Agares utilizados Agar Salmonella Shigella (SS) Medio de siembra selectivo para aislar Salmonella y Shigella, diferencia organismos fermentadores de lactosa de los que no lo hacen e inhiben organismos coliformes. El verde brillante, la bilis de buey y la concentración de citratos y tiosulfato inhiben la flora restante. (Merck, 1994). Agar Sulfito Bismuto (SB) Es un medio muy selectivo para el aislamiento de S.typhi y otras Salmonellas de heces, orina, aguas residuales y otras matrices donde pueden estarlo. Inhibe organismos Gram positivos (por la presencia de sulfito bismuto) y aumenta la cantidad de patógenos cuando existen bajas cantidades.
Agares utilizados Agar Xilosa, Lisina y Desoxicolato (XLD) Es un medio selectivo y diferencial de siembra específicamente creado para el aislamiento de Shigella y especímenes la familia Enterobacteriaceae patógenos. Contiene tiosulfato y citrato amónico férrico, además de una solución estéril de Desoxicalato sódico al 10%. La xilosa se emplea como fuente de carbono que es utilizada por estas bacterias para su fermentación, por último, Shigella se diferencia mediante la utilización de la lisina. (DIFCO, 1984). Agar Verde brillante- Rojo fenol (BPL) Es un agar selectivo para aislamiento de Salmonella. Se compone de peptona de carne, cloruro de sodio, lactosa, rojo de fenol, verde brillante, agar-agar. El rojo fenol que actúa como indicador de ph vira a amarillo producto de la degradación de lactosa a ácido. Debido al verde brillante, la flora Gram positivo como S. typhi se inhiben.
Caldos utilizados Caldo Rappaport Vassiliadis (RV) Se utiliza para el aislamiento selectivo de Salmonella en alimentos y otros materiales. Se compone de verde de malaquita, cloruro de magnesio, peptona de harina de soja (concentraciones bajas), cloruro de sodio, hidrogenofosfato di potásico y dihidrogenofosfato potásico. (Merck, 1994). Caldo Selenito Cistina (SC) Se utiliza como medio de enriquecimiento de salmonella par su deteccion en alimentos (como productos lácteos). Se compone de peptona de caseína, L (-)- Cistina, lactosa y fosfato. El selenito inhibe el crecimiento de las bacterias coliformes y enterococcus. El caldo no inhibe a Proteus y Pseudomonas. Caldo Tetrationato (TT) El caldo se compone de peptona de caseína, peptona de carne, mezcla de sales biliares, carbonato cálcico, tiosulfato sódico, aditivos: yoduro potásico, yodo y en menor cantidad verde brillante. (Merck, 1994). El tetrationato y tiosulfato inhiben coliformes y otras bacterias acompañantes.
Muestras a utilizar. Muestras de alimentos para detección de Salmonella. 1. Panita de Pollo. 2. Contre de Pollo. 3. Queso fresco. Muestras de alimentos para detección de Shigella. 1. Panita de Pollo. 2. Contre de Pollo. 3. Carne Molida.
Metodología. Determinación de Salmonella. Incubar Homogenizado a 35 C 1 C por 18 a 24 h Transferir del homogenizado a caldos Incubar 24 h por Extender por asada c/u de los caldos en: Homogenizar 25 a 50gr de muestra en 225 o 450 ml de agua peptonada tamponada 1 ml a tubo con 9 ml con caldo Selenito Cistina 1 ml a tubo con 9 ml con caldo Tetrationato Caldo Selenito Cistina a 35 C 1 C Caldo TT a 43 C 0,2 C (alta carga microbiana) a 35 C 1 C (baja carga microbiana) Agar (XLD) Agar( BPL) Agar (SS) Agar (SB) Agar (XLD) Agar (BPL) Agar (SS) Agar ( SB) Incubar las placas a 35 C 1 C por 24-48h Observar en las placas la presencia de colonias sospechosas Realizar prebas bioqicas (TSI,LIA,MIO) 0,1 ml a tubo con 9 ml con caldo Rappaport Vassiliadis Caldo RV a 42 C 1 C Agar (XLD) Agar (BPL) Agar (SS) Agar (SB) Fuente: Elaboración Propia, 2016
Figura N 1: Determinación de posible Salmonella. Fuente: Elaboración Propia, 2016
Determinación de Shigella. Pesar eh incubar por 24h a 35 C 25gr de muestra adicionar a matras con 225 ml de agua peptonada tamponada Homogenizar vortex Preparar disoluciones Adicionar 0,25 ml de c/ dilución sobre la superficie de cada placa que contiene agar XLD solidificado Incubar placas a 35 C 24h 1 C durante Contabilizar Confirmación 25-250 C como presuntas Shigellas a las colonias de color rojo, transparentes De las presuntas Shigellas mediante pruebas Bioquimicas Fuente: Elaboración Propia, 2016
Figura N 2: Determinación de posible Shigella. Fuente: Elaboración Propia, 2016
Resultados Posibles. Agar Descripción general Colonias Salmonella específicas Colonias Shigellas específicas Salmonella-Shigella (SS) La mayoría de Salmonellas y Shigellas presentan colonias transparentes, translúcidas u opacas y lisas. Algunas Salmonellas son transparentes con centro negro. S.typhimurium: Transparente con centro negro S.enteritidis: Transparente con centro negro. S. flexneri: incoloro Sulfito Bismuto (SB) Salmonellas con excepción de S.paratyphi y S.pollorum tienen centro negro, borde claro, precipitado negro con brillo metálico alrededor de las colonias(ojo de conejo, ojo de pez) S.typhimurium: negras con brillo metálico. S.choleraesuis: negras con brillo metálico. S.arizonae: negras con brillo metálico. S.typhi: Negro con brillo metálico. S.enteritidis: negro con brillo metálico. S. sonnei: no tiene crecimiento. S. flexneri: marrón Xilosa,Lisina Desoxicalato (XLD) Salmonellas del mismo color del medio de cultivo, transparentes y a veces con centro negro. Shigella del mismo color que el medio de cultivo, transparentes. S.typhi: Anaranjado,ligeramente opaco. S.typhimurium: Incolora, centro negro. S.enteritidis: Incolora, centro negro S. sonnei: Incolora sin centro negro. S. flexneri: Incolora sin centro negro. Verde brillante- Rojo fenol (BPL) Salmonellas colonias rosa palido, transparente con halo rojo S.typhimurium: Rosa en medio de cultivo rojo S.choleraesuis: Rosa en medio de cultivo rojo S.enteritidis: Rosa en medio de cultivo rojo ---------- Fuente: Merck (1994) y DIFCO (1984).
Imágenes de resultados Posibles. Figura N 3: Colonias de Salmonella en Agar Salmonella-Shigella Figura N 4: Colonias de Shigella en Agar Salmonella-Shigella
Imágenes de resultados Posibles. Figura N 5: Colonias de Shigella en Agar XLD. Figura N 6: Colonias de Salmonella en Agar XLD.
Imágenes de resultados Posibles. Figura N 7: Colonias de Salmonella en Agar Verde Brillante-Rojo Fenol. (BPLS). Figura N 8: Colonias de Salmonella en Agar Sulfito Bismuto.
Bibliografía 1. DIFCO Laboratories. (1984). Medios de Cultivo Deshidratados y Reactivos para Microbiología. USA. 2. Merck. (1994). Manual de Medios de Cultivo. Alemania. 3. Tabla Posibles Resultados del Instituto de Salud Pública de Chile [En línea]; [Fecha de consulta: 9 de abril de 2016]. Sitio web: http://www.ispch.cl/lab_amb/doc/microbiologia_al imentos/prt-012.pdf.