Utilidad de las matrices alternativas como herramienta útil en la determinación analítica de drogas lícitas e ilícitas Autoras: Yasmin C- Morales, María L. Di Bernardo Existe una necesidad de encontrar la verdad en el campo de la Ley y cada día es necesario profundizar los conocimientos sobre los diferentes tópicos que implican aplicar de manera clara y precisa todos los preceptos que esto enlaza. No se trata solo de adecuar la Ley a los hechos que se suscitan, sino también de adecuar a los encargados de aplicar la Ley en todas sus fases a los acontecimientos que día a día se presentan. Es por esta razón que surge la necesidad de optimizar los procesos basados en nuevos enfoques tanto jurídicos como técnicos que permitan una adecuada utilización de las herramientas al alcance, con la finalidad de aplicar la Ley en función de una única verdad que beneficie al sistema y a los actores de las causas. Actualmente el consumo de drogas de abuso es un problema que afecta a todas las clases sociales, variando el tipo de droga a consumir con las posibilidades económicas de cada grupo. Es por ello que se hace necesario contar con un método analítico y una matriz biológica adecuada que permita extrapolar en el tiempo su consumo, el carácter del mismo (consuetudinario o no), la muerte por sobredosis, la vinculación de un delincuente a su consumo al momento de cometer un hecho punible, hecho vial y la confirmación de abstinencia cuando ello sea necesario. Las drogas de abuso son hoy día un problema de salud pública que afecta a países desarrollados y en vías de desarrollo. La dimensión internacional de éste problema y lo diverso y complejo del mismo obliga a las naciones a intensificar sus esfuerzos en el control que deben ejercer, así como en sus regulaciones; en algunos casos con la introducción de legislación más exigente y severa que muchas veces llega a tener serias consecuencias penales para el individuo que infringe la ley. La ley, por lo tanto, para que sea aplicada debe sustentarse en pruebas analíticas concretas y confiables, tanto en material de toma de muestras biológicas, como en el análisis de las drogas presentes y/o sus metabólitos. Conociendo que las drogas de abuso siguen una toxicocinética, en necesario tener matrices alternativas como el pelo que permita determinar consumos no recientes o cuando la vida media de la sustancia haya transcurrido. En este sentido el personal profesional de los laboratorios toxicológicos deben ser capaces de detectar cada vez mayor número de sustancias toxicas y de usar métodos de detección e identificación que sean rápidos, confiables, exactos y específicos.
En cuanto al análisis de muestras biológicas, las técnicas y métodos a aplicar deben poseer una gran sensibilidad, si bien es cierto que la mayoría de las drogas son adulteradas esto implica que exista la posibilidad de interferentes que acomplejen o enmascaren la sustancia activa, y si es el caso de los metabólitos estos pueden encontrarse en concentraciones bajas no detectables por las técnicas convencionales o haber transcurrido su vida media, lo que imposibilitaría detectar la sustancia en matrices tradicionales tales como sangre y orina. Esto obliga a tener presente las dificultades que muchas veces ofrece la interpretación de los resultados analíticos hallados en ellas. En el presente trabajo de Investigación documental se busca presentar una propuesta de utilización de matrices alternativas como el pelo en los laboratorios de Toxicología antes adscriptos al C.I.C.P.C, hoy día SENAMECF, para el análisis forense en hechos punibles vinculados al abuso de drogas lícitas e ilícitas. La matriz pelo permite extender más tiempo la detección de la droga (en varios meses inclusive), a diferencia de los exámenes de sangre y la orina que poseen limitaciones temporales. La detección de drogas en el pelo tiene numerosas posibilidades de aplicación: establecer la adicción, la comisión de crímenes bajo la influencia de la droga, el abuso infantil, causa de muertes sospechosas, abuso de drogas en las cárceles, custodia de menores, entre otras. Además, puede ser aplicado para fines terapéuticos como control en el cumplimiento del tratamiento de drogodependientes sometidos a medidas de seguridad. También, puede emplearse en las empresas para determinar el posible uso crónico de la droga por personal contratado para ejercer cargos de responsabilidad por ejemplo, personal que trabaja en las torres de control aéreas, personal de vigilancia o seguridad, transporte público, policías, bomberos, entre otras. El análisis de drogas de uso indebido y metabólitos en pelo ha recibido considerable atención debido a las ventajas que ofrece ésta matriz con respecto a otras más asiduamente utilizadas, como vísceras, sangre u orina. Para estudios mediatos (consumos previos a los 15 días o más) se aconseja utilizar pelo pericraneal, vello pubiano, vello axilar (Kronstrand y col.,2010, Kintz, 2007). Las drogas de mayor relevancia Toxicológica a investigar en esta matriz alternativas son: alcohol, cannabis, cocaína y sus metabólitos opio y sus derivados. El pelo presenta muchas ventajas frente a las convencionales como, principalmente, la facilidad de recogida, la dificultad de adulteración y las diferentes ventanas de detección que presenta. Dichas ventanas, como puede verse en la Figura 1, van desde pocas horas hasta años, por lo que, según la finalidad del análisis, la elección de la muestra puede ser diferente.
Fig. 1. Permanencia de drogas en diferentes Matrices Biológicas Fuente: Caplan y Goldberg 2001, J. Anal. Tox 25, 396-399. La Society of Hair Testing (SOHT, 2004), ha señalado de acuerdo a estudios realizados que la tasa de crecimiento del cabello es de 1 cm/mes o 0.35 mm por día tanto en hombres como en mujeres, pero puede variar ampliamente, entre 0.07 a 0.78 mm por día; puede varíar entre pelos del cuero cabelludo con respecto al pelo de otras regiones del cuerpo, (axilar, torácico, púbico). El cabello crece continuando un ciclo de tres fases, inicial con la anagénica en la que se forma el folículo y se produce el cabello, cuya duración es variable de 7 a 94 semanas (85-90% del pelo), seguida con la catagénica de pocas semanas, en la que cesa la actividad del bulbo folicular y, culmina con la telogénica de 4 a 6 meses. (Kintz, 2007). En vista que el pelo se encuentra en distintas fases de crecimiento y la tasa de crecimiento varía, esto es significativo para determinar de qué región tomar la muestra para ser analizada. La zona recomendable para una muestra de cabello es la posterior de la cabeza dado que en ella el 85% de los folículos se encuentran en la fase anagénica y es además la que presenta mayor tasa de crecimiento. (Vallejo, 2012). Mecanismos de Incorporación de Drogas en el pelo Los mecanismos exactos involucrados en la incorporación de drogas en el cabello siguen siendo investigados. El mecanismo típico asume que las drogas ingresan en el pelo mediante difusión pasiva, como se muestra en la Fig. 2. Cada hebra de cabello está ligada a una glándula sebácea que garantiza cubrir de sebo el pelo maduro por encima de la raíz. Por otro lado, las glándulas sudoríparas están separadas de la raíz del cabello, y estas se encargan de humedecerlo y contribuyen con la incorporación de las drogas
Fig. 2. Vías por las cuales se propone que las drogas se incorporan en el cabello Fuente: Adaptación de y Modificación de Pragst y Balikova, 2006 Difusión Pasiva o Activa desde el Torrente Sanguíneo Dado que las células del folículo experimentan una alta división celular, están muy bien irrigadas, por tanto, las drogas pueden difundir a través de sus membranas cumpliendo con ciertas características. La naturaleza de la sustancia incorporada (estructura y propiedades químicas). Incorporación desde el Sudor y otras Secreciones La mayor contribución de drogas en el pelo proviene del sudor y de la excreción sebácea que impregna el pelo, tanto durante su formación como en su maduración. Los analitos predominantes generalmente encontrados en pelo son las drogas intactas, es decir, sin metabolizar, mientras que los metabolitos por ser más polares, predominan preferiblemente en orina (Musshoff F y Burkhard., 2007) Incorporación desde la Contaminación Externa Estudios publicados describen que las drogas como la cocaína y la marihuana se incorporan en el cabello cuando se está en un ambiente contaminado por las mismas por tanto, se han ido afinando las técnicas de lavado que se emplean para remover la droga que se encuentra externamente en el pelo para que sean altamente eficientes y facilitar la distinción de una administración voluntaria de la droga de una involuntaria (administración pasiva) ante un resultado analítico positivo (Musshoff F y Burkhard., 2007, Kintz, 2004). Estabilidad de las Drogas en el Cabello La incorporación de las drogas en el cabello es muy estable. Los compuestos orgánicos son capaces de sobrevivir en el cabello por miles de años bajo condiciones favorables (temperatura ambiental y atmósfera seca) (Kintz, 2004). La duración de una droga en el cabello depende de su estructura química e incrementa con la polaridad, es decir, los metabolitos (comúnmente más polares que sus precursores) se eliminarán más lentamente, por tanto, la relación metabolito/droga incrementa de
proximal a distal (Pragst y Balikova, 2006). Sin embargo debe considerarse la posibilidad de la formación de metabolitos en el cabello por hidrólisis, como en el caso de la cocaína que fácilmente sufre degradación hidrolítica a benzoilecgonina (Henderson y col., 1998). Por otro lado, la concentración de drogas en pelo es seis veces mayor que en sangre, lo que indica que, de alguna manera, la droga no difunde solo pasivamente. También se conoce que la droga se ubica en el tallo piloso, por lo que debe existir un rápido paso de droga inalterada, hacia compartimientos metabólicamente inactivos (Kintz, 2007). Es lógico pensar que la droga incorporada a la zona de síntesis del folículo piloso es directamente proporcional a la droga circulante, por lo que al metabolizarse ésta, la concentración plasmática cae, invirtiéndose el proceso. El folículo piloso vuelca droga a la circulación, tanto para drogas libres en plasma como para las unidas a la fracción proteica. Por lo tanto debe existir un mecanismo de atrapamiento y protección de moléculas que impidan que éstas entren al sitio de metabolización y biodisponibilidad general del organismo (Laguens y col., 1999; Wennig, 2000). Así, han logrado aislar drogas alucinógenas existentes en la especie Anadenanthera Colubrina (Cebil) en pelo de momias andinas provenientes de la zona denominada San Pedro de Atacama (Chile), de más de mil años de antigüedad (A.D. 700). Por lo tanto, se inclinan a pensar en un mecanismo de difusión, desde la sangre hacia la zona de síntesis de pelo y en la existencia de mecanismos de atrapamiento de moléculas que permitan a las drogas escapar de la metabolización. Baumgartner y colaboradores, 1989, reportaron correlación positiva entre sujetos adictos y las concentraciones de heroína, cocaína y marihuana en pelo. Nakahara y colaboradores, 1997, encontraron una buena correlación entre la dosis de metoxianfetamina y la concentración de droga en el pelo de 5 personas. En casos post-mortem han podido aislar sustancias de corte como anestésicos arilamínicos, cuya concentración respecto de sus metabólitos también ha sido mayor (Scott K., 2009). Por otro lado, la toma de muestra de pelo no es invasiva, no daña la integridad física de las personas, lo cual respetaría el articulo 46 CRBV que dice textualmente lo siguiente: Toda persona tiene derecho a que se respete su integridad física, psíquica y moral; en consecuencia: Se fundamenta en el ordinal Nº 03, una excepción jurídica donde Ninguna persona será sometida sin su libre consentimiento a experimentos, o a exámenes médicos o de laboratorio, excepto cuando se encontrare en peligro su vida o por otras circunstancias que determine la ley.
La toma de muestra debe ser realizada por personal entrenado tomando en cuenta las siguientes recomendaciones de colección de muestra por la SOHT, 2004: El pelo debería colectarse de la región posterior de la cabeza, prefiriéndose ésta área porque un 85 % de ella presenta pelo en fase de crecimiento activo y por lo tanto mayor cantidad de droga podría fijarse en ella. El pelo debe ser cortado tan próximo como sea posible al cuero cabelludo o la piel si es de otra región del cuerpo. El peso de la muestra adecuado para permitir los estudios de screening y de confirmación sería de unos 100-200 mg, (cantidad equivalente al diámetro de un lápiz). Para su almacenamiento el pelo debería guardarse en un folio de aluminio que garantiza su integridad y previene su contaminación, así como en una bolsa de papel adecuadamente rotulado. La o las muestras pueden ser conservadas a temperatura ambiente. Si la muestra pilosa se encontrara mojada, debería secarse y acondicionarse correctamente para su posterior análisis (Society of Hair Testing (SHOT), 2004). La ventaja del análisis de pelo es su capacidad de proporcionar información sobre un período preferentemente largo, además de acumular la sustancia inalterada en mayor concentración que sus metabolitos. Entre las aplicaciones que tiene el análisis de pelo, el seguimiento de pacientes sometidos a curas de deshabituación es una de las más importantes, ya que se puede controlar de manera secuencial el cumplimiento terapéutico. De la misma forma, es de gran utilidad en las ejecutorias penales, sustituyendo de esta forma los frecuentes análisis de orina. Los análisis de pelo también pueden ser utilizados en el ámbito laboral para controlar el consumo de sustancias de abuso por los trabajadores (Vallejo, 2012). Es también utilizado con frecuencia en procedimientos civiles relativos a la custodia de hijos con el fin de controlar el consumo de drogas por parte de alguno de los progenitores. De hecho, ya han sido publicados trabajos que ponen de manifiesto la utilidad de esta muestra biológica para este fin (Strano y col., 1996, Bermejo y col., 2003).
En los últimos años ha comenzado a utilizarse esta muestra biológica para demostrar la administración de sustancias depresoras (benzodiacepinas, éxtasis líquido Gamma hidroxi butírico (GHB), ketamina, etc.) con fines criminales o en casos de agresiones sexuales(kintz y col., 2007). En este caso ha llegado a determinarse la sustancia después de una única dosis administrada tras el paso de un breve período. Para tal fin, ha de tenerse en cuenta que deben pasar al menos 4 semanas para la toma de muestra del pelo, para dar tiempo a que las sustancias se depositen en la queratina en crecimiento y, además, recoger una cantidad de muestra suficiente para realizar el análisis de drogas en secciones seriadas del cabello (Musshoff F y Burkhard., 2007), Sin embargo esta matriz presenta limitaciones con la colección de la muestra, que no sea adecuada (por ejemplo, longitud inadecuada del mechón, o que no sea tomada de zona más cercana al cuero cabelludo), aunado a esto la muestra debe ir acompañada de la máxima información posible, incluyendo datos de la historia clínica, el propósito de la investigación, sospecha de drogas y tiempo de consumo (Villamor y col., 2005). Métodos Analíticos para la Determinación de Drogas de Abuso en pelo Al determinar qué métodos analíticos se deben utilizar dependerá del tipo de aplicación en cada caso. Se deben de tener en cuenta los siguientes factores: Qué perfil de la sustancia o metabolito es probable que aparezca en el material que se analiza? Qué analito se necesita determinar para obtener ciertas conclusiones? Qué requerimientos analíticos debe de cumplir el método? En qué medida se puede utilizar el método de forma rutinaria? La literatura describe numerosos métodos de identificación y cuantificación de analitos en muestras fisiológicas, aunque una combinación de cromatografía de gas y espectrometría de masas, (GC-MS), es considerada como técnica válida en el Test de Drogas Confirmatorio. Otro método definitivo que se utiliza es la cromatografía líquida (LC), también en relación con un detector por espectrometría de masas. Sin embargo, se han realizado trabajo donde se han ajustados los métodos analíticos de acuerdo a la no disponibilidad equipos instrumentales de alta sensibilidad que se cuenta en el laboratorio, entre los que cabe mencionar Di Bernardo (2007) Ensayo y optimización de métodos de extracción y mineralización para determinación de cocaína en pelo por EUV-VIS y test rápido, El trabajo tuvo
como objetivo el empleo de métodos de pretratamiento: digestión y extracción para liberar cocaína o sus metabólitos en muestras de pelo de consumidores en tratamiento de rehabilitación de la Fundación José Félix Ribas-Mérida, y determinar su concentración, mediante la técnica de Espectrofotometría de Absorción Ultravioleta-Visible (EUV-VIS) y test rápido, simulando en esta última la matriz de orina. Pudieron comprobar la hipótesis que la técnica de EUV-VIS es aplicable para la determinación de cocaína en pelo luego de realizar el tratamiento adecuado a la misma, independientemente del estrecho límite de detección de estos equipos. Resultando ambos procedimientos de bajo costo y fácil aplicación en laboratorios de Toxicología de baja infraestructura. De igual manera la investigadora Díaz (2009) realizo la determinación de cocaína en pelo y orina de reclusos bajo régimen, en este trabajo describe la investigadora que determino drogas en las muestras de pelo de los reclusos que tenían régimen especial abierto, encontrando en varias la presencia de la droga en la matriz pelo. Basamentos legales referidos en el Marco Jurídico del Sistema Legal Venezolano De acuerdo a los basamentos legales referidos en el Marco Jurídico del Sistema Legal Venezolano, no existe una restricción para el uso de Matrices Alternativas para los análisis Toxicológicos con el fin de determinar la presencia de Drogas Lícitas e Ilícitas en sujetos incursos en hechos punibles, o que estén bajo el régimen de control o seguimiento de drogas por alguna medida, que sean requeridos por instancias judiciales en los Laboratorios de Toxicología Forense. En Conclusión se pueden incluir como matriz de rutina las matrices alternativas definidas en este trabajo de Investigación. Tabla Nº 1. Basamento Legal para la Utilización de Muestras en los Análisis Toxicológicos Leyes Artículos Observaciones Constitución de la República Bolivariana de Venezuela 46, ordinal 03 Se practicaran exámenes necesarios cuando la ley lo requiera respetando la integridad física de las personas.. Código Orgánico procesal Penal 223 Se ordena la práctica de la experticias sin limitaciones al perito, los cuales se utilizaran como elementos de convicción. Ley Orgánica de Drogas 134 El seguimiento es el proceso que consiste en supervisar y evaluara la persona rehabilitada para evitar posibles recaídas en el consumo de las sustancias a las que hace referencia
Reglamento de la Ley de Tránsito terrestre El código de instrucción médico Forense Manual Único de procedimiento en materia de cadena de custodia de evidencias físicas Fuente: Morales (2014) 141 Establece que las experticias toxicológicas se realizan en las muestras de orina, sangre u otros fluidos orgánicos, dejando abierta la posibilidad de cualquier fluido biológico del organismo. 417 El conductor del vehículo está obligado a someterse a las pruebas que se establezcan para detectar el nivel de alcohol en el organismo en casos necesarios. Las pruebas necesarias para establecer las si las 420 personas están bajo efectos de alguna sustancia psicotrópicas o estupefacientes son los análisis de sangre, orina u otras muestras. 113 Cuando el experto químico-farmacéutico asista a la inhumación o autopsia y crea necesitar algún otro fluido, órgano o una porción de él, podrá pedirlos. En el apartado Describe lo que son los fluidos biológicos, tomando de Toxicología como principales sangre, orina, heces fecales, Forense contenido gástrico, vomito, y otros fluidos biológicos que sean necesarios. La presente revisión documental permite concluir que el pelo resulta una matriz biológica confiable para la determinación de drogas de uso y abuso, representado la misma de fácil acceso, su toma de muestra no viola la integridad física del individuo, permanece estable en el tiempo, difícil de adulterar. Es útil para realizar análisis retrospectivos que permiten vincular hechos punibles de vieja data. El uso de esta matriz alternativa es viable de implementar en los diferentes laboratorios de toxicología y criminalística, ya que la misma no reviste un procedimiento engorroso para la determinación de sustancias licitas. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Baumgartner A, Jones P, Baumgartner W, Blank C. (1989). Radioimmunoassay for hair for determinating opiates abuse histories. JNM;20:748-52 Bermejo AB, Tabernero MJ. (2011). Determinación de drogas de abuso en pelo. Revista Española de Toxicología. Vol. 37 Núm. 02.
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