Programa Nacional Salud Aviar. Protocolo de vigilancia epidemiológica de Laringotraqueitis infecciosa aviar en aves reproductoras de exportación.

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1 Versión 06 Página 1 de 26 CONTENIDO CONTENIDO INTRODUCCION ANTECEDENTES JUSTIFICACION EJECUTORES DEL PROGRAMA Elaboración del protocolo de vigilancia Recepción de denuncias de casos sospechosos por LTI Investigación y seguimiento de casos sospechosos con LTI (vigilancia pasiva) Toma de Muestras Diagnóstico Laboratorial Seguimiento de casos probables Seguimiento de casos positivos ALCANCE COBERTURA DEL PROGRAMA OBJETIVOS Objetivo general Objetivos específicos ENFERMEDAD A VIGILAR Nombre de la enfermedad Historia natural de la enfermedad Agente etiológico Huéspedes, vectores, reservorios y vías de transmisión... 13

2 Versión 06 Página 2 de Mecanismos de transmisión DEFINICION DE CASO Caso sospechoso Caso probable Caso positivo (caso confirmado) Caso negativo ESTRATEGIAS PARA LA VIGILANCIA Y SEGUIMIENTO EPIDEMIOLOGICO Bases legales y reglamentarias Sistema de información y notificación Reporte de denuncias de casos de enfermedades respiratorias: Investigación y seguimiento de casos sospechosos de LTI: Investigación y seguimiento de casos probables de LTI: Seguimiento de casos positivos de LTI: Toma y remisión de muestras al Laboratorio: Registro en el Sistema de Vigilancia Epidemiológica: Error! Marcador no definido. 9.3 Diseminación de la información Entrega de Resultados: Informes de seguimiento de casos positivos VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA VIGILANCIA ACTIVA Tamaño de la muestra de la Vigilancia Activa Frecuencia de muestreo para la Vigilancia Activa VIGILANCIA PASIVA (sistema de alerta inmediata)... 18

3 Versión 06 Página 3 de DIAGNOSTICO LABORATORIAL Lista de laboratorios Muestras para análisis Recolección de muestras en la vigilancia de rutina Recolección de muestras para la confirmación de casos probables Recolección de muestras en la vigilancia pasiva Empaque y envío de muestras: Pruebas de laboratorio Pruebas de tamizaje Prueba de diagnóstico Prueba de confirmación Pruebas presuntivas ACTIVIDADES DE CONTROL CAPACITACION Capacitación al sector oficial: Capacitación al sector productivo: EVALUACION Y SEGUIMIENTO DEFINICIONES ACRONIMOS BIBLIOGRAFÍA DOCUMENTOS COMPLEMENTARIOS... 26

4 Versión 06 Página 4 de 26 1 INTRODUCCION El comercio internacional de animales, productos y subproductos de origen animal implica una responsabilidad ética permanente. Este depende desde el punto de vista sanitario, de un conjunto de factores que es preciso reunir para asegurar su fluidez, sin que ello implique riesgos inaceptables para la salud pública y la salud animal. Para obtener la mayor armonización posible en los aspectos zoosanitarios del comercio internacional, los servicios veterinarios oficiales deben basarse en las normas, directrices y recomendaciones de la OIE. Considerando las recomendaciones de la OIE en materia de requisitos mínimos de exportación para productos avícolas, el muestreo de la Laringotraqueitis infecciosa aviar (LTI) se orientará exclusivamente a las granjas que exporten aves vivas y huevos fértiles, según lo estipulado en el código zoosanitario para los animales terrestres y de esta forma facilitar el comercio internacional de productos avícolas, así como establecer los lineamientos para la prevención y control de LTI según la situación identificada. 2 ANTECEDENTES En junio del 2006 se detectó un brote de LTI en Costa Rica y a partir de ese evento, se realizaron trabajos de seguimiento y vigilancia de la enfermedad, así como la aplicación de medidas de control. Que como producto de las actividades de monitoreo realizadas, se detectó un nuevo caso en el 2007 en la zona de Turrúcares. Dada esta situación en el año 2008, se estableció la Directriz Senasa Nº DG-D creando un programa de vacunación contra Laringotraqueitis infecciosa aviar como complemento a otras medidas aplicadas, para controlar y prevenir la enfermedad en las explotaciones avícolas de Costa Rica. 3 JUSTIFICACION La avicultura constituye una de las actividades más relevantes para la economía costarricense, lo que se evidencia con el aporte de 0.73% del producto interno bruto (PIB), con un valor agregado del 10.9% de las actividades primarias del sector agropecuario (8.2% pollo y 2.7% huevo, según el Boletín Estadístico Agropecuario N 24 de la Secretaría Ejecutiva de Planificación sectorial Agropecuaria, serie cronológica ), generando empleo directo para personas y empleo indirecto para personas. El valor aproximado de la industria avícola es de $

5 Versión 06 Página 5 de 26 La industria avícola se compone de una integración vertical de sus procesos productivos, en alguna de las siguientes maneras: Reproductoras livianas + huevo fértil + incubadora + pollita ponedora + gallinas ponedoras + huevo comercial + huevo líquido. Reproductoras pesadas + huevo fértil + incubadora + pollo de engorde + procesamiento de aves + proceso posterior + aprovechamiento subproductos. La actividad avícola (carne y huevo) representa un rubro importante entre las principales actividades pecuarias de nuestro país, con una producción reportada en el año 2013 de toneladas métricas en carne y toneladas métricas en huevo. El pollo de engorde es producido por un número importante de productores, integrados a las cinco principales empresas avícolas, quienes producen aproximadamente más del 90% de pollo en pie. La producción de pollo de engorde es de unidades por año, para una producción anual de carne de pollo de toneladas métricas y un consumo per cápita de 23 kilos. El valor de la producción de carne de pollo es de $ La producción de huevos es de aproximadamente unidades diarias, para un consumo per cápita de 200 huevos. Este sector está compuesto por una gran variedad de productores, que van desde los pequeños e independientes que venden su producto a nivel local, a productores medianos y grandes, que pueden ser independientes o integrados a una

6 Versión 06 Página 6 de 26 empresa avícola, con mayor capacidad de comercializar su producto a nivel nacional. El valor de la producción de huevo comercial es de aproximadamente $ El censo agropecuario del 2014 del INEC estableció que Costa Rica cuenta con una población total de más de 18 millones de aves de corral, de las cuales existe una importante población avícola de traspatio estimada en aves, principalmente en las zonas rurales, cuyos productos (huevo y carne) sirven como unas de las principales fuentes de proteína animal en la dieta. La avicultura consolida la seguridad alimentaria que como país debe garantizarse, aportando productos de calidad con alto contenido proteínico, a bajo costo para las familias costarricenses, haciéndolos accesibles a la dieta alimenticia de aproximadamente habitantes.

7 Versión 06 Página 7 de 26 En los últimos años se ha dado un incremento en las exportaciones de productos avícolas costarricenses, principalmente en la exportación de huevo fértil, con una participación del 6,8% en el valor de los principales productos exportados del sector agropecuario para el año 2013 y con una tendencia a incrementarse para el año Para certificar las exportaciones, se requiere establecer una vigilancia de la enfermedad Laringotraqueitis infecciosa aviar en granjas reproductoras de exportación, que proveen el huevo fértil exportable o de los cuales se obtienen las aves vivas que se exportan. 4 EJECUTORES DEL PROGRAMA En la tabla N 1 se resume el responsable de ejecución según la actividad involucrada.

8 Versión 06 Página 8 de 26 Tabla Nº 1 Ejecutores del programa según actividad y responsable de la ejecución ACTIVIDAD 1. Elaboración y actualización del protocolo de vigilancia de la enfermedad de Laringotraqueitis infecciosa aviar (LTI) 2. Reporte de denuncias de casos sospechosos con sintomatología respiratoria compatible con LTI. 3. Investigación y seguimiento de casos sospechosos de LTI (Vigilancia Pasiva). RESPONSABLE DE EJECUSION Programa Nacional de Salud Aviar y el Departamento de Epidemiología Médicos Veterinarios Oficializados de granjas reproductoras de exportación. Direcciones Regionales, Programa Nacional de Salud Aviar y Médicos Veterinarios Oficializados. 4. Toma de muestras Vigilancia activa: Médicos Veterinarios Oficializados en el Programa Nacional de Salud Aviar de granjas avícolas destinados a la exportación. Técnicos en salud animal a cargo del médico veterinario oficializado de la granja. Vigilancia pasiva: Médicos Veterinarios Oficiales Médicos Veterinarios Oficializados en el Programa Nacional de Salud Aviar. Técnicos del SENASA. Técnicos en salud animal. Técnicos en salud animal a cargo del médico veterinario oficializado de la granja. 5. Diagnóstico de Laboratorio Vigilancia activa: Laboratorio de Virología de la Escuela de medicina Veterinaria de la U.N.A. Vigilancia pasiva: Laboratorio Nacional de Servicios Veterinarios LANASEVE y en Laboratorio de Virología de la Escuela de Medicina Veterinaria de la U.N.A.

9 Versión 06 Página 9 de Seguimiento de casos probables de la vigilancia activa. Confirmación de casos probables: Laboratorio Nacional de Servicios Veterinarios LANASEVE. Médicos Veterinarios Oficiales, Programa Nacional de Salud Aviar y los Veterinarios Oficializados en el Programa Nacional de Salud Aviar. 7. Seguimiento de casos positivos. Director SENASA, Coordinador PNSA, Departamento de Epidemiología, Dirección de Operaciones, Direcciones Regionales. 4.1 Elaboración del protocolo de vigilancia Es responsabilidad del Coordinador del Programa Nacional de Salud Aviar junto con el Jefe del Departamento de Epidemiología, revisar y actualizar de ser necesario este protocolo cada año, después de la Asamblea General de la OIE o cuando por cambios en el estatus sanitario o cambios en la epidemiología de la enfermedad así lo requieran. 4.2 Reporte de denuncias de casos sospechosos por LTI Es responsabilidad de los Médicos Veterinarios Oficializados, reportar al SENASA las denuncias de los casos con sintomatología sospechosa con la enfermedad de Laringotraqueitis infecciosa mediante el Registro de Denuncias Sanitarias (anexo 1). 4.3 Investigación y seguimiento de casos sospechosos con LTI (vigilancia pasiva) El Médico Veterinario durante la visita para la investigación y atención del caso, debe proceder a realizar el examen clínico de las aves y tomar las muestras indicadas en el numeral 10.2 (Vigilancia Pasiva) del presente protocolo. 4.4 Toma de Muestras En la vigilancia activa y pasiva de las granjas de reproductoras destinadas a la exportación, será responsabilidad de los Médicos Veterinarios Oficializados en el Programa Nacional de Salud Aviar, la toma de las muestras y su envío al laboratorio de diagnóstico. Para esto puede apoyarse en técnicos en salud animal que estén bajo su cargo. Para la toma de muestras se utilizará el Instructivo para la Toma y Envió de Muestras (Anexo 5).

10 Versión 06 Página 10 de Diagnóstico Laboratorial Es responsabilidad del Laboratorio de Virología de la Escuela de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional (EMV) y del Laboratorio Nacional de Servicios Veterinarios LANASEVE, recibir las muestras según corresponda y asignarles un número de identificación (protocolo) para su procesamiento lo más pronto posible. Tanto el laboratorio de virología de la EMV así como el LANASEVE, deben reportar a la Dirección General, al coordinador del PNSA y al Departamento de Epidemiología, los casos de LTI diagnosticados. 4.6 Seguimiento de casos probables. Durante la vigilancia activa, al presentarse un caso probable el SENASA deberá realizar la inspección in situ, para verificar el estado clínico de las aves y la existencia de signos y síntomas compatibles con LTI. Si las aves presentan sintomatología compatible con LTI y califica como un caso sospechoso, deben establecer las medidas sanitarias y de cuarentena impuestas y notificarlas al Médico Veterinario y al titular o propietario de la granja. La toma de muestras para la confirmación de los casos probables podrá ser tomada por el Médico Veterinario Oficial o por el Veterinario Oficializado del establecimiento y deben ser remitidas al LANASEVE. Durante la visita el Médico Veterinario Oficial deberá seguir los lineamientos establecidos en el procedimiento UE-PG-004 Vigilancia Pasiva en Campo (anexo 3) y completar los formularios: Hoja de Visita (anexo 2) y el Registro de Información sobre Episodios de Enfermedades Agudas (EA1) (anexo 4). Es responsabilidad del Médico Veterinario Oficial que realizó la visita, incorporar los datos al sistema oficial de vigilancia epidemiológica vigente (SIVE) y al Sistema Integrado de gestión (SINGES). 4.7 Seguimiento de casos positivos. Cuando un caso sospechoso o probable es reportado por el laboratorio, como un caso positivo a la LTI, el Médico Veterinario Oficial y el Oficializado responsables del caso, deben verificar el cumplimiento de las medidas cuarentenarias instauradas.

11 Versión 06 Página 11 de 26 5 ALCANCE 5.1 COBERTURA DEL PROGRAMA La LTI es una enfermedad de control particular en Costa Rica. Por tal motivo el programa de vigilancia está dirigido a granjas reproductoras destinadas a la exportación, de las que se exporten sus huevos fértiles o aves vivas. 6 OBJETIVOS 6.1 Objetivo general Establecer las directrices para la vigilancia epidemiológica de la enfermedad de LTI en granjas reproductoras de exportación, cuyos huevos fértiles y aves vivas sean destinados a la exportación, con el fin de demostrar la ausencia de esta enfermedad. 6.2 Objetivos específicos Mantener abiertos los mercados internacionales para el huevo fértil y aves vivas de origen costarricense. Capacitar y concienciar a todos los actores involucradas en ejecutar el presente protocolo, para lograr la implementación efectiva del mismo. 7 ENFERMEDAD A VIGILAR 7.1 Nombre de la enfermedad Laringotraqueitis infecciosa aviar 7.2 Historia natural de la enfermedad La enfermedad fue descrita por primera vez en 1925, pero algunos reportes indican que pudo haber existido anteriormente. Se le ha denominado como laringotraqueitis, laringotraqueitis infecciosa y difteria aviar. Beaudette fue el primero en demostrar que el agente causal era un virus filtrable y esta fue la primera enfermedad importante en avicultura, para la cual fue desarrollada una vacuna (2). 7.3 Agente etiológico La laringotraqueitis infecciosa aviar es una enfermedad respiratoria de los pollos causada por un alphaherpersvirus. Las principales características de la enfermedad en su forma

12 Versión 06 Página 12 de 26 virulenta son la historia, los signos clínicos y las lesiones traqueales severas, pero en la forma leve puede no distinguirse de otras enfermedades respiratorias leves. El diagnóstico del laboratorio depende de la detección de la presencia del virus, de antígenos víricos o de anticuerpos específicos en el suero (4). El sistema respiratorio es el blanco de la infección y la enfermedad. El epitelio de tráquea y laringe siempre es afectado, mientras que la conjuntiva, los senos respiratorios, los sacos aéreos y los pulmones se pueden ver infectados periódicamente. La replicación más activa del virus ocurre en la tráquea (1). Desde el punto de vista clínico, la enfermedad puede aparecer en tres formas: hiperaguda, subaguda y crónica o leve. En la forma hiperaguda, el comienzo de la enfermedad es repentino con una propagación rápida. La morbilidad es alta y la mortalidad puede exceder el 50%. Algunas aves pueden morir en buenas condiciones corporales antes de la aparición de signos que son característicos y que conllevan dificultad en la respiración, con extensión del cuello y jadeos en un intento por respirar. También se producen gorgoteos, crepitaciones y tos cuando las aves tratan de expulsar las obstrucciones de la tráquea. La tos puede producir expulsión de coágulos de sangre que pueden encontrarse en el suelo y en las paredes de la casa. Son también característicos los cambios post mortem, que están limitados al tracto respiratorio superior y consisten en traqueítis hemorrágica con coágulos de sangre, rinitis mucoide y mocos manchados de sangre a lo largo de la tráquea. En la forma subaguda, el comienzo de la enfermedad es lento, y los signos respiratorios se pueden extender durante algunos días antes de que se produzcan las muertes. La morbilidad es alta pero la mortalidad es menor que la de la forma hiperaguda, entre un 10% y un 30%. Las hallazgos post mortem son menos severos y consisten en exudado mucoide con o sin sangre en la tráquea. Se pueden encontrar membranas diftéricas caseosas amarillas adheridas a la laringe y a la mucosa traqueal superior. Se puede observar la forma crónica o leve de la LTI entre los supervivientes de cualquiera de las formas de la enfermedad mencionadas anteriormente, aunque algunos de los focos pueden ser muy leves. La incidencia de la LTI crónica dentro de una bandada puede ser de sólo un 1 2%, y la mayoría de las aves afectadas mueren asfixiadas. Los signos son espasmos de tos y jadeos con descargas nasales y orales y disminución de la producción de huevos. En el examen post mortem, se encuentran placas y tapones necróticos, caseosos y difteríticos en la tráquea, laringe y boca. Los brotes de la forma leve de LTI pueden afectar a gran número de aves de forma simultánea, en cuyo caso la mayor parte de las lesiones pueden consistir tan sólo en conjuntivitis, sinusitis y traqueítis mucoide. Dado que la transmisión de LTI tiene lugar por contacto directo, la transmisión es más lenta en las

13 Versión 06 Página 13 de 26 baterías de cría que cuando las aves no están enjauladas, y la ruta de infección puede ser visible cuando se utilizan baterías de cría (4). La replicación activa del virus de LTI ocurre durante la primera semana posterior a la infección, aunque se pueden detectar de forma esporádica, bajos niveles de infectividad, hasta 10 días después de la infección (1). Por lo general, las gallinas se recuperan de la enfermedad primaria, a los 7 a 10 días posteriores a la aparición de los signos clínicos. La excreción viral puede cesar entre los 10 días, hasta aproximadamente las cuatro semanas posteriores a la infección traqueal, estableciéndose una fase latente de la infección a través de tejido nervioso, particularmente por invasión del virus al ganglio trigémino (1). Es importante entender que el establecimiento de infecciones latentes es común en los herpesvirus, es el mecanismo biológico de sobrevivencia que, en el caso de LTI, le permite al virus evadir la respuesta inmune del huésped y persistir en las parvadas. Las infecciones latentes con el virus de LTI no son demostrables durante los primeros meses posteriores a la infección, probablemente como resultado de una respuesta inmune elevada por parte del huésped. La reactivación esporádica de la infección con bajos niveles de excreción viral en tráquea se presenta a lo largo de la vida del ave portadora. La reactivación de infecciones latentes se ha asociado con el estrés causado por el inicio de la postura o la mezcla con aves desconocidas. En tales situaciones, el ave latentemente infectada actúa como reservorio de la infección y favorece la infección de aves susceptibles. Se ha demostrado que para el diagnóstico, tratándose de muestras clínicas, la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es más sensible que el aislamiento del virus, especialmente, cuando están presentes otros virus contaminantes tales como adenovirus. Alexander & Nagy encontraron que, desde la fase media hasta la fase final de la infección, el PCR y el aislamiento del virus eran similares en sensibilidad, pero el PCR fue superior en la fase de recuperación (4). 7.4 Huéspedes, vectores, reservorios y vías de transmisión La Laringotraqueitis Infecciosa Aviar es una enfermedad de las aves distribuida mundialmente cuya especie hospedera primaria es Gallus gallus (gallinas). No se conoce otro reservorio de la enfermedad, pero se sabe que otras especies aviares como faisanes, perdices y pavos pueden adquirir la infección a partir de gallinas en período activo de excreción viral.

14 Versión 06 Página 14 de 26 La mayor incidencia de la LTI se observa en áreas de producción avícola altamente intensiva. Brotes serios de la enfermedad ocurren periódicamente debido al paso del virus de parvadas persistentemente infectadas a parvadas no vacunadas. Existen vacunas que contienen virus vivo modificado y pueden provocar infecciones latentes y hasta enfermedad, lo cual, junto con prácticas irregulares de vacunación o vacunación de emergencia en algunos países, hace que el estado de la enfermedad sea desconocido. En consecuencia se debe prestar especial atención a la determinación del estado de la enfermedad y la vacunación cuando se trasladan animales tanto dentro de un país, así como internacionalmente (5). También se han desarrollado vacunas recombinantes o vectorizadas, utilizando el virus de viruela o el de Marek como vectores de fracciones antigénicas del virus de LTI, brindando una protección adecuada y sin representar un riesgo para la transmisión de la enfermedad. Las fuentes de infección de LTI son: a. las aves clínicamente enfermas, b. las aves portadoras latentes y c. los fómites y personal de granjas contaminados. 7.5 Mecanismos de transmisión El virus de LTI se transmite por contacto directo con exudados respiratorios expectorados o aerosoles. La infección ocurre a través de las vías respiratorias altas y los ojos. No existe evidencia de la transmisión de LTI a través de huevos, ni de la dispersión del virus de LTI en la cáscara de huevos procedentes de gallinas infectadas (1). 8 DEFINICION DE CASO 8.1 Caso sospechoso Aves de corral con enfermedad clínica que requieran la aplicación de un tratamiento terapéutico veterinario por presentar cualquiera de los siguientes síntomas de enfermedad respiratoria asociados a la LTI: sonidos respiratorios, ojos llorosos, secreciones nasales, estertores húmedos, estornudos, jadeo o ahogo, conjuntivitis hemorrágica, senos infraorbitarios hinchados, marcada disnea, expectoración de moco sanguinolento, disminución en la producción de huevo y aumento de la mortalidad asociado a los signos respiratorios citados.

15 Versión 06 Página 15 de Caso probable Se define como caso probable cuando se presenta un primer resultado de PCR positivo en tráqueas o hisopados de tráqueas de aves que no presentan signos, síntomas o alteraciones de los parámetros zootécnicos, compatible con la enfermedad causada por LTI. 8.3 Caso positivo (caso confirmado) Casos sospechosos donde se confirme la presencia del virus de la Laringotraqueitis infecciosa aviar, mediante la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Y QUE ADEMAS en la secuenciación del virus, presentan un resultado positivo al virus de LTI, o Casos sospechosos con evidencia histopatológica de inclusiones intranucleares en las células epiteliales de tráqueas (típicas inclusiones del herpesvirus denominadas tipo A Cowdry). Casos probables que presenten otro resultado positivo de PCR en las muestras tomadas para la confirmación del caso Y QUE ADEMAS en la secuenciación del virus, presentan un resultado positivo al virus patógeno de LTI de campo (no vacunal). 8.4 Caso negativo Son aquellos casos sospechosos o casos probables que no pudieron ser confirmados, mediante las pruebas de laboratorio designadas como pruebas confirmatorias. 9 ESTRATEGIAS PARA LA VIGILANCIA Y SEGUIMIENTO EPIDEMIOLOGICO 9.1 Bases legales y reglamentarias Competencia para aplicar medidas sanitarias sobre la actividad comercial: El Acuerdo sobre la Aplicación de Medidas Sanitarias y Fitosanitarias aprobado por Ley Nº. 7475, publicada en el Diario Oficial La Gaceta Nº. 245, del 26 de diciembre de 1994, reconoce la potestad del Estado costarricense de adoptar las medidas necesarias para proteger la salud de sus habitantes y la de sus animales, entre otras. En igual sentido, la Ley de Ejecución de los Acuerdos de la Ronda Uruguay de Negociaciones Multilaterales Nº publicado en el Diario Oficial La Gaceta N 246 del 27 de Diciembre de 1994, en su artículo 8, establece que corresponderá a los Ministerios de Salud y de Agricultura y Ganadería aplicar lo concerniente a las medidas sanitarias y fitosanitarias que incidan directa e indirectamente en el comercio.

16 Versión 06 Página 16 de 26 Aplicación Obligatoria de Medidas Sanitarias: La Ley General del Servicio Nacional de Salud Animal, creado mediante la Ley N 8495, publicada en el Diario Oficial La Gaceta N 93 del 16 de mayo de 2006, regula lo relativo a la aplicación de medidas sanitarias de prevención y control de las enfermedades. En éste sentido, declara de interés público y de aplicación obligatoria, las medidas sanitarias establecidas en la ley y todas aquellas que promueven el mejoramiento de la producción animal y su directa repercusión en la salud del hombre. Designa al Servicio Nacional De Salud Animal del Ministerio de Agricultura y Ganadería como la responsable de la ejecución de tales medidas. La declaración obligatoria de la enfermedad: El Decreto Ejecutivo No MAG, publicado en la Gaceta Nº 156 del 13 de Agosto del 2008, listado de enfermedades animales de declaración obligatoria, establece la enfermedad de LTI dentro de la lista de enfermedades de declaración obligatoria contenida en el numeral 5 del Reglamento de Defensa Sanitaria Animal (Decreto Ejecutivo No de 16 de mayo de 1983). Reglamento de la Estructura Organizativa del Servicio Nacional de Salud Animal: El Decreto Ejecutivo N MAG, publicado en el Diario Oficial La Gaceta N 177 del 16 de setiembre del 2013, establece la estructura organizativa del Servicio Nacional de Salud Animal (SENASA) y crea los Programas Nacionales para el mejor cumplimiento de las competencias y funciones encomendadas por La Ley General del Servicio Nacional de Salud Animal, creado mediante la Ley N 8495, publicada en el Diario Oficial La Gaceta N 93 del 16 de mayo de Sistema de información y notificación Reporte de denuncias de casos sospechosos de LTI: Es responsabilidad de los Médicos Veterinarios Oficializados, reportar al SENASA las denuncias de los casos con sintomatología sospechosa con la enfermedad de Laringotraqueitis infecciosa mediante el Registro de Denuncias Sanitarias (anexo 1) Investigación y seguimiento de casos sospechosos de LTI: El Médico Veterinario Oficializado deberá comunicar y coordinar con el Médico Veterinario Oficial el seguimiento de los casos sospechosos, dejando por escrito en la granja las medidas sanitarias y de cuarentena impuestas en su hoja de visita Investigación y seguimiento de casos probables de LTI: El veterinario oficializado deberá coordinar con el veterinario oficial el seguimiento del caso para verificar el estado clínico de las aves y la toma de muestras de confirmación para los casos probables reportados por el laboratorio.

17 Versión 06 Página 17 de 26 Cuando el veterinario atiende el caso probable para tomar las muestras de confirmación, deberá completar la información correspondiente en el sistema oficial de vigilancia epidemiológica vigente (SIVE) para el ingreso de las muestras de confirmación en el LANASEVE. Cuando el Médico Veterinario Oficial atiende el caso probable, deberá utilizar los formularios: Hoja de Visita (anexo 2) y el Registro de Información sobre Episodios de Enfermedades Agudas (EA1) (anexo 4). Es responsabilidad del Médico Veterinario Oficial que realizó la visita, incorporar los datos de la visita al Sistema Integrado de gestión (SINGES) Seguimiento de casos positivos de LTI: Al atender un caso positivo a LTI, el Médico Veterinario Oficial deberá utilizar los formularios: Hoja de Visita (anexo 2) y Registro de Información sobre Episodios de Enfermedades Agudas (EA1) (anexo 4) Toma y remisión de muestras al Laboratorio: Las muestras son enviadas al Laboratorio de Virología de la EMV o LANASEVE según corresponda, donde les será asignado un número de protocolo. Para el envío de las muestras al LANASEVE, se debe completar el registro Recepción de muestras para diagnóstico en el SIVE. 9.3 Diseminación de la información Entrega de Resultados: El laboratorio de virología de la Escuela de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional (EMV), entregará los resultados de la vigilancia de LTI al Veterinario Oficializado. Estos resultados deben estar archivados en la granja para cuando se realicen las auditorías de bioseguridad. La EMV también entregará copia de los resultados a la Dirección General del SENASA, al Jefe del Departamento de Epidemiología y al Coordinador del PNSA. Cuando haya evidencia de un resultado de PCR positivo, la EMV dará aviso de forma inmediata a al veterinario responsable del establecimiento y al Coordinador del PNSA o al Jefe del Departamento de Epidemiología del SENASA. De resultar un caso positivo, el LANASEVE, comunica al Coordinador del Programa Nacional de Salud Aviar y al jefe del Departamento de Epidemiología.

18 Versión 06 Página 18 de Informes de seguimiento de casos positivos. El Coordinador del Programa Nacional de Salud Aviar elaborará el informe de investigación y seguimiento de los casos positivos de LTI. 10 VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA 10.1 VIGILANCIA ACTIVA Tamaño de la muestra de la Vigilancia Activa Siguiendo las recomendaciones del Comité Técnico Regional de Salud Aviar del OIRSA, reunido en Puntarenas Costa Rica en diciembre del 2001, se decide que la muestra se deberá calcular asumiendo una prevalencia del 10% y un nivel de confianza del 95%, lo que da una muestra de treinta muestras (Canon y Roe, 1982). El cálculo se basa en la detección de la enfermedad Frecuencia de muestreo para la Vigilancia Activa. En las unidades epidemiológicas exclusivas de levante se hará 1 muestreo cuando las aves alcancen una edad entre las 8 a las 12 semanas. En las unidades epidemiológicas de producción de 1 sola edad, se hará un muestreo cada 4 meses. En las unidades epidemiológicas multiedad, se hará un muestreo cada 4 meses VIGILANCIA PASIVA (sistema de alerta inmediata) Los trabajadores de las granjas, los profesionales y en general los propietarios de aves, recibirán capacitación para identificar cualquier sospecha de enfermedad y deberán reportar los casos sospechosos con la LTI al SENASA, en cumplimiento del Decreto Ejecutivo No MAG Listado de enfermedades animales de declaración obligatoria. Todos los casos sospechosos de las granjas de reproductoras de exportación deberán ser muestreadas para realizar el diagnóstico de Influenza aviar, enfermedad de Newcastle y Laringotraqueitis infecciosa aviar. Todos los casos serán documentados incluyendo los resultados de las pruebas de laboratorio así como las medidas de control implementadas.

19 Versión 06 Página 19 de DIAGNOSTICO LABORATORIAL 11.1 Lista de laboratorios El laboratorio de Virología de la Escuela de Medicina Veterinaria de la UNA, realizará el diagnóstico de las muestras de rutina de la vigilancia activa de las granjas reproductoras de exportación. El LANASEVE realizará el diagnóstico para la atención de los casos sospechosos de la enfermedad (vigilancia pasiva) así como los diagnósticos para la confirmación de los casos probables Muestras para análisis Recolección de muestras en la vigilancia de rutina. Para la vigilancia activa en granjas reproductoras de exportación, las muestras de elección serán los hisopados traqueales o las tráqueas. Se tomarán muestras de 30 aves por unidad epidemiológica y se enviarán al Laboratorio de Virología de la Escuela de Medicina Veterinaria. De las 30 muestras se harán 3 pooles para correr las pruebas de PCR (3 pooles de 10 muestras cada uno). Las muestras se deberán conservar en un recipiente o bolsa limpia y enviar en refrigeración dentro de las siguientes 24 horas al Laboratorio de Virología de la Escuela de Medicina Veterinaria, para que le realicen la prueba de PCR. En caso de no poder entregar el material el mismo día del muestreo, debe de conservarse en congelación hasta su entrega al laboratorio. La cantidad de muestras a tomar por lote presente en las unidades epidemiológicas multiedades será el siguiente: Muestreo cada 4 meses # Lotes presentes Número de muestras por lote: 2 20 del lote más viejo y 10 del lote más joven por lote. 4 o más lotes Tomar muestras de forma equitativa entre todos los lotes presentes hasta completar las 30 muestras.

20 Versión 06 Página 20 de Recolección de muestras para la confirmación de casos probables. Para la confirmación de los casos probables, las muestras de elección serán los hisopados traqueales y las tráqueas. Una vez reportado el caso probable, se deberán tomar y remitir lo antes posible al LANASEVE: 5 tráqueas para realizar las pruebas histológicas y muestras de hisopados traqueales de 30 aves para realizar las pruebas de PCR (de los 30 hisopados se harán 3 pooles de 10 muestras cada uno). Las muestras se deberán conservar en un recipiente o bolsa limpia y enviar en refrigeración dentro de las siguientes 24 horas al LANASEVE, para que le realicen las pruebas confirmatorias. En caso de no poder entregar el material el mismo día del muestreo, debe de conservarse en congelación hasta su entrega al laboratorio Recolección de muestras en la vigilancia pasiva. En los casos sospechosos de denuncia por enfermedades respiratorias de las aves no se deben llevar aves enfermas o recientemente muertas al laboratorio de diagnóstico. La toma de las muestras y la necropsia de las aves debe realizarse en el terreno o en un área biológicamente segura. Los restos y el material contaminado se deben eliminar apropiadamente y se deben tomar las precauciones de bioseguridad necesarias para evitar la diseminación de enfermedades. Se deben tomar las siguientes muestras: Muestras a tomar Granjas Tecnificadas Observación Sueros Muestras de suero de 20 aves enfermas (para IA y ENC). Suero no hemolizado. Hisopados 11 hisopados cloacales o cloacales o traqueales de aves enfermas o traqueales* recién muertas en 2 pooles (un pool de 5 y uno de 6). Órganos de aves no hisopadas* 1 pool de tráqueas y 1 pool de tonsilas cecales de 5 aves enfermas o recién muertas. *Si no se dispone de medios de trasporte viral para la recolección de las muestras, se deben remitir al LANASEVE muestras de órganos de al menos 11 aves diferentes: 11 tráqueas (2 pooles), 1 pool de 5 bazos y 1 pool de 5 tonsilas cecales (en bolsas separadas por tipo de órgano). Notas: Los diagnósticos prioritarios de la vigilancia pasiva son en primer lugar Influenza aviar y la enfermedad de Newcastle.

21 Versión 06 Página 21 de 26 Los sueros son únicamente para correr las pruebas serológicas contra IA y ENC. Para la atención de denuncias de mortalidad o enfermedad respiratoria de las aves sospechosos de LTI es preferible tomar muestras de hisopados traqueales. Los pooles de hisopados de aves enfermas o recién muertas, son transportados a 4 C en medio caldo infusión cerebro-corazón sin el hisopo. Las muestras de órganos (cortes de alrededor de 1 a 2 cm) son transportadas en bolsas para transporte de muestras a 4 C. Al completar la información del SIVE, en el propósito de muestreo se debe indicar Denuncia y deben notificar el caso al Programa Nacional de Salud Aviar con la información correspondiente al artículo # 4 del decreto No MAG Listado de Enfermedades Animales de declaración Obligatoria, completando el registro DNO-PG- 002-RE-001 Denuncias Sanitarias (anexo 1), detallando claramente la siguiente información: Especie animal denunciada: 1 Actividad denunciada: 2 Población expuesta: 3 Fecha de inicio de síntomas: 4 N de animales N de animales muertos: enfermos: N de animales sacrificados: N de animales destruidos: Descripción de la denuncia: 5 (indique qué sospecha, cuáles síntomas o signos identifica?) 1 En la especie animal se debe indicar de forma general: bovino, equino, porcino, avícola, acuícola, apícola, entre otros. 2 La actividad se refiere a las indicadas en la matriz de CVO establecida por la DNO, disponible en la página web del SENASA. 3 Indique por favor el número aproximado de animales que están siendo involucrados 4 Indique día, mes y año de cuándo empezó a observar la sintomatología sospechosa o anormal de los animales enfermos 5 Indique de forma detallada todos los síntomas o signos que le sugieran a usted que el animal se encuentra enfermo o es maltratado

22 Versión 06 Página 22 de Empaque y envío de muestras: Los recipientes que contengan las muestras deben ser sellados y colocados en una bolsa plástica, sellada con un doblez, que será presionado con ligas (bandas elásticas). Tanto los recipientes como las bolsas se deben identificar mediante etiquetas. Las bolsas que contienen las muestras se colocarán dentro de una segunda bolsa con hielo. Esta bolsa se sellará de igual manera que la primera y luego se colocará dentro de una caja de unicel o poliuretano (hieleras de estereofón) para su envío. El espacio restante de la caja se rellena con papel periódico. La caja se debe sellar herméticamente con cinta adhesiva. El formulario de notificación de casos se puede enviar dentro de la caja o pegada con cinta adhesiva sobre la tapa de la caja (una copia del mismo debe quedar para el archivo local) Pruebas de laboratorio Pruebas de tamizaje Como método de diagnóstico de tamizaje, se podrá emplear el ELISA indirecto Prueba de diagnóstico. La prueba de laboratorio para la vigilancia activa de LTI será el PCR de hisopados traqueales Prueba de confirmación Las pruebas de confirmación podrán ser: la secuenciación del virus, presentando un resultado positivo a cepas patogénicas de campo del virus LTI, O la evidencia histopatológica de inclusiones intranucleares (típicas inclusiones del herpesvirus denominadas tipo A Cowdry) en las células epiteliales de tráqueas Pruebas presuntivas Se podrán usar como pruebas presuntivas que ayuden en el diagnóstico de LTI el agar gel precipitación y la inmunofluorescencia.

23 Versión 06 Página 23 de ACTIVIDADES DE CONTROL Cuando se reporte un caso positivo a LTI, el SENASA (a través del PNSA) debe coordinar con el médico veterinario oficializado y el responsable de la granja la suspensión de las exportaciones de dicha granja. 13 CAPACITACION El coordinador del Programa Nacional de Salud Aviar debe elaborar un plan de capacitación que esté adaptada al protocolo de vigilancia. Los objetivos del mismo serán mejorar el conocimiento de la enfermedad, de la toma de muestras y de las medidas preventivas que se deben aplicar en los establecimientos avícolas, además de motivar la participación de los actores Capacitación al sector oficial: Anualmente el coordinador del Programa Nacional de Salud Aviar impartirá la capacitación del presente protocolo a los jefes de salud animal de las direcciones regionales del SENASA Capacitación al sector productivo: Anualmente se realizará una capacitación a los veterinarios oficializados del sector privado. Dentro del programa de inducción de los Médicos Veterinarios Oficializados en el sector avícola, debe incluirse la capacitación del presente protocolo. 14 EVALUACION Y SEGUIMIENTO Cada semestre las Direcciones Regionales del SENASA deben realizar las auditorias de bioseguridad, en establecimientos de aves reproductoras de exportación, verificando el cumplimiento del programa de vigilancia de LTI, entre otros. También se verificará el cumplimiento del programa de vigilancia cuando se realicen visitas de inspección por parte del coordinador del PNSA o auditorías internacionales en los establecimientos exportadores. 15 DEFINICIONES 15.1 Aves de corral: designa todas las aves domesticadas, incluidas las de traspatio, que se utilizan para la producción de carne y huevos destinados al consumo, la producción de otros productos comerciales, la repoblación de aves de caza o la reproducción de todas estas categorías de aves, independientemente de los fines para los que se utilicen.

24 Versión 06 Página 24 de 26 Las aves mantenidas en cautividad por motivos distintos de los enumerados en el párrafo anterior, por ejemplo las aves criadas para espectáculos, carreras, exposiciones o concursos, o para la reproducción o la venta de todas estas categorías de aves, así como las aves de compañía, no se consideran aves de corral Cuarentena: Conjunto de medidas sanitarias basadas en el aislamiento y restricción de la movilización de animales, insumos, materiales, equipos, productos y subproductos, en una o varias explotaciones sospechosas o afectadas por una enfermedad de declaración obligatoria, aplicable durante un período variable dependiendo de la transmisibilidad de la enfermedad de que se trate, así como también de la magnitud y riesgo de transmisión de la enfermedad en la zona Granja reproductora de exportación: granjas avícolas de aves reproductoras que por condiciones de mercado, requieren de un mayor nivel de bioseguridad, de una vigilancia epidemiológica especial a las enfermedades restrictivas al comercio y de una supervisión oficial más frecuente. Dentro de esta definición se consideran todas las granjas que exportan huevos fértiles o cuyos huevos son destinados para la incubación de aves de un día de edad para la exportación Laboratorio oficializado u autorizado: Establecimiento de diagnóstico que cuenta con equipo y profesionales capacitados para realizar las actividades serológicas, de aislamiento o tipificación del agente de LTI, autorizado de acuerdo a lo establecido por la directriz de oficialización aprobada por el Servicio Nacional de Salud Animal para prestar servicios relacionados con las pruebas o análisis que permitan determinar la presencia o ausencia de la LTI Lote: designa varias aves de la misma especie y de una edad similar (diferencia no mayor a 2 semanas), que se crían juntos bajo control humano para lograr una misma finalidad zootécnica Médico Veterinario Oficial: Veterinario facultado por el Servicio Nacional de Salud Animal para realizar determinadas tareas que se le designan, relacionadas con la salud animal, salud pública, inspecciones de mercancías y la emisión de certificados oficiales de salud animal Médico Veterinario oficializado: Veterinario autorizado por el Servicio Nacional de Salud Animal, que presta sus servicios en empresas avícolas a fin de asesorar a sus propietarios y representantes para cumplir con los preceptos estipulados en los lineamientos del Programa Nacional de Salud Aviar.

25 Versión 06 Página 25 de Medida Sanitaria: Toda la medida aplicada para proteger la salud o la vida de los animales y de las personas en todo el territorio nacional, contra la entrada, radicación o propagación de un peligro Módulo: subunidad de una granja avícola, debidamente delimitado y ubicada, en donde se alojan aves de corral con fines de reproducción, postura, engorde, crianza, cuido y recolección de sus productos y subproductos Notificación: Comunicación formal escrita, verbal o electrónica a las autoridades zoosanitarias competentes, sobre la sospecha o existencia de la enfermedad, señalando los datos epidemiológicos relevantes en forma suficiente y necesaria para su identificación, localización y atención correspondiente Parvada: designa varias aves de la misma especie que se crían juntos bajo control humano para una misma finalidad zootécnica. Se considera que una parvada constituye una unidad epidemiológica Propietario o Titular: Persona natural o jurídica responsable de la actividad productiva avícola Tratamiento terapéutico: medicación de antibióticos que reciben las aves para el control de cuadros clínicos de enfermedad respiratoria complicada Unidad epidemiológica multiedad: designa a un grupo de aves de diferentes edades (dos o más lotes o parvadas) con una determinada relación epidemiológica y aproximadamente la misma probabilidad de exposición a un agente patógeno porque pertenecen a un mismo establecimiento; estando las aves alojadas dentro del perímetro interno (área limpia) del establecimiento, tienen la misma administración, comparten infraestructura (cerca perimetral, duchas sanitarias, accesos, etc.), cuentan con el mismo personal y además cumplen con la misma gestión de bioseguridad y buenas prácticas de manejo. 16 ACRONIMOS EMV: Escuela de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional ENC: Enfermedad de Newcaslte IA: Influenza aviar LTI: Laringotraqueitis infecciosa aviar LANASEVE: Laboratorio Nacional de Servicios Veterinarios MAG: Ministerio de Agricultura y Ganadería OIE: Organización Mundial de Sanidad Animal PCR: Reacción en cadena de la polimerasa

26 Versión 06 Página 26 de 26 PNSA: Programa Nacional de Salud Aviar SENASA: Servicio Nacional de Salud Animal SIVE: Sistema de Vigilancia Epidemiológica SINGES: Sistema Integrado de Gestión 17 BIBLIOGRAFÍA 1. Bagust T.J., Jones, R.C. & Guy J.S. Avian infectious laryngotracheitis Diseases of poultry: world trade and public health implications. Scientific and technical review. OIE Vol.19 (2) James S. Guy and Trevor J. Bagust Laringotracheitis. In Y.M. Saif (ed.) Disease of Poultry, (11th ed. Iowa State Press ). 3. OIE Código Sanitario para los Animales Terrestres. 4. OIE Manual de las Pruebas de Diagnóstico y de las Vacunas para los Animales Terrestres. 5. Programa Nacional de Salud Aviar. Laringotraqueitis infecciosa aviar. Programa para la determinación y certificación de granjas libres. MAG. Abril, DOCUMENTOS COMPLEMENTARIOS Anexo 1: Registro de Denuncias Sanitarias. Anexo 2: Hoja de Visita. Anexo 3: Vigilancia Pasiva en Campo. Anexo 4: Registro de Información sobre Episodios de Enfermedades Agudas (EA1). Anexo 5: Instructivo para la toma y envío de muestras.