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1 SUPPORTING INFORMATION Branimycins B and C, antibiotics produced by the abyssal actinobacterium Pseudonocardia carboxydivorans M-227 Alfredo F. Braña, Aida Sarmiento-Vizcaíno, Ignacio Pérez-Victoria, Luis Otero, Jonathan Fernández, Juan José Palacios, Jesús Martín, Mercedes de la Cruz, Caridad Díaz, Francisca Vicente, Fernando Reyes, *, Luis A. García, and Gloria Blanco *, Departamento de Biología Funcional, Área de Microbiología, e Instituto Universitario de Oncología del Principado de Asturias. Universidad de Oviedo, Oviedo, Spain Fundación MEDINA, Centro de Excelencia en Investigación de Medicamentos Innovadores en Andalucía, Avda. del Conocimiento 34, Parque Tecnológico de Ciencias de la Salud, E-18016, Granada, Spain Servicio de Microbiología Hospital de Cabueñes, Gijón, Spain Servicio de Microbiología. Hospital Universitario Central de Asturias (HUCA), Oviedo, Spain Departamento de Ingeniería Química y Tecnología del Medio Ambiente. Área de Ingeniería Química, Universidad de Oviedo, Oviedo, Spain Corresponding Authors *F. Reyes, fernando.reyes@medinaandalucia.es, Tel *G. Blanco, gbb@uniovi.es, Tel.:

2 Supporting Information Contents Figure S1. 1 H NMR spectrum (CDCl3, 500 MHz) of branimycin B (2). Figure S2. 13 C NMR spectrum (CDCl3, 125 MHz) of branimycin B (2). Figure S3. COSY spectrum of branimycin B (2). Figure S4. HSQC spectrum of branimycin B (2). Figure S5. HMBC spectrum of branimycin B (2). Figure S6. NOESY spectrum branimycin B (2). Figure S7. ESI-TOF spectrum of branimycin B (2). Figure S8. UV/vis (DAD) spectrum of branimycin B (2). Figure S9. 1 H NMR spectrum (CDCl3, 500 MHz) of branimycin C (3). Figure S C NMR spectrum (CDCl3, 125 MHz) of branimycin C (3). Figure S11. COSY spectrum of branimycin C (3). Figure S12. HSQC spectrum of branimycin C (3). Figure S13. HMBC spectrum of branimycin C (3). Figure S14. NOESY spectrum branimycin C (3). Figure S15. ESI-TOF spectrum of branimycin C (3). Figure S16. UV/vis (DAD) spectrum of branimycin C (3). Figure S17. Figure S18. Table S19. Pictures of the producing microorganism. Phylogenetic analysis of strain Pseudonocardia carboxydivorans M-227. Description of clinic microbial pathogens tested.

3 Figure S1. 1 H NMR spectrum (CDCl 3, 500 MHz) of branimycin B (2) Figure S2. 13 C NMR spectrum (CDCl 3, 125 MHz) of branimycin B (2).

4 F1 Chemical Shift (ppm) F2 Chemical Shift (ppm) Figure S3. COSY spectrum of branimycin B (2).

5 F2 Chemical Shift (ppm) Figure S4. HSQC spectrum of branimycin B (2).

6 F2 Chemical Shift (ppm) Figure S5. HMBC spectrum of branimycin B (2).

7 F2 Chemical Shift (ppm) Figure S6. NOESY spectrum of branimycin B (2).

8 Intens. x MS, 1.08min # m/z Calc. M+H + = ; Error=-0.6ppm Calc. M+NH 4+ = ; Error=1.3ppm Figure S7. ESI-TOF spectrum of branimycin B (2) Wavelength [nm] Intens. UV, 1.08min #260, [mau] Figure S8. UV/vis (DAD) spectrum of branimycin B (2).

9 Figure S9. 1 H NMR Spectrum (CDCl 3, 500 MHz) of branimycin C (3) Figure S C NMR Spectrum (CDCl 3, 125 MHz) of branimycin C (3).

10 F1 Chemical Shift (ppm) F2 Chemical Shift (ppm) Figure S11. COSY spectrum of branimycin C (3).

11 F2 Chemical Shift (ppm) Figure S12. HSQC spectrum of branimycin C (3).

12 F2 Chemical Shift (ppm) Figure S13. HMBC spectrum of branimycin C (3).

13 F2 Chemical Shift (ppm) Figure S14. NOESY spectrum of branimycin C (3).

14 Intens. x MS, 1.40min # m/z Calc. M+H + = ; Error=0.2ppm Calc. M+NH 4+ = ; Error=3.2ppm Figure S15. ESI-TOF spectrum of branimycin C (3) Wavelength [nm] Intens. UV, 1.40min #354, [mau] Figure S16. UV/vis (DAD) spectrum of branimycin C (3).

15 Figure S17. Pictures of Pseudonocardia carboxydivorans M-227 in culture.

16 Pseudonocardia kongjuensis Pseudonocardia antarctica Pseudonocardia nitrificans Pseudonocardia antitumoralis Pseudonocardia compacta Pseudonocardia carboxydivorans M-227 (LN824219) Pseudonocardia carboxydivorans M-227 Pseudonocardia alni DSM (NR_117429) DSM Pseudonocardia alni Pseudonocardia nitrificans PI33 (KP338818) Pseudonocardia antitumoralis SCSIO (JN204514) Pseudonocardia compacta IMSNU 20111T (AJ252825) Pseudonocardia antarctica (JN180177) Pseudonocardia kongjuensis OAct415 (KC514123) Pseudonocardia ammonioxydans H9 (AY500143) Pseudonocardia ammonioxydans Pseudonocardia tropica YIM (NR_104541) Pseudonocardia tropica Pseudonocardia autotrophica (AJ252824) Pseudonocardia autotrophica Figure S18. Phylogenetic analysis of strain Pseudonocardia carboxydivorans M-227.

17 Table S19. Description of clinic microbial pathogens tested. Clinic pathogen Isolate Hospital Year Antibiotic resistances Gram-positives Mycobacterium tuberculosis H37Rv ATCC Mycobacterium tuberculosis MDR SNRL-Spain 2013 Multiresistance a Mycobacterium tuberculosis MDR SNRL-Spain 2013 Multiresistance b Clostridium perfringens * HUCA Corynebacterium urealyticum 1492* Cabueñes 2014 Multiresistance c Enterococcus faecalis Cabueñes 2015 Ery, clin, tet Enterococcus faecalis ATCC Enterococcus faecalis ATCC Enterococcus faecium Cabueñes 2015 Amp, quin, ery Micrococcus luteus ATCC Streptococcus pneumoniae 64412* HUCA 2013 Ery Streptococcus pyogenes 81293* HUCA Staphylococcus aureus Cabueñes 2015 Methicillin Staphylococcus aureus ATCC Methicillin Staphylococcus aureus MB5393 Methicillin Staphylococcus aureus MB Staphylococcus aureus ATCC 6538P - Staphylococcus aureus ATCC Gram-negatives Acinetobacter baumannii MB Bacteroides fragilis 61592* HUCA 2013 Amo, tet Bacteroides fragilis ATCC Escherichia coli MB Escherichia coli ESS - Haemophilus influenzae Cabueñes 2015 Amp, cot, quin Haemophilus influenzae ATCC Klebsiella pneumoniae ATCC Neisseria meningitidis HUCA 2013 Clin Pseudomonas aeruginosa PAO1 - Amk: amikacin; amo: amoxicillin; amp: ampicillin; cap: capreomycin; cip: ciprofloxacin; clav: clavulanic acid; clin: clindamycin; cot: cotrimoxazole; emb: ethambutol; ery: erythromycin; fos: fosfomycin; inh: isoniazid; kan: kanamycin; nitro: nitrofurantoin; quin: quinolones; rif: rifampicin; str: streptomycin; tet: tetracycline a Inh, rif, emb b Inh, rif, emb, str, amk, kan, cap c Amp, amo/clav, ery, cot, cip, fos, nitro

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