No es diferencial. se le añade sangre. No es diferencial, si no. se le añade sangre

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1 MEDIOS RICOS Y ENRIQUECIDOS: NO TIENEN AGENTES INHIBIDORES MEDIO MEDIOS SÓLIDOS Agar nutritivo Agar TSA Agar Columbia BHI COMPONENTES PRINCIPALES Caldo nutritivo + Agar. Diferentes versiones con distintos componentes (peptona, triptona-soja, infusión de cerebro y corazón, agar Brucella, agar Columbia, etc.) Digestión enzimática de soja y caseína. Peptona, tripteína, extracto de levadura y extracto de corazón, almidón Infusión de tejidos animales, peptonas, glucosa y tampón CARACTERÍSTICAS USOS No es diferencial No es diferencial, si no se le añade sangre No es diferencial, si no se le añade sangre No es diferencial Medio rico para el cultivo de microorganismos en general, crecen una gran mayoría, excepto algunos muy exigentes Medio rico para el cultivo de microorganismos en general. Se usa como base para agar sangre. Crecen una gran mayoría, e incluso algunos exigentes, como Brucella, Corynebactrium, Listeria Medio rico para el cultivo de microorganismos en general. Se usa como base para agar sangre. Crecen una gran mayoría, e incluso algunos exigentes al añadir sangre. Medio rico que permite el crecimiento de una gran mayoría de los microorganismos, menos los muy exigentes. Se puede usar como base para Agar sangre. VISUALIZACIÓN DE LAS COLONIAS

2 Agar sangre Agar base (BHI, Columbia, TSA, Brucella) + 5% sangre de oveja desfibrinada Diferencial, permite ver distintos tipos de hemólisis Aislamiento de la gran mayoría de microorganismos, incluidos algunos muy exigentes. No permite el crecimiento de Neisseria y Haemophilus. Distingue tres tipos de hemólisis: ß-hemólisis o hemólisis total α-hemólisis o hemólisis parcial γ-hemólisis o no hemólisis Agar sangre con disco de bacitracina Agar sangre con estría estafilocócica Agar sangre para anaerobios Agar chocolate Ídem. a agar sangre + disco de bacitracina de muy baja concentración (0,04U) Agar sangre con una estría con S.aureus. La betahemólisis producida por S. aureus libera factor V y factor X, permitiendo el crecimiento de Haemophilus Agar base (p.e.., Columbia) + 5% sangre de oveja + extracto de levadura + hemina + vitamina K Agar sangre, con la sangre lisada (por calentamiento a 80ºC). Los eritrocitos lisados liberan la hemoglobina y otros nutrientes como factor X (hemina) y factor V (NAD) Diferencial, hemólisis Diferencial, hemólisis Ya no es diferencial Identificación de Streptococcus pyogenes y Streptococcus agalactiae Identificación de Haemophilus como colonias satélites en la estría de Staphylococcus aureus. Medio enriquecido, permite el crecimiento de una gran mayoría de anaerobios Medio rico que permite el crecimiento de una gran mayoría de los microorganismos, incluidos los muy exigentes como Neisseria y Haemophilus S. pyogenes: Colonias betahemolíticas sensibles a bacitracina (halo de inhibición), S. agalactiae, colonias beta-hemolíticas no sensibles Colonias puntiformes satelitales de Haemophilus Hemolisis -----

3 Agar CLED Medio de Kligler (Tubo en pico de flauta) Cistina, lactosa, deficiente en electrolitos. La cistina mejora la recuperación de las enterobacterias. La lactosa y el indicador (azul de bromotimol) permiten distinguir las bacterias fermentadoras de lactosa de no fermentadoras de lactosa. La deficiencia en electrolitos limita el movimiento de Proteus. Lactosa:glucosa 10:1 Rojo fenol como indicador Tiosulfato sódico Fe para detectar la formación de sulfuro Medio rico y diferencial, permite distinguir fermentadoras y no fermentadoras de lactosa Medio rico y diferencial, permite ver 4 características de las enterobacterias: fermentación de la glucosa, fermentación de la lactosa, producción de sulfuro y formación de gases. Para urocultivo Identificación presuntiva de géneros de enterobacterias Fermentadoras de lactosa se ven amarillas (baja el ph y vira el indicador a amarillo). Las no fermentadoras se ven incoloras, blancas o incluso azuladas (si suben el ph por utilización de las peptonas). Pico rojo/fondo amarillo: fermentan glucosa y no produce sulfuro (Providencia, Shigella, Serratia, algunas especies de Citrobacter) Pico rojo/ fondo rojo y precipitado negro: fermenta glucosa y produce sulfuro (Salmonella, Proteus) Pico amarillo/fondo amarillo: fermenta glucosa y lactosa y no produce sulfuro (E. coli, Klebsiella, Enterobacter). Puede haber formación de gases (se levanta el agar). Pico amarillo, fondo amarillo y precipitado negro: fermenta glucosa y lactosa y produce sulfuro (Citrobater freundii).

4 Müeller-Hinton Peptona, almidón, ph 7,3 Transparente para observar bien los halos de inhibición, no tiene PABA (interacción con antibióticos), grosor 4 mm. Realización de las pruebas de sensibilidad a antibiótios (Bauer- Kirby, dilución en agar y test de épsilon) Se siembra en césped, tres veces con un hisopo CALDOS Caldo nutritivo Extracto de carne con NaCl. Se puede suplementar con extracto de levadura, peptonas, glucosa, etc. -- Para microorganismos no exigentes ---- Caldo tioglicolato Caldo suplementado con caseína, extracto de levadura y de carne y tiglicolato. Para anaerobios, añadir además hemina y vitamina K. Caldo más utilizado en microbiología clínica. Bajo potencial redox. Favorece el crecimiento de aerobios, microaerófilos, y anaerobios (capa de parafina líquida), incluso microorganismos exigentes. Bajo potencial redox, favorece la recuperación de anaerobios Caldo con carne picada Trozos de carne como fuente de proteínas Bajo potencial redox Favorece la recuperación de anaerobios, mejor cuando se añade una capa de parafina líquida.

5 CALDOS DE ENRIQUECIMIENTO (agentes inhibidores a baja concentración, retrasan el crecimiento de la microbiota contaminante y permiten el enriquecimiento de un microorganismo que se quiere recuperar. MEDIO COMPONENTES PRINCIPALES CARACTERÍSTICAS USOS Caldo gram negativos GN Agentes inhibidores a baja concentración: citrato y desoxicolato (sal biliar) inhiben las gram positivas y retrasan el crecimiento de las coliformes Caldo selenito F Caldo tetrationato Caldo peptona complementada Caldo tioglicolato Campy Caldo Todd-Hewitt con sangre y antibióticos Agente inhibidor: selenito de sodio. Inhibe los enterococos y retrasa el crecimiento de las coniformes. Se puede añadir cisterna que favorece el crecimiento de Salmonella. Inhibidores: sales biliares y tetrationato sódico (se genera en la reacción de tiosulfato con yodo), inhiben las bacterias gram positivas y las coniformes que no tienen la enzima tetrationato reductasa Enriquecimiento de Salmonella y Shigella en muestras de heces e hisopados rectales Enriquecimiento de Salmonella. Enriquecimiento de Salmonella Caldo con peptona ph 8,4 Enriquecimiento de especies de Vibrio, antes de subcultivar en medios más selectivos Caldo similar al tioglicolato suplementado con un poco de agar (semisólido) y antibióticos Como inhibidores lleva ácido nalidíxico y gentamicina o colistina Enriquecimiento de especies de Campylobacter antes de subcultivar en medios más selectivos Enriquecimiento de Streptococcus agalactiae de muestras genitales.

6 MEDIOS SELECTIVOS MEDIO Agar de MacConkey COMPONENTES PRINCIPALES Inhibidores: cristal violeta y sales biliares. Lactosa como agente diferencial. Rojo neutro como indicador. CARACTERÍSTICAS USOS VISUALIZACIÓN DE LAS COLONIAS Selectivo y diferencial Aislamiento de Las enterobacterias fermentadoras de bacterias gram lactosa (E. coli, Enterobacter, Klebsiella) negativas se ven rosa/rojo/violeta. E. coli puede (enterobacterias). El presentar um halo rosa alrededor de lãs colorante cristal colonias, debido a la precipitación de las violeta inhiben las sales biliares a ph muy ácido. Las no gram positivas. Las fermentadoras de lactosa (Salmonella, sales biliares inhiben Shigella,Providencia, Proteus) se ven las gram positivas y transparentes. algunas gram negativas (no las enterobacterias). Agar EMB Inhibidores: eosina y azul de metileno. Lactosa como agente diferencial. Selectivo y diferencial Aislamiento de bacterias gram negativas (enterobacterias). Los colorantes inhiben las gram positivas. Las enterobacterias fermentadoras de lactosa (Enterobacter, Klebsiella) se ven rosa/rojo/violeta. E. coli se ve de color verde metálico, debido a la precipitación de los colorantes a ph muy ácido. Las no fermentadoras de lactosa (Salmonella, Providencia, Shigella, Proteus) se ven transparentes.

7 Agar SS Agar entérico Hektoen (HE) Agar XLD Inhibidores: sales biliares, citrato, y el colorante verde brillante: Incorpora lactosa y tiosulfato como agentes diferenciales. Rojo neutro como indicador. Inhibidores: sales biliares, citrato, y los colorantes fucsina ácida y azul de bromotimol. Incorpora lactosa y tiosulfato como agentes diferenciales. Azul de bromotimol como indicador. Inhibidores: sales biliares a alta concentración, citrato y tiosulfato. Lactosa, sacarosa y xilosa como agentes diferenciales. Lisina como agente diferencial. Tiosulfato y citrato como agentes diferenciales. Indicador: rojo fenol. Selectivo y diferencial Selectivo y diferencial Selectivo y Diferencial de Salmonella y Shigella de muestras de heces o hisopados rectales. de Salmonella y Shigella de muestras de heces o hisopados rectales. de especies de Salmonella y Shigella. Colonias de Salmonella: incoloras, no fermentan la lactosa y con punto central negro (producen sulfuro). Colonias de Shigella: incoloras, sin punto central negro. Coliformes (E. coli, Klebsiella, Enterobacter) pequeñas, muy inhibidas, pero rosa/rojo, por la fermentación de la lactosa. Gram positivas no crecen. Colonias de Salmonella: incoloras o verdes, del color del medio, no fermentan la lactosa y con punto central negro (producen sulfuro). Colonias de Shigella: incoloras o verdes, del color del medio, sin punto central negro. Coliformes (E. coli, Klebsiella, Enterobacter) pequeñas, muy inhibidas, y amarillas, (fermentación de la lactosa). Gran positivos no crecen. Colonias de Salmonella rosas o rojas (no fermentan la lactosa, pero descarboxilan la lisina, suben el ph) con punto central negro (por producción de sulfuro). Las colonias de Shigella se ven transparentes (no fermentan la lactosa) sin punto central negro. Coliformes (E. coli, Klebsiella, Enterobacter) pequeñas, muy inhibidas, pero amarillas, por la fermentación de la lactosa. Gram positivos no crecen.

8 Agar desoxicolatocitrato (ADC) Inhibidores: desoxicolato y citrato. Incorpora lactosa como agente diferencial. Rojo neutro como indicador. Selectivo y Diferencial de especies de Salmonella y Shigella. Colonias de Salmonella y Shigella se ven transparentes (no fermentan la lactosa). Coliformes (E. coli, Klebsiella, Enterobacter) pequeñas, muy inhibidas, pero rosa/rojo, por la fermentación de la lactosa. Agar sulfito de bismuto Inhibidor: bismuto y el colorante verde brillante. Sulfato ferroso y sulfito como agentes diferenciales. Selectivo y Diferencial. Muy inestable, no se puede usar al cabo de una semana tras su preparación. de Salmonella typhi Colonias con bordes claros y punto central negro. Agar verde brillante Inhibidor: colorante verde brillante (inhibe gram positivas). Incluye lactosa y sacarosa. Rojo fenol como indicador. Selectivo y Diferencial de especies de Salmonella, salvo S. typhi y S. paratyphi. No se recomienda para Shigella Colonias de Salmonella rosas, blancas o transparentes, dependiendo de la fermentación de los azúcares. Agar chocolate con Isovitalex y vancomicina Agar sangre, con la sangre lisada (por calentamiento a 80ºC). Se añade isovitalex (suplemento vitamínico, aminoácidos, Fe, glucosa, etc.) y vancomicina para inhibir gram positivos Ya no es diferencial. Los eritrocitos lisados liberan la hemoglobina y otros nutrientes como factor X (hemina) y factor V (NAD). El añadido de vitaminas, aminoácidos, glucosa, Fe, etc. permite el crecimiento de Neisseria y Haemophilus Medio selectivo modificado para el aislamiento de Neisseria y Haemophilus -----

9 Agar salino manitol (Chapman) Inhibidor: cloruro sódico al 7,5%. Manitol como agente diferencial, rojo fenol como indicador. Selectivo y diferencial de estafilococos y micrococos Los estafilococos coagulasa positivos (Staphylococcus aureus) fermentan el manitol y dan colonias amarillas. Los estafilococos que no fermentan el manitol (p.e., S. epidermidis) dan colonias blancas o del color del medio. Agar Columbia CNA Agar base Columbia con colistina y ácido nalidíxico No es diferencial Aislamiento de cocos gram positivos ---- Agar selectivo para estreptococos Inhibidores: cristal violeta y antibióticos (trimetoprimsulfametoxazol y colistina). También lleva sangre. Selectivo y Diferencial de S. pyogenes (garganta) y S. agalactiae Permite ver hemólisis (beta). Agar PEA (alcohol fenil etílico) Inhibidor: alcohol fenil-etílico (inhibe gram negativas). También se puede añadir 5% sangre de oveja. Selectivo. Si lleva sangre es diferencial de cocos gram positivos (estafilococos y estreptococos). También para cocos gram positivos anaerobios si se incuba en anaerobiosis. Si lleva sangre se observan reacciones hemolíticas. Si no, no es diferencial.

10 Agar sangre lacada con kanamicina y vancomicina (KVLB) Sangre lacada (congeladadescongelada). Agentes inhibidores: antibióticos (kanamicina, inhibe algunos gram negativos aeróbios, y vancomicina, que inhibe gram positivos em general). BHI + Antibióticos Ídem. a BHI + cicloheximida (inhibe hongos saprófitos) + cloranfenicol (antibacteriano) Selectivo. No es diferencial Selectivo. No es diferencial de anaerobios, fundamentalmente gram negativos, de muestras en las que hay microbiota aerobia y anaerobia mezcladas. de hongos patógenos Agar sangre + antibióticos Agar glucosa de Sabouraud Agar base (BHI, Columbia) + 5% sangre de oveja desfibrinada + cloranfenicol + gentamicina Agentes inhibidores de bacterias: antibióticos (cicloheximida y cloranfenicol), ph levemente ácido (5,6) inhibe algunas bacterias Selectivo y Diferencial Selectivo. No es diferencial de hongos patógenos, incluso los más exigentes. Los antibióticos inhiben las bacterias. Aislamiento de hongos patógenos dermatofitos

11 Agar SABHI Agar base de Sabouraud al que se le añade BHI, para poder aislar hongos más exigentes Selectivo. No es diferencial Aislamiento óptimo de Blastomyces dermatitidis e Histoplasma capsulatum ---

12 MEDIOS ESPECÍFICOS Bordet-Gengou Bordetella pertussis Regan-Lowe Bordetella pertussis Agar sangre de caballo con carbón Bordetella pertussis y B. parapertussis Agar Campy con sangre Campylobacter Agar Skirrow Campylobacter Agar CCF (fructosa, cicloserina, cefoxitina) Clostridium difficile CCYE Clostridium difficile Agar cistina-telurito Corynebacterium diphtheriae Pico de flauta de Loeffler Corynebacterium diphtheriae BCYE (agar tamponado con carbón y extracto de levadura) Legionella pneumophila Agar sangre de caballo con bacitracina Legionella pneumophila Lowestein-Jensen Mycobacterium tuberculosis Agar Thayer-Martin Neisseria Martin-Lewis Neisseria New York City Neisseria gonorrhoeae (también micoplasmas genitales) Diamond Trichomonas vaginalis Agar TCBS (tiosulfato-citrato-bilis-sacarosa) Vibrio cholerae Agar CIN (cefsulodina, irgasán, novobiocina) Yersinia