MICROBIOLOGÍA CLÍNICA MEDIOS DE CULTIVO (CURSO )

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1 MICROBIOLOGÍA CLÍNICA MEDIOS DE CULTIVO (CURSO ) (GRUPOS 1 y 2) Agar BCYE (agar tamponado con extracto de levadura y carbón, buffered, charcoal, yeast extract ) Medio rico suplementado con L-cistina y pirofosfato férrico que permite el crecimiento y enriquecimiento de especies de Legionella. Cuando se le añade polimixina B, vancomicina y anisomicina es selectivo para Legionella y Nocardia, ya que inhibe bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente. Agar BHI (infusión cerebro-corazón, brain-heart ) La infusión cerebro-corazón es una fórmula muy rica que puede emplearse, ya sea como caldo o medio sólido, con sangre adicional o sin ésta, para el crecimiento de una gran variedad de microorganismos. Los componentes clave incluyen infusión de distintos tejidos animales con el agregado de peptona, tampón fosfato y una pequeña concentración de glucosa que proporciona una fuente de energía fácilmente accesible a los microorganismos. Los caldos infusión cerebro-corazón se emplean con frecuencia como medio para hemocultivo y como medio base para muchas pruebas metabólicas, en especial para la identificación de estreptococos. Agar BHI con antibióticos El agar BHI adicionado de cloranfenicol y cicloheximida se utiliza para el aislamiento selectivo de hongos patógenos. La cicloheximida inhibe el crecimiento de hongos saprófitos mientras que el cloranfenicol actúa como agente antibacteriano tanto de bacterias Gram positivas como Gram negativas. La incorporación de ambos antimicrobianos proporciona una mayor selectividad frente a hongos saprófitos y bacterias. Agar BHI con 5% sangre de oveja El agar infusión cerebro-corazón con 5-10% de sangre de oveja adicionado de cloranfenicol y gentamicina inhibe el crecimiento de bacterias, pero permite el crecimiento de hongos, incluso de los más exigentes. Este agar se emplea como medio de aislamiento primario para el crecimiento de hongos, ya que permite una mejor recuperación de patógenos que el agar glucosa de Sabouraud. Agar Campy con sangre Medio selectivo para el aislamiento de especies de Campylobacter. El medio está suplementado con sangre y con cefoperazona, vancomicina y anfotericina B para inhibir el desarrollo de la mayoría de las bacterias Gram negativas, Gram positivas y levaduras, respectivamente. Agar CCF (fructosa, cicloserina, cefoxitina) Medio utilizado para el aislamiento selectivo de Clostridium difficile en muestras de heces u otros materiales intestinales. Contiene rojo neutro como indicador. Cicloserina y cefoxitina inhiben la microbiota intestinal. C. difficile a las 48 horas de incubación forma colonias rizoides amarillentas que tienen estructuras internas cristalinas birrefringentes. Agar chocolate Este medio usa la misma base que el agar sangre. En un principio, los eritrocitos se adicionaban a la base fundida y luego se elevaba la temperatura (alrededor de 85 C) para lisar parcialmente las células, lo que otorgaba al medio el color pardo-chocolate. Actualmente, la hemoglobina y otros nutrientes presentes en los lisados de los glóbulos rojos, como hemina (factor X) y coenzima NAD (factor V), se añaden como suplementos a un agar base muy rico. También se puede agregar IsoVitaleX, un suplemento definido que proporciona el factor V, vitaminas, aminoácidos, coenzimas, glucosa, iones férricos y otros factores que favorecen el crecimiento de especies exigentes.

2 Agar chocolate con IsoVitaleX y vancomicina Medio selectivo modificado para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis a partir de muestras clínicas que contienen microbiota mixta de bacterias y hongos. La vancomicina es activa frente a bacterias Gram positivas. Agar CIN (cefsulodina, irgasán, novobiocina) Medio selectivo para Yersinia. Contiene manitol y rojo neutro como indicador. Las colonias de Yersinia presentan un borde transparente con un amplio centro rojo muy intenso. No es totalmente específico para Yersinia, ya que pueden crecer otros bacilos Gram negativos, en particular Citrobacter freundii, que presenta colonias semejantes a las de Yersinia. Agar cistina-telurito Medio utilizado para el aislamiento de Corynebacterium diphtheriae. Sobre la base de agar infusión se agrega 5% de sangre de oveja. La reducción del telurito de potasio por C. diphtheriae produce colonias negras. Agar CLED (cistina, lactosa, deficiente en electrolitos) Es un medio diferencial recomendado para el análisis bacteriológico de orina ya que en él crecen profusamente la gran mayoría de las bacterias, tanto Gram negativas como Gram positivas, que provocan infecciones urinarias, pudiéndose diferenciar o identificar sus respectivas colonias. Debido a su deficiencia en electrolitos (no lleva cloruro sódico), no permite que las colonias de Proteus invadan la placa de cultivo, lo que facilita el recuento. La lactosa es el único carbohidrato presente. La cistina facilita el crecimiento de los coliformes dependientes de ella. El azul de bromotimol permite distinguir las colonias de bacterias fermentadoras de las que no lo son. Los microorganismos fermentadores de lactosa dan lugar a colonias de color amarillo. Los no fermentadores dan lugar a colonias traslúcidas o de color claro. La alcalinización del medio provoca la aparición de un color azul intenso. Agar CNA (colistina, ácido nalidíxico) Agar base de Columbia adicionado de colistina y ácido nalidíxico que suprimen por completo el crecimiento de enterobacterias y de Pseudomonas, pero permiten el desarrollo de estafilococos, estreptococos, enterococos y levaduras. Ciertos microorganismos Gram negativos como Gardnerella vaginalis y algunas especies de Bacteroides pueden crecer muy bien en este medio. Se puede añadir 5% de sangre desfibrinada que proporciona más nutrientes y la capacidad de detectar reacciones hemolíticas. Agar Columbia Es una excelente base para el crecimiento de microorganismos exigentes y para la buena visualización de hemólisis con el agregado de sangre. Incluye peptona, tripteína, extracto de levadura y extracto de corazón que favorecen el desarrollo de microorganismos exigentes. El almidón incrementa el desarrollo de neiserias y las reacciones de hemólisis de algunos estreptococos. Tiene la ventaja de permitir la adición de sangre o de antibióticos entre otras cosas, obteniéndose así un medio más enriquecido o selectivo de acuerdo al aditivo. Agar desoxicolato-citrato (ADC) Medio altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella y Shigella. El desoxicolato sódico inhibe o suprime considerablemente el crecimiento de coliformes y bacterias Gram positivas. Sin embargo, en ocasiones crecen coliformes, y cuando se encuentran en grandes cantidades producen ácido a partir de la lactosa, precipitan la sal biliar y dan un medio rojo que hace difícil la detección de patógenos. Incluye rojo neutro como indicador. Las colonias de Salmonella y Shigella son incoloras. Agar EMB (eosina, azul de metileno, eosin-methylen blue, Agar de Levine) Es un medio diferencial y selectivo para aislar y detectar enterobacterias en muestras mixtas. Los colorantes de anilina (eosina y azul de metileno) inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y a las Gram negativas exigentes. También se combinan precipitando a ph ácido, actuando como indicadores de producción de ácidos. El medio incluye lactosa, lo que permite la diferenciación de los fermentadores de lactosa de los no fermentadores. Los fermentadores fuertes de lactosa, sobre todo Escherichia coli, producen colonias de color negro verdoso con brillo metálico. Los productores más débiles de ácidos, forman colonias de color violeta. Los no fermentadores de lactosa forman colonias transparentes.

3 Agar glucosa de Sabouraud Este medio fue desarrollado para el cultivo de hongos patógenos, especialmente de los productores de micosis superficiales. En la actualidad se recomienda sólo para el aislamiento primario de dermatófitos, con el agregado de cicloheximida y cloranfenicol. El ph final (alrededor de 5,6) es mucho menor que el de la mayoría de los medios y tiende a eliminar el crecimiento bacteriano. Los subcultivos de los hongos aislados originalmente en BHI pueden presentar una morfología más uniforme en agar glucosa de Sabouraud, por esto es útil para la identificación de hongos una vez aislados. Agar HE (agar entérico de Hektoen) Este medio es un ejemplo de agar selectivo y diferencial que no necesita ser esterilizado en autoclave porque son muy pocos los microorganismos que pueden crecer en él. Las concentraciones de sales biliares y de los colorantes azul de bromotimol y fucsina ácida son lo suficientemente altas como para inhibir el desarrollo de la mayoría de la microbiota fecal normal. Está indicado para el aislamiento de Salmonella y Shigella. Como elementos diferenciadores se incorporan lactosa, sacarosa y salicina que no son fermentadas ni por Salmonella ni por Shigella. Los organismos fermentadores de lactosa, al acidificar el medio alrededor de la colonia, toman un color amarillo. La adición de citrato férrico amónico y tiosulfato sódico permite la visualización del sulfhídrico por la formación de un precipitado negro alrededor de las colonias. Las colonias de Shigella son verdes o transparentes, y las de Salmonella, verdes o transparentes con un precipitado negro en el centro Agar inclinado de Loeffler Medio de cultivo que contiene glucosa y suero, utilizado para el aislamiento de Corynebacterium diphtheriae. Agar Lowenstein-Jensen Este medio fue desarrollado como agar para enriquecimiento selectivo de micobacterias. El colorante verde de malaquita inhibe el crecimiento de contaminantes que son capaces de sobrevivir al tratamiento inicial de la muestra. Los medios con base de Lowenstein son los únicos de uso común que requieren el agregado de huevos homogeneizados, lo cual obliga a la esterilización por tindalización. La utilización de la proteína de los huevos por parte de algunas micobacterias les permite producir niacina, una característica diferencial importante. Actualmente se emplean muchas modificaciones del medio básico, incluyendo la adición de glicerol o la de antibióticos y ácido ribonucleico como factor de crecimiento. Agar MacConkey Es un medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitación de las sales biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo que se observa fácilmente en el medio por la aparición de zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes. Agar Martin-Lewis Modificación del agar Thayer-Martin, consistente en la sustitución de nistatina por anisomicina (que se conserva durante más tiempo y tiene una mayor actividad contra las levaduras) y una mayor concentración de vancomicina. Agar Mueller-Hinton Es un medio de cultivo rico, diseñado especialmente para hacer ensayos de sensibilidad y recomendado por el Comité de la Organización Mundial de la Salud sobre estandarización de pruebas de susceptibilidad. Este Comité lo propuso ya en 1970 para determinar la susceptibilidad de los microorganismos frente a los antimicrobianos, por no llevar incorporados inhibidores de los antimicrobianos, como, por ejemplo, el PABA (ácido p-amino benzoico), que anula la actividad de sulfamidas y antibióticos y debido a su reproducibilidad y aceptación por las personas que trabajan en este campo. Desde entonces su empleo se ha generalizado.

4 El agar Mueller-Hinton se utiliza para la realización del ensayo de difusión en placa, en tanto que el caldo Mueller-Hinton se emplea para la determinación de la concentración mínima inhibidora en el ensayo de diluciones seriadas. Agar nutritivo Medio sólido que se prepara añadiendo agar a un caldo nutritivo. Existen diversas clases de agar nutritivo comercializadas: agar infusión de cerebro y corazón (agar BHI), agar triptona de soja (TSA), agar brucela, agar Columbia. Agar NYC ( New York City ) Medio selectivo para Neisseria gonorrhoeae. Suplementado con 3% de hemoglobina, plasma de caballo y vancomicina, colistina, anfotericina B y trimetoprim. Agar PEA (alcohol feniletílico, phenylethanol ) Agregando alcohol feniletílico a una base con peptona, extracto de carne y agar se obtiene un medio que inhibe el desarrollo de las bacterias Gram negativas. La adición de un 5% de sangre de oveja proporciona nutrientes para estreptococos y estafilococos. Este medio también se emplea para el cultivo de microorganismos anaerobios que no son inhibidos por el alcohol. Después de su preparación las placas con alcohol feniletílico huelen a rosas. Agar Regan Lowe Medio de enriquecimiento y selectivo para Bordetella pertussis. Es un agar con carbón, suplementado con sangre de caballo, cefalexina y anfotericina B. Agar SABHI (agar base de Sabouraud, infusión de cerebro y corazón) Este medio es una combinación del agar glucosa de Sabouraud y el agar BHI. Se emplea para el aislamiento y cultivo de hongos patógenos como los dermatófitos y también no patógenos. Es útil para la máxima recuperación de Blastomyces dermatitidis e Histoplasma capsulatum de tejidos y fluidos corporales. La adición de sangre incrementa la recuperación de H. capsulatum y ayuda la conversión de H. capsulatum y B. dermatitidis a la fase de levadura (hongos dimórficos). La incorporación de antibióticos de amplio espectro como el cloranfenicol inhibe el crecimiento de muchas bacterias Gram negativas aunque puede inhibir el crecimiento de algunos hongos. Agar salino manitol (SM, MS mannitol saline, Medio de Chapman) Es un medio selectivo para estafilococos debido a la alta concentración de cloruro sódico (75 g/l). La mayoría de los microorganismos no crecen a esta concentración de sal, mientras que los estafilococos, entre los que se encuentran los del género Staphylococcus, sí lo hacen. Incorpora manitol como fuente de carbono y rojo fenol como indicador, lo que permite aprovechar la correlación que existe entre la patogenia y la capacidad fermentadora del manitol de los estafilococos para establecer un diagnóstico presuntivo y sirve, por lo tanto, como indicativo de la presencia de Staphylococcus aureus. Los estafilococos patógenos fermentan el manitol y producen colonias amarillas. Los estafilococos no patógenos no lo fermentan y producen colonias de color rosa. Agar sangre (AS ó BA, blood agar) Medio muy rico que permite el crecimiento de todos los microorganismos con importancia clínica excepto el de los más exigentes. Se prepara añadiendo un 5% de sangre desfibrinada (oveja, caballo, conejo, etc.) a un agar base rico (agar Columbia, por ejemplo). Se utiliza también para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos, por lo que se considera un medio diferencial. Ciertas bacterias producen enzimas extracelulares que actúan sobre los glóbulos rojos. Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que poseen: alfa, beta o gamma. Para leer con exactitud la hemólisis producida, se debe levantar la placa de agar sangre y observarla contra la luz. La hemólisis de tipo alfa es una hemólisis incompleta, caracterizada por la destrucción parcial de la membrana de los eritrocitos y pérdida de algo de hemoglobina en el agar. A simple vista este tipo de hemólisis se detecta por la aparición de una coloración verdosa alrededor de la colonia. La beta-hemólisis se caracteriza por la destrucción total de la membrana por lo que se detecta por la aparición de un halo transparente alrededor de la colonia. Cuando los microorganismos no producen ningún tipo de hemólisis se dice que son gamma-hemolíticos.

5 Agar sangre con disco de bacitracina Se utiliza para la identificación de estreptococos beta-hemolíticos del grupo A de Lancefield ya que estos son sensibles a la bacitracina a la concentración que se encuentra en los discos (0,04 U). El antibiótico no inhibe el desarrollo de otros estreptococos beta-hemolíticos. Sobre la placa de agar sangre se coloca un disco con bacitracina y tras la incubación se observa la presencia de halo de inhibición (estreptococos beta-hemolíticos presuntamente del grupo A) o la ausencia del mismo (estreptococos beta-hemolíticos que presuntamente no pertenecen al grupo A). Agar sangre con estría estafilocócica Muchas bacterias y levaduras sintetizan y secretan NAD (factor V) durante el crecimiento, tal es el caso de Staphylococcus aureus. En cultivos mixtos, las especies de Haemophilus que requieren este factor pueden crecer como colonias puntiformes alrededor de las colonias de estos otros microorganismos (satelitismo). Esto proporciona una técnica para detectar especies de Haemophilus en muestras mixtas y una prueba presuntiva para la identificación del género. La técnica consiste en sembrar una posible colonia de Haemophilus en estría (como un césped) en agar sangre. Posteriormente, se hace una única estría sobre la placa con un cultivo de S. aureus. A las 24 horas pueden observarse las pequeñas colonias grises de Haemophilus dentro del área hemolítica adyacente al crecimiento de los estafilococos. Agar sangre con suplementos para anaerobios Es un medio rico, sin inhibidores, que permite el desarrollo de gran cantidad de especies anaerobias. Contiene un agar base, como el agar Columbia, adicionado de sangre de oveja, extracto de levadura, hemina y vitamina K. Agar sangre de caballo con bacitracina Existen varios medios selectivos que utilizan fórmulas con agar sangre como base para el aislamiento de Haemophilus influenzae a partir de muestras clínicas, como el agar infusión de cerebro y corazón con sangre de caballo al 5% y bacitracina. En éste, la infusión de cerebro y corazón proporciona los nutrientes generales y la sangre de caballo los factores V y X para favorecer el crecimiento de H. influenzae. Se añade bacitracina para inhibir la mayor parte de la microbiota, mientras que H. influenzae es resistente a este agente antimicrobiano. Agar sangre de caballo con carbón Es un medio selectivo para el aislamiento de Bordetella pertussis y B. parapertussis. Incluye sangre de caballo al 7% y cefalexina que suprime parcialmente la microbiota normal de las vías respiratorias. El desarrollo posterior de este medio dio lugar al agar Regan-Lowe. Agar sangre kanamicina-vancomicina (KV) El medio KV es útil para el aislamiento selectivo de especies de anaerobios (Bacteroides, Prevotella, Fusobacterium, Veilonella) en muestras clínicas que contienen bacterias aerobias y anaerobias mezcladas. La kanamicina inhibe el desarrollo de muchos, pero no todos, bacilos Gram negativos anaerobios facultativos y la vancomicina inhibe el de las bacterias Gram positivas en general (incluidas la mayoría de anaerobias y no anaerobias). Agar selectivo para estreptococos Es una modificación del agar sangre de oveja, que contiene cristal violeta, trimetoprim~sulfametoxasol y colistina en concentraciones adecuadas para inhibir a la mayoría de los estreptococos excepto Streptococcus pyogenes y S. agalactiae. La beta hemólisis se observa fácilmente. El medio es efectivo para la siembra primaria de hisopos de garganta para la detección de estreptococos del grupo A. Agar Skirrow Preparado con una base como agar brucela, TSA o agar Columbia, enriquecida con sangre de oveja al 5% y que se hace selectivo para Campylobacter por la adición de vancomicina, polimixina y trimetoprim. Agar SS (Salmonella-Shigella) Lleva sales biliares, citrato sódico y férrico, tiosulfato y el colorante verde brillante. El carácter diferencial se basa en la fermentación de la lactosa. Incorpora rojo neutro. Las colonias lactosa positivas son de color rojo,

6 mientras que las lactosa negativas son transparentes (Shigella). Las colonias de Salmonella son transparentes con el centro negro. Agar sulfito de bismuto Medio para el aislamiento de Salmonella typhi. El sulfato ferroso actúa como indicador en la producción de sulfhídrico. El sulfito de bismuto y el verde brillante inhiben considerablemente el crecimiento de bacterias contaminantes. S. typhi produce colonias con centro negro y bordes claros que a las 48 horas adquieren halo negro grisáceo y brillo metálico. Agar TCBS (tiosulfato, citrato, sales biliares) Medio selectivo para especies del género Vibrio debido a las altas concentraciones de tiosulfato sódico, citrato férrico y cloruro sódico que inhiben a la mayoría de las enterobacterias. Por la presencia de sacarosa y el azul de timol y bromotimol como indicadores, permite diferenciar los microorganismos que fermentan este azúcar, como V. cholerae (colonias amarillas), de otros que no lo fermentan, como V. parahaemolyticus (colonias verdes), y, entre éstos, los productores de sulfhídrico (generalmente Proteus). Agar Thayer-Martin Este medio es una modificación del agar chocolate para que sea selectivo para las neiserias patógenas. Estas modificaciones incluyen la adición de colistina (para inhibir otras bacterias Gram negativas), vancomicina (para inhibir bacterias Gram positivas) y nistatina o anisomicina (para inhibir levaduras). El agar Thayer-Martin incorpora nistatina. El agar Thayer-Martin Modificado (MTM) incluye trimetoprim para inhibir a Proteus. Agar triptona-soja (TSA) Medio rico de uso general para el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos. Se produce por digestión enzimática de la soja y de la caseína. Con frecuencia se utiliza como agar base para otros tipos de medios, como agar sangre, por ejemplo. En este medio pueden crecer algunos microorganismos exigentes como ciertas especies de Brucella, Corynebacterium, Listeria, Neisseria y Vibrio. Agar verde brillante Medio altamente selectivo para el aislamiento de especies de Salmonella excepto S. typhi y S. paratyphi. No se recomienda para el aislamiento de Shigella. Incluye lactosa, sacarosa y rojo fenol. El verde brillante es el agente inhibidor. Las colonias de Salmonella se ven de color rosa o blanco, o transparentes, sobre un fondo rojo. Agar XLD (xilosa, lisina, desoxicolato) Como el agar de Hektoen, este medio es diferencial y selectivo para Salmonella y Shigella. No necesita ser esterilizado en autoclave. Las sales biliares inhiben a muchas enterobacterias y microorganismos Gram positivos. El indicador rojo fenol permite la diferenciación de los no fermentadores de lactosa (Salmonella y Shigella) como colonias incoloras (rosa pálido). El citrato de hierro y amonio permite la visualización de microorganismos productores de sulfhídrico como colonias con centros negros. Los microorganismos que fermentan los carbohidratos del medio (xilosa, lactosa y sacarosa) dan lugar a colonias amarillas. Caldo con carne picada Este medio se emplea para enriquecer y conservar el desarrollo de bacterias anaerobias. Los trozos de carne proporcionan un sustrato proteico para las enzimas proteolíticas, que actúan como sustancias reductoras manteniendo un potencial de óxido-reducción bajo y de algún modo evitan que las bacterias de crecimiento rápido sobrepasen a las formas más lentas. Si se coloca una capa de vaselina líquida sobre un caldo con carne picada en el que se ha cultivado una bacteria anaerobia, muchos microorganismos permanecerán viables, a temperatura ambiente, durante varios meses. El medio con carne picada no necesita ser incubado en anaerobiosis para permitir el crecimiento de los anaerobios. Caldo nutritivo Contiene extracto de carne y cloruro sódico. Puede complementarse con peptonas, extracto de levadura y/o glucosa. Asimismo, puede incorporar un tampón. Este tipo de medio se encuentra comercializado bajo diferentes denominaciones, según su formulación más o menos rica: caldo de infusión de cerebro y corazón (BHI), caldo

7 triptona de soja (TSB), caldo brucela, caldo Columbia, etc. Caldo para Gram negativos Se emplea como caldo selectivo para el cultivo de Salmonella y Shigella a partir de muestras de heces e hisopos rectales. Contiene citrato de sodio y desoxicolato sódico (una sal biliar) que destruyen los microorganismos Gram positivos e inhiben la multiplicación temprana de los coliformes. La adición de mayor cantidad de manitol que de glucosa estimula el crecimiento de los patógenos fermentadores de manitol y no es favorable para Proteus. El medio se tampona para mantener el ph neutro aún después de la producción de metabolitos bacterianos ácidos. Para obtener el máximo beneficio de sus propiedades selectivas, el caldo GN debe ser subcultivado después de 6-8 horas tras la inoculación e incubación iniciales, ya que después de este período los coliformes sobrepasan a los patógenos. Caldo selenito F Caldo con selenito sódico que en ocasiones se suplementa con cisteína, diseñado para el enriquecimiento de salmonelas. El selenito inhibe el crecimiento de coliformes y enterococos en las primeras 12 horas de incubación mientras que Proteus y Salmonella no son inhibidos. Caldo tetrationato Es selectivo para especies de Salmonella y Shigella. Caldo base de peptona que incluye iodo, ioduro potásico, sales biliares, tiosulfato de sodio y tetrationato (generado en el medio por el agregado de la solución iodoiodurada) que permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa, como Salmonella, pero inhiben el desarrollo de microbiota acompañante como bacterias Gram positivas y resto de enterobacterias. Caldo tioglicolato Es el caldo más comunmente usado en microbiología clínica. Favorece el crecimiento de anaerobios, aerobios, microaerófilos y microorganismos exigentes. Contiene 0,075% de agar para evitar que las corrientes de convección transporten el oxígeno atmosférico a toda la masa del caldo. El ácido tioglicólico también actúa como agente reductor, disminuyendo aún más el potencial de óxido-reducción del medio. Con el agregado de muchos nutrientes como caseína, extractos de levadura y de carne, vitaminas y otros, el medio permite el crecimiento de la mayoría de las bacterias patógenas. Se puede distinguir la diferencia entre el desarrollo difuso de los bacilos facultativos Gram negativos y el crecimiento globuloso de los cocos Gram positivos. Los aerobios estrictos tienden a crecer formando una película delgada sobre la superficie del caldo. Para el cultivo de los anaerobios es mejor suplementar el caldo tioglicolato con hemina, vitamina K y bicarbonato sódico. Caldo tioglicolato Campy Medio de apoyo selectivo para la recuperación de especies de Campylobacter. Se trata de un caldo tioglicolato suplementado con una concentración aumentada de agar y antibióticos. Caldo Todd-Hewitt con sangre y antibióticos Se utiliza para la selección y enriquecimiento de Streptococcus agalactiae en muestras de tracto genital femenino. El caldo Todd-Hewitt, que se emplea para el enriquecimiento de estreptococos, se suplementa con ácido nalidíxico y gentamicina o colistina para una mayor selectividad. Medio de Diamond Medio de cultivo empleado que favorece considerablemente el crecimiento y la multiplicación de Trichomonas vaginalis. El medio de Diamond contiene tripticasa de peptona, extracto de levadura, maltosa, L- cisteína, ácido L-ascórbico, suero bovino, penicilina G y estreptomicina. La incorporación de agar en el medio limita a los microorganismos contaminantes en su mayoría a la porción superior del tubo del ensayo, mientras que ayuda a mantener las condiciones microaerófilas en el fondo del tubo, donde Trichomonas se encuentra en grandes cantidades. Medio de Kligler La prueba de Kligler es una prueba múltiple que permite conocer si una determinada bacteria (inicialmente se diseñó para la identificación de enterobacterias) produce ácidos y gases a partir de la glucosa, de la lactosa o de ambos a la vez. También sirve para investigar si es capaz de producir sulfhídrico. El medio incorpora glucosa y

8 lactosa en proporción 1:10, respectivamente. Lleva, además, una fuente de azufre (tiosulfato sódico) y una fuente de hierro (sulfato ferroso). Como indicador ácido-base se añade rojo fenol (ph neutro: color rojo; ph ácido: color amarillo). La parte de arriba del medio se denomina pico de flauta y la de abajo, fondo. Ambas deben tener la misma altura, aproximadamente 3 cm. La siembra se puede realizar con asa o con hilo (fondo en picadura y pico de flauta por estrías) y la incubación es de 24 a 48 horas a 37ºC. Interpretación de los resultados: 1. Fondo y pico de flauta amarillos (ácido) gases). La bacteria fermenta la glucosa y la lactosa (si el medio aparece roto, significará que se han producido 2. Fondo negro y pico de flauta amarillo (ácido) La bacteria fermenta la glucosa y la lactosa y produce sulfhídrico (aunque no se vea el color amarillo en la zona que cubre el precipitado negro, debe suponerse que está amarillo porque es necesario un ph ácido para que se forme el precipitado). El sulfhídrico es incoloro, pero cuando en el medio hay una fuente de hierro se forma sulfuro de hierro que precipita en un entorno ácido con un color negro característico. 3. Fondo amarillo (ácido) y pico de flauta rojo (alcalino) La bacteria fermenta sólo la glucosa. A las pocas horas de incubación tanto el fondo como el pico de flauta estarán amarillos debido a la utilización de la glucosa y al descenso del ph por la producción de ácidos. A medida que transcurre el tiempo, la formación de aminas en la parte que está en contacto con el aire, debido a reacciones de descarboxilación oxidativa de los aminoácidos, provoca la alcalinización del medio, lo que hace virar el indicador a color rojo. En profundidad, donde no hay oxígeno, se mantiene el color amarillo. 4. Fondo negro y pico de flauta rojo (alcalino) La bacteria fermenta sólo la glucosa y produce sulfhídrico. 5. Fondo y pico de flauta rojos (alcalino) La bacteria no fermenta la glucosa ni la lactosa.