAD DE CHILE FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACÉUTICAS ESCUELA DE GRADUADOS Desarrollo, Validación y Aplicación de ensayos analíticos para péptidos y proteínas, farmacológicamente activas, utilizando Cromatografía Líquida de Alta Resolución. Magíster en Ciencias Farmacéuticas CRISTÓBAL ANTONIO VALLEJOS RAMOS DIRECTOR DE TESIS: Dra. Maria Nella Gai Hernández 2007 Texto completo en:

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3 RESUMEN.. 4 Texto completo.. 5

4 Desarrollo, Validación y Aplicación de ensayos analíticos para péptidos y proteínas, farmacológicamente activas, utilizando Cromatografía Líquida de Alta Resolución. RESUMEN Hoy en día la validación de los métodos analíticos es más que una necesidad: es una exigencia y una práctica necesaria en todos los laboratorios de análisis que pretendan garantizar la calidad de los productos que elaboran. La validación es el proceso que permite verificar que un método es adecuado, para resolver un problema analítico particular, incluso es necesaria la validación de métodos considerados oficiales, ya sea en forma parcial o completa, como única forma de conocer los parámetros exigidos en una validación analítica. En este trabajo la siguiente hipótesis fue examinada: aplicando cromatografía líquida de alta resolución con detector UV y seleccionando adecuadamente las columnas cromatográficas, es posible desarrollar metodologías analíticas sencillas, rápidas y específicas para cuantificar fármacos de naturaleza polipeptídica en formas farmacéuticas. Consecuentemente los objetivos específicos de este trabajo fueron: estudiar las condiciones experimentales para el desarrollo y validación por HPLC para métodos de análisis para insulina humana, insulina lispro, desmopresina y calcitonina en sus respectivas formas farmacéuticas. En el rango de péptidos estudiados no se encontraron grandes problemas de estabilidad que obligaran a tomar precauciones especiales en el manejo de las muestras, pero sin duda esto más bien recae en las características particulares de cada péptido y no se puede generalizar, pero sí se puede asegurar que la insulina humana, la insulina lispro, la calcitonina y la desmopresina, se mantienen estables por varios días, incluso a temperatura ambiente, disueltas en los solventes indicados en cada metodología, parte de este trabajo. El empleo de columnas apropiadas, para péptidos de alto peso molecular, como calcitonina e insulinas, columnas largas y de cadena corta C-4 o C-8 con un tamaño de poro sobre 100 A, por ejemplo de 300 A, permite montar técnicas analíticas, confiables, de buena resolución y rápido desarrollo, absolutamente validables para su empleo en análisis de rutina en productos farmacéuticos que contengan estas moléculas. Se estableció un método preciso y confiable, para el análisis de todos los péptidos estudiados: insulina humana, insulina lispro, calcitonina y desmopresina, para ser aplicada en su forma farmacéutica comercial. Se estudiaron todos los parámetros involucrados en la validación de cada una de las metodologías analíticas, para cada uno de los péptidos involucrados en el estudio, logrando finalmente validar los métodos de análisis. La experiencia lograda en el manejo de solventes adecuado, para disolver las muestras y para formar las fases móviles, como también el tipo de columna (relleno y largo), sin duda permitirá el desarrollo más rápido y la validación de técnicas analíticas para otros péptidos que se deseen evaluar en el futuro. 4 Vallejos Ramos, Cristóbal Antonio

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