Dr. José Luis Subiza Garrido-Lestache
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- Raúl Crespo García
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1 Aspectos inmunológicos de los extractos polimerizados con glutaraldehído Relevancia en la inmunoterapia a máxima dosis Dr. José Luis Subiza Garrido-Lestache
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3 ALÉRGENOS MODIFICADOS Objetivos Reducir su capacidad alergénica Mantener su capacidad inmunogénica
4 ALÉRGENOS MODIFICADOS Tipos Modificaciones físicas: tratamiento térmico Modificaciones químicas (alergoides): Polimerización con Glutaraldehído Formaldehído, Polietienglicol Alérgenos modificados genéticamente Alérgenos recombinantes hipoalergénicos Fragmentos, monómeros o trímeros de Bet v 1 Isoformas hipoalergénicas
5 POLIMERIZACIÓN CON GLUTARALDEHÍDO
6 Alérgeno Nativo Alergoide GA Proteínas independientes Epitopos IgE Polímeros (> 100,000 Da)
7 Betula verrucosa Alergoide Bet v 1 Bet v 2 7
8 ELISA COMPETICION POTENCIA RELATIVA: D. pteronyssinus -0,20-0,25-0,30 Log (OD) -0,35-0,40-0,45-0,50-0,55-0,60 y = -0,1354x - 0,4276 R² = 0,9849 y = -0,1251x - 0,1289 R² = 0,9756-1,000-0,500 0,000 0,500 1,000 1,500 2,000 2,500 3,000 3,500 Log (microgramos) DPT-24-10E P11F1/DPT-24-10E DPT-24-10E NATIVO POLIMERIZADO P11F1/DPT-24-10E µg IC del 95% µg IC del 95% 50% INH* inferior superior 50% INH* inferior superior 0,1 0,1 0,2 7,7 4,8 12,2 10 HEP/10000 BU 10 HEP/10000 BU 7,5 4,6 12,2 411,9 259,5 653,7 Potencia relativa: 54,92 Potencia residual 1,82%
9 ALÉRGENOS MODIFICADOS Objetivos Reducir su capacidad alergénica Mantener su capacidad inmunogénica
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11 ALÉRGENOS MODIFICADOS Inmunogenicidad Células T = respuesta proliferativay patrón de citocinas Células dendríticas = capacidad de captación y maduración
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13 IDENTIFICACIONES P. pratense EXTRACTO NATIVO Extracción de proteínas Digestión con Tripsina Polimerización ALERGOIDE TOLEDO PHP 19-10Y NATIVO FARMACIA P10E1/PHP-14-9J polímero UNIPROT NCBI Phl p 1 Phl p 1 Phl p 1 Phl p 2 Phl p 2 Phl p 2 Phl p 3 Phl p 3 Phl p 3 Phl p 4 Phl p 5 Phl p 4 Phl p Phl p 6 Phl p 5 Phl p Phl p 11 Phl p Phl p 5 Phl p 12 Phl p 6 Phl p Phl p 11 Phl p Phl p 12 Phl p Phl p Phl p 6 Phl p 7 Phl p 11 Phl p 12 Phl p 13 Espectro de masas MS/MS Análisis 20/01/ Péptidos
14 INMUNIZACIÓN In Vivo Phleum pratense 1. Protocolo de inmunización 1ª Inmunización (subcutanea) 2ª Inmunización (subcutanea) 3ª Inmunización (subcutanea) 15 días 15 días 7 días SACRIFICIO Inmunógenos: Phleum Nativo Phleum Polimerizado
15 INMUNIZACIÓN In Vivo Phleum pratense Respuesta proliferativa en bazo de ratones inmunizados Inmunógeno: Nativo (20 µg) Inmunógeno: Polímero (20 µg) % PROLIFER RACIÓN DÍA 5 Cont PHA Nativo Nativo 5-70 * % PROLIFERA ACIÓN DÍA 6 ** ** Cont PHA Nativo Nativo 5-70 Estímulo de respuesta Estímulo de respuesta Estímulo de respuesta % PROLIFERA ACIÓN DÍA 7 ** ** Cont PHA Nativo Nativo 5-70 *< 0,05 ** < 0,01 *** < 0,001
16 INMUNIZACIÓN Ex Vivo Betula verrucosa
17 INMUNIZACIÓN Ex Vivo Betula verrucosa
18 INMUNIZACIÓN Ex Vivo Betula verrucosa
19 ALÉRGENOS MODIFICADOS Inmunogenicidad Células T = respuesta proliferativay patrón de citocinas Células dendríticas = capacidad de captación y maduración
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22 HLA-I Nativo D. glomerata Polímero D. glomerata
23 HLA-DR Nativo D. glomerata Polímero D. glomerata
24 CD86 Nativo D. glomerata Polímero D. glomerata
25 CD80 Nativo D. glomerata Polímero D. glomerata
26 FENOTIPO Y PATRÓN DE CITOCINAS DCshumanas derivadas de monocitos estimuladas con Phleumnativo (N) y polimerizado (P) HumoDCs +/- N o P 24 h HLA-DR CD86 Isotipo Medio Nativo Polimerizado 100 µg/ml CD83 IL-6 IL-8 IL pg/ml (-) N P 0 (-) N P 0 (-) N P
27 CAPTACIÓN DE ALÉRGENO CAPTACIÓN DE ALÉRGENO DCshumanas derivadas de monocitos expuestas a Phleumnativo (N) y polimerizado (P) FL1-H h
28 CAPTACIÓN DE ALÉRGENO CAPTACIÓN DE ALÉRGENO DCshumanas derivadas de monocitos expuestas a Phleumnativo (N) y polimerizado (P)
29 CONTROL 100x 48 h
30 ALÉRGENO NATIVO D. glomerata 100x 48 h
31 ALÉRGENO POLIMERIZADO D. glomerata 100x 48 h
32 CONCLUSIONES Propiedades inmunogénicasde los alérgenos polimerizados 1. Inducen una respuesta celular específica frente a epitopos T presentes en el alérgeno nativo. 2. Favorecen la maduración de células dendríticas con respecto al alérgeno en su forma nativa 3. Incrementan su captación por células dendríticas con respecto al alérgeno en su forma nativa
33 Investigación y Desarrollo Proyecto CDTI (IDI ) : Desarrollo de nuevas vacunas para el tratamiento de la alergia a gramíneas y ácaros SEVENTH FRAMEWORK PROGRAMME: FP7-SME ; Research for SMEs ViscoGel - A chitosan based adjuvant for prophylactic and therapeutic vaccination Inmunotek: Bárbara Cases Jose Ignacio Tudela Eva Fernandez Enrique Fernández Caldas Facultad de Medicina (UCM): Pedro Reche Carmen Rodriguez Facultad de Quimicas (UCM): Oscar Palomares Hospital Clinico San Carlos: Irene Soria Jose L. Subiza
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