27 de Noviembre QFB. María del Rosario Vázquez Larios
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- Juan Luis Castilla Ramos
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1 Fortaleciendo las competencias del Laboratorio Clínico 1 er Encuentro de Innovación en el Laboratorio Clínico. 27 de Noviembre 2015 QFB. María del Rosario Vázquez Larios
2 CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE IDENTIFICACIÓN MICROBIANA Métodos basados en criterios morfológicos Métodos basados en tinción diferencial Métodos basados en pruebas bioquímicas Métodos basados en pruebas serológicas Métodos basados en detección molecular
3 OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA Examen del material fresco: Examen directo de las muestras. Directas/modificaciones - Solución salina/agua estéril. - Hidróxido de potasio 10%. - Azul de metileno Loeffler - Lugol Examen material fijado y coloreado: - Tinción de Gram - Tinción Ziehl Neelsen - Naranja de acridina. - Auramina Rodamina
4 IDENTIFICACION COCOS GRAMPOSITIVOS BACTERIA CATALASA OXIDASA BACITRACINA 0.04 U Staphylococcus + -- R Micrococcus + + S Enterococcus R
5 ESTAFILOCOCOS BACTERIA Coagulasa Agar sal y manitol Agar DNasa S. aureus Estafilococos coagulasa negativo -- --/+ --
6 ESTAFILOCOCOS BACTERIA Coagulasa Novobiocina Hemólisis S. aureus + S BETA S. epidermidis -- S NO? S. saprophyticus -- R BETA PRUEBAS BIOQUIMICAS: Azúcares, Urea VP.
7 GÉNERO STREPTOCOCCUS Streptococcus. Streptococcus pneumoniae. Estreptococos ß-hemolíticos. Estreptococos del grupo viridans. Enterococcus. Leuconostoc. Pediococcus Resistentes a vancomicina. Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002:
8 CARACTERÍSTICAS Cocos grampositivos. Disposición en pareja o en cadenas. Anaerobios facultativos. Algunos poseen cápsula. Catalasa negativa. Bacterias Fastidiosas Requieren de CO 2 24 a 48 horas para su crecimiento óptimo. Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002:
9 CLASIFICACIÓN Serología o sistema Rebeca Lancelfield (1930). Polisacáridos de pared celular: Grupos A, B, C, D, F y G. Acidos lipoteicoicos: Grupo D y Enterococos. Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002:
10 PATRONES DE HEMÓLISIS -hemólisis -hemólisis -hemólisis Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10 th Edition. Mosby. St Louis 1998.
11 CLASIFICACIÓN Grupo serológico Hemólisis S. pyogenes A S. anginosus A, C, F, G S. agalactiae B S. dysgalactiea C, G S. bovis/enterococo D E. grupo viridans No agrupables S. pneumoniae No agrupable Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002:
12 IDENTIFICACIÓN LAP = Leucina aminopeptidasa PYR = Pyrrolidonylarylamidasa Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10 th Edition. Mosby. St Louis 1998.
13 IDENTIFICACIÓN Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10 th Edition. Mosby. St Louis 1998.
14 Streptococcus pneumoniae Crecimiento en agar sangre (+) Hemólisis alfa o gamma Optoquina > 14 mm (< 14 mm) Pneumococo Aglutinación Solubilidad bilis (+) Pneumococo Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10 th Edition. Mosby. St Louis 1998.
15 ESTREPTOCOCOS ß HEMOLITICOS Crecimiento en agar sangre (+) Hemólisis ß (+) Bacitracina/serología (--) S. pyogenes Estreptococo grupo B o C CAMP (+) (--) S. agalactiae S. equi Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10 th Edition. Mosby. St Louis 1998.
16 PRUEBA DE CAMP S. agalactiae Control + Staphylococcus aureus ATCC Incubación s/co 2 Forbes. BA. Sahm DF. Weissfeld AS. Bailey & Scott`s. Diagnostic Microbiology. 10 th Edition. Mosby. St Louis 1998.
17 CLASIFICACIÓN DE ESTREPTOCOCOS DEL GRUPO VIRIDANS Grupo Especies S. anginosus S. anginosus, S. constellatus, S. bovis S. intermedius, S. alactolyticus, S. equinus. S. mitis S. mitis, S. pneuminae, S. sanguis, S. parasanguis, S. gordonii, S. crista. S. oralis S. mutans S. mutans, S. sobrinus, S. cricetus, S. ratus S. downei, S. macacae S. salivarius S. salivarius, S. vestibularis, S. thermophilis Sin agrupar S. acidominimus, S. sutis Facklam R. What happened to the Streptococci: Overview of Taxonomic and Nomenclature Changes. Clin. Microbiol. Rev:2002:
18 Crecimiento en agar sangre (+) Hemólisis alfa o gamma Pneumococo Optoquina (+) (--) Bilis esculina (+) (-) Enterococos Estreptococos grupo viridans 6.5% NaCl PRUEBAS BIOQUIMICAS: Hidrólisis de esculina, hidrólisis de pirrolidonil-ß naftilamina (PYR), VP, fermentación de carbohidratos (rafinosa, manitol, lactosa).
19 ENTEROCOCOS Hemólisis alfa o gamma Pneumococo Optoquina (+) (--) Bilis esculina (+) (-) Enterococos Estreptococos grupo viridans 6.5% NaCl
20 ENTEROCOCOS
21 ENTEROBACTERIAS Medios de aislamiento primario: Agar de MacConkey. Agar EMB. Medios selectivos. Agar Salmonella Shigella. Agar entérico. Agar xilosa-lisina-desoxicolato.
22 ENTEROBACTERIAS Características diferenciales: Utilización de carbohidratos Reacciones IMViC Indol, RM, VP Citrato.
23 Características diferenciales: Producción de ureasa. Descarboxilación de lisina, orinitina y arginina. Producción de ácido sulfhídrico Movilidad. ENTEROBACTERIAS
24 NO ENTEROBACTERIAS Son incapaces de utilizar los carbohidratos como fuente de energía o que los degradan por la vía oxidativa. Características diferenciales: Oxidasa positiva (generalmente). Agar MacConkey (lactosa negativa) Prueba OF
25 Pseudomonas Acinetobacter
26 NO ENTEROBACTERIAS Características diferenciales: Actividad citocromo oxidasa. Crecimiento en agar MacConkey y SS. Presencia de pigmento. Reducción de NO 3, NO 2. Producción de indol. Producción de ureasa.
27 NO ENTEROBACTERIAS Características diferenciales: Sensibilidad a penicilina, colistina y polimixina. Hidrólisis de la esculina. Desarrollo a 42ºC. Licuación de la gelatina. Hemólisis Utilización de citrato.
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30 Hay más en ti, hay más de lo que crees, puedes hacer más de lo que piensas, vales más de lo que supones, a condición de que pongas en ello tu pasión y tu esfuerzo. Plus est en toi, es una frase que debieran ustedes recordar cuando flaqueen. No voy a rendirme, hay más ánimo en mí, yo soy capaz de hacer todavía más. Dr. Ignacio Chávez
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