Microbiota de la leche materna

Transcripción

1 Microbiota de la leche materna Nadia Raquel García Lara IV REUNIÓN BANCOS DE LECHE HUMANA

2 Podemos hablar de una microbiota de la leche materna?

3 Diversidad bacteriana leche materna La leche materna NO es un fluido estéril Tradicionalmente aislamiento de bacterias en LM se consideraba contaminación Parto intestino/vagina madre boca neonato contaminación LM o piel pecho Estudios flora LM e intestino lactante (vaginal/cesárea) se aíslan las mismas bacterias ácido lácticas que no se aíslan en piel del pecho ni vagina Martín R. J Pediatrics 2003

4 Diversidad bacteriana leche materna Nº AISLAMIENTOS IDÉNTICOS (perfil RAPD idéntico) Martín R. J Pediatrics 2003

5 Diversidad bacteriana leche materna En estudios de muestras de LM (extracción manual) de mujeres sanas, hijos a término sanos, se objetivan especies bacterianas que se aíslan de forma constante Resultados similares en estudios realizados en diferentes partes del mundo verdadera microbiota de LM

6 Diversidad bacteriana leche materna Medios cultivo, actualmente técnicas moleculares mucho más sensibles Especies bacterianas que se aíslan repetidamente Gran variabilidad interindividual La leche de cada mujer tiene una composición bacteriana única, similar a lo que ocurre con la microbiota intestinal de niños y adultos

7 Diversidad bacteriana leche materna Estudios con métodos de cultivo recuentos totales Martín R. J Pediatrics 2003 Heikkila M.P. J Appl Microbiol 2003 Origen de las bacterias de la leche materna es el tracto gastrointestinal materno RUTA ENTEROMAMARIA Pérez P.F. Pediatrics 2006

8 Ruta enteromamaria Probisearch

9 Diversidad bacteriana leche materna Género Staphyloccus Principal S. epidermidis También otros S. coagulasa negativo y S. aureus El más frecuente ( 100% de las mujeres) El más numeroso (recuentos>10 3 UFC/ml) *Presencia de S. epidermidis en heces es un rasgo diferencial de lactantes amamantados Adlerberth. Ped Res 2006

10 Diversidad bacteriana leche materna Género Streptococcus Principal S. viridans (S. salivaris, mutis) También S. agalactiae Género Enterococcus Principal E. faecium También E. faecalis No expresión de factores virulentos ni resistencia vancomicina E. faecium Reviriego C. J. Human Lact. 2005

11 Diversidad bacteriana leche materna Bacterias ácido lácticas o Lactobacillus, Leuconoctoc, Lactococcus, Weisella, Bifidobacterias Bacilos Gram negativos entéricos o Eschirichia Coli, cepas comensales E. Coli se encuentra entre las primeras especies aisladas en el intestino del neonato o Pseudomonas, Serratia, Acinetobacter, Salmonella Martín R. Res Microbiol 2007 Favier et al. Appl Environ Microbiol 2002 Tannock W. J Clin Microbiol 1990

12 Diversidad bacteriana leche materna N=40 muestras de LM Medios cultivo anaerobios (estrictos y facultativos) Recuento ; especies por muestra Grupo bacteriano Grupo Staphylococci (S. epidermidis) Grupo Streptococcus (S. salivarius, mitis) Enterococcus (E. faecium) Bacterias Acido Lácticas (Lactobacillus rhamnosus, Lact. crispatus, Lactococcus lactis, Leuconoctoc mesenteroides) Prevalencia en muestras 97,5% 72,5% 7,5% 12,5% Heikkila M.P. J Appl Microbiol 2003

13 Diversidad bacteriana leche materna N=50 muestras LM. PCR cuantitativa tiempo real Grupo bacteriano Prevalencia Media±DS (log10/ml) RECUENTO TOTAL 50/ ±0.75 Grupo Staphylococcus 50/ ±0.84 Grupo Bifidobacterium 50/ ±0.23 Grupo Lactobacillus 50/ ±0.47 Grupo Enterococcus 38/ ±0.71 Grupo Streptococcus 50/ ±0.81 Grupo Bacteroides 20/ ±0.51 Clostridium Cluster XIVa-XIVb 48/ ±0.60 Clostridium Cluster IV 2/50 1±60±0.17 Collado M.C. Letters Appl Microbiol 2009

14 Tiene la microbiota de la leche materna propiedades probióticas?

15 La flora de la LM tiene capacidad probiótica Grupo bacteriano Grupo Staphylococci (S. epidermidis) Grupo Streptococcus (S. salivarius, mitis) Enterococcus (E. faecium) Bacterias ácido lácticas (Lactobacillus rhamnosus, Lact. crispatus, Lactococcus lactis, Leuconoctoc mesenteroides) Prevalencia en muestras Capacidad bactericida frente St aureus 97,5% 23% 72,5% 41% S. salivarius 23% otros 7,5% 100% 12,5% 100% Heikkila M.P. J Appl Microbiol 2003

16 La flora de la LM tiene capacidad probiótica Lactobacillus, Bifidibacterium, Lactococcus o Variedades de Lactobacillus de LM tienen potencial probiótico igual o superior que variedades que contienen probióticos comercializados Martín R. Appl Environ Microbiol 2009 Lara-Villoslada F. Br J Nutr Olivares M. J Appl Microbiol 2006 Martín R.J Hum Lact 2005

17 La flora de la LM tiene capacidad probiótica Lactobacillus, Bifidibacterium, Lactococcus o Forman barrera microbiológica primaria importante para prevenir infecciones o Capacidad adherirse a mucosas o Productor sustancias antimicrobianas o Además efecto inmunomodulador y antiinflamatorio Martín R. Appl Environ Microbiol 2009 Lara-Villoslada F. Br J Nutr Olivares M. J Appl Microbiol 2006 Martín R.J Hum Lact 2005

18 La flora de la LM tiene capacidad probiótica Streptococcus viridans o Inhibe la colonización cavidad oral por S. aureus meticilín resistente en neonatos hospitalizados Uehara Y. Clin Infect Dis 2001 o Presencia en heces factor protector atopia Kiriavainen Immunol Med Microbiol 2001 o S. sanguis antagonista caries, enfermedad periodontal Becker M.R. J Clin Microbiol 2002

19 La flora de la LM tiene capacidad probiótica Enterobacterias o Formas comensales E. Coli presentes de forma importante en las superficies mucosas del humano Grozdanov L. J Bacteriol 2004 o E. coli variedad Nissle 1917 (O6:K5:H1) forma parte de un probiótico diseñado para recién nacidos Lodinova R. Biol Neonatol 1997

20 MECANISMOS ANTIINFECTIVOS BACTERIAS PROBIÓTICAS INTESTINALES Competencia por nutrientes Producción mucina Inducción IgA Competencia lugares adhesión Producción de sustancias antimicrobianas Uniones intercelulares más fuertes Inmunomodulación Lara-Villoslada F. Br J Nutr. 2007

21 Qué infuencia tiene la microbiota de la leche materna en la microbiota intestinal del recién nacido?

22 LM y flora microbiana intestinal del neonato La colonización intestinal del neonato comienza inmediatamente tras el nacimiento Es esencial para la maduración del tejido linfoide asociado al intestino, mantener la homeostasis del epitelio intestinal y la regulación de la fisiología intestinal Grönlund MM. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed 2000

23 LM y flora microbiana intestinal del neonato La alteración de la flora microbiana en el neonato se relaciona con un estado proinflamatorio (enterocolitis necrosante, broncodisplasia, leucomalacia ventricular) y mayor riesgo de sepsis nosocomial Asimismo, se relaciona con otras enfermedades a largo plazo (alergias) Kalliomaki M. J Allergy Clin Immunol 2001

24 LM y flora microbiana intestinal del neonato La flora bacteriana fecal de los lactantes sanos amantados refleja la composición bacteriana de la leche materna. Se han aislado las mismas variedades de Bifidobacterias, Lactobacillus y Staphylococcus en pares madre-lactante La leche materna supone una fuente constante de bacterias comensales para el intestino del lactante Martín V. J Hum Lact 2012 Donnet-Hughes A. Proc Nutr Soc 2010 Pérez PF. Pediatrics 2007

25 Cuál es el riesgo de alimentar a los recién nacidos con leche materna con altos recuentos bacterianos?

26 Cultivos LM y patología neonatal 161 madres de prematuros ingresados <30 semanas EG Cultivo semanal de muestra extraída durante 24 horas ; N= 813 muestras LM Sacaleches eléctrico Columbia CNA Agar para Gram positivos Agar Mac Conkey para Gram negativos Schanler R. J. Perinatol 2011

27 Cultivos LM y patología neonatal TIPO CRECIMIENTO BACTERIANO Número (%) No crecimiento 4,3% GRAM POSITIVOS Bajo recuento (<10 4 UFC/ml) 48,7% Alto recuento ( 10 4 UFC/ml) 5,4% BACILOS GRAM NEGATIVOS Bajo recuento (<10 4 UFC/ml) 0% Alto recuento ( 10 4 UFC/ml) 0,4% FLORA MIXTA Bajo recuento Gram positivos y negativos 17,5% Alto recuento Gram positivos y negativos 7% Alto recuento Gram positivos /Bajo Gram negativos 2,5% Bajo recuento Gram positivos /Alto Gram negativos 14,5% Schanler R. J. Perinatol 2011

28 Cultivos LM y patología neonatal Grupos bacterianos Número (%) Staphylococcus aureus 65 (5) Grupo Staphylococcus coagulasa negativo 637(49,3) Grupo Enterococcus (faecalis) 152 (11,8) Grupo Streptococcus (agalactiae) 5 (0,4) Bacilos Gram negativos entéricos 423 (42,4) Candida sp 11 (0,9) Schanler R. J. Perinatol 2011

29 Cultivos LM y patología neonatal Especies Bacterianas Número (%) Bacilos Gram Negativos 423 (42,4) Acinetobacter sp 127 (9,8) Citrobacter sp 8 (0,6) Enterobacter sp 69 (5,3) Escherichia coli 8 (0,6) Klebsiella sp 45 (3,5) Pseudomonas sp 62 (4,8) Serratia sp 25 (1,9) Stenotrophomonas maltophilia 79 (6,1) Schanler R. J. Perinatol 2011

30 Cultivos LM y patología neonatal NO SIGNIFICATIVO PARA NINGÚN GERMEN GRAM POSITIVO NO SIGNIFICATIVO PARA E.COLI, KLEBISIELLA, ENTEROBACTER SIGNIFICATIVO PARA SERRATIA (2 sepsis) 1 sepsis 67ddv; cultivo + en LM día 14; negativo 10,20,28 2 sepsis 11ddv; cultivo + día7; negativos 7 posteriores Odds Ratio del aislamiento del mismo germen en la LM y RN en cualquier momento de la hospitalización

31 Cultivos LM y patología neonatal 7610 muestras LM procedentes de 96 mujeres Toda LM administrada en las 2 primeras semanas de vida a prematuros ingresados en 2 unidades neonatales 1 año Correlación carga bacteriana- intolerancia digestiva y sepsis Extracción manual o sacaleches eléctrico Cultivos agar sangre y McConkey Law BJ J Clin Microbiol 1989; 27:1560-6

32 19,1% no aislamientos 74,3% sólo Gram positivos 1,1% sólo Gram negativos Flora mixta 5,7% Cultivos LM y patología neonatal 25% excedían límites aceptabilidad 4,7% excedían límites aceptabilidad NO se encontró relación entre el recuento bacteriano de la leche materna y episodios de sepsis ni intolerancia digestiva Law BJ J Clin Microbiol 1989; 27:1560-6

33 272 muestras LM Cultivos LM y patología neonatal 76 cultivadas antes de ser administradas por sonda 36% crecimiento enterobacterias 196 cultivadas al final del recorrido de la sonda 60% crecimiento enterobacterias Correlación positiva crecimiento enterobacterias (>10 6 )-sepsis? Botsford KB.. J Pediatr 1986; 109:

34 Cultivos LM y patología neonatal Correlación positiva crecimiento enterobacterias (>10 6 )-sepsis? En ninguna de los 6 episodios de sepsis se aisló la enterobacteria en sangre del neonato (sepsis clínica) No especifican cuándo se habían realizado dichos cultivos (antes o después de administración por sonda) Botsford KB.. J Pediatr 1986; 109:

35 Implicaciones para los bancos de leche?

36 Implicaciones para los bancos de leche? Potencial probiótico demostrado de las bacterias que contiene la leche materna Capacidad bactericida, imnunomoduladora, antiinflamatoria Los criterios microbiológicos para descartar leche antes de la pasteurización se extrapolaron de la industria alimentaria y no están basados en la evidencia científica

37 Implicaciones para los bancos de leche? El desconocimiento previo acerca de la flora microbiana normal de la LM ha llevado a desechar muestras de leche con contenidos 10 3 y 10 5 UFC/ml, recuentos normales en la LM de las mujeres sanas Además la mera presencia de enterobacterias, Staphylococcus aureus, Enterococcus es motivo en algunos bancos para descartarla

38 Implicaciones para los bancos de leche? Algunos autores han señalado que parte de la pérdida de capacidad bactericida de la leche materna pasteurizada pueda deberse a la erradicación de la flora normal de la LM Martín R. Appl Environ Microbiol 2009 Collado M.C. Letters Appl Microbiol 2009 Lara-Villoslada F. Br J Nutr. 2007

39 Implicaciones para los bancos de leche? Además del valor nutricional e inmunológico es importante considerar el valor microbiológico de la leche materna