SEMINOGRAMA Qué tratamiento debo hacer? Dr. Joaquín Moreno Valencia 22 Diciembre 2009

SEMINOGRAMA Qué tratamiento debo hacer? Dr. Joaquín Moreno Valencia 22 Diciembre 2009

Seminograma Es el estudio básico de una muestra de semen Nos ayudará a definir el potencial fértil del varón - Recogida y procesamiento muestra de semen. - Seminograma básico. - Procedimientos de Recuperación y Capacitación espermática. - Valoración resultados y TRA a realizar.

Instrucciones pacientes Han de ser simples y fáciles de comprender. Periodo de abstinencia sexual de 3-7 días. Lavarse adecuadamente las manos y los genitales. Emplear un contenedor de plástico estéril adecuado. Recogida por masturbación generalmente. Identificar adecuadamente la muestra. Llevar rápidamente al laboratorio ( antes 1 hora ) Mantener la muestra a temperatura ambiente o 37ºC.

Recogida de las muestras En algunos casos especiales: Varones parapléjicos o con dificultades en la erección - estimulaciones mecánicas / electroeyaculación. Presencia de anticuerpos anti-espermatozoides Recogida muestra fraccionada - 1º fracción (Split): 90 % espermatozoides - 2ª fracción: rica plasma seminal, pocos sp. Recogida en pacientes con eyaculación retrógrada. - Alcalinización muestra semen.

Procesamiento de las muestras Debe realizarse en laboratorios autorizados. Personal de laboratorio experto. Procedimientos estandarizados. Identificar la muestra adecuadamente Nombre : Fecha y hora de la recogida : Días de abstinencia : Mantener la muestra en condiciones adecuadas. Muestra completamente licuada y homogeneizada.

Seminograma básico Laboratory manual for the examination of human semen and semen cervical mucus interaction. OMS 1980, revisiones 1992, 4ª edición (1999) Examen macroscópico del semen Examen microscópico del semen + Pruebas funcionales

Examen Macroscópico del semen Muestra licuada y bien homogeneizada. Volumen ( >= 2 ml ) Licuefacción ( completa / incompleta ) Viscosidad ( normal /aumentada /disminuida ) Aspecto ( color, opacidad / transparencia, grumos gelatinosos ) Olor ph ( normal 7.2 8.2 )

Examen Microscópico del semen Parámetros básicos de la calidad seminal Concentración de espermatozoides Movilidad espermática Morfología espermática Normales Capacidad Fecundante? No Normales Test Funcionales (ayuda)

Concentración de espermatozoides Millones de espermatozoides / ml. de semen Cámaras de recuento : - Makler ( Sefi Medical ) Valores de Normalidad ( OMS,1999) >= 20 millones esp/ml Oligozoospermia < 20 millones esp/ml

Movilidad espermática Recuento en cámara Makler / microscopio obj. 20x Se deben contar al menos 100 espermatozoides Según su movilidad se clasifican en : OMS (1999) - A / +++ /grado 3 - móviles progresivos rápidos - B / ++ /grado 2 - móviles progresivos lentos - C / + /grado 1 - móviles no progresivos - D / 0 /grado 0 - inmóviles Valores Normales: al menos 50 % móviles progresivos (A+B) o más 25 % móviles progresivos rápidos (A) Astenozoospermia < 50 % esp móviles progresivos (A+B).

Morfología espermática Principal parámetro predictor de la capacidad de fecundación ( Oehninger,S. Hum-Reprod. 1998 ) Fijación y tinción de la extensión (Hemacolor) Criterios de normalidad : Criterio estricto de Kruger (1988) > =14 % OMS (1992) > 30 % OMS (1999) > 15 % ESHRE(2001) > 15 % Teratozoospermia: espermatozoides normales <= 14 %

Sistemas Computerizados de Análisis del Semen (CASA) Sperm Class Analyzer Integrated Semen Analysis System (ISAS) Análisis de la concentración, movilidad y morfología espermática micrografías de una normozoospermia mediante el programa Sperm Class Analyzer en las que se observan los espermatozoides y sus recorridos. Espermatozoides grado 3 (verde) Espermatozoides grado 2 (amarillo) Espermatozoides grado 1 (azul) Espermatozoides grado 0 (rojo) Informes con muchos diagnósticos de Teratozoospérmia

Valores de Normalidad según la OMS (1999) Normal Anormal Volumen 2 ml o más < 2 ml Hipospermia ph 7.2 8.0 Fuera dicho rango Concentración > 20 millones esp / ml < 20 millones esp / ml Oligozoospermia Movilidad >= 50 % esp A+B >= 25 % esp A < 50 % A+B Astenozoospermia Morfología > 15 % esp normales <= 14 % esp normales Teratozoospermia

Pruebas Funcionales Test de capacitación espermática (REM) Supervivencia espermática Integridad membrana plasmática (HOST) Integridad nuclear: análisis fragmentación ADN Reacción acrosómica Estudios genéticos (aneuploidías, estudios meiosis)

Capacitación espermática Son aquellos cambios funcionales y estructurales que deben sufrir los espermatozoides para adquirir la capacidad de poder fecundar al ovocito. -Capacitación in vivo en el tracto genital femenino -Capacitación in vitro en el laboratorio de RA. 1- Separación previa de los espermatozoides con eliminación del plasma seminal. Centrifugaciones. 2- Incubación a 37º C en un medio de cultivo adecuado con una concentración suficiente de iones de Ca 2+, CO 3 H - y de HSA que permitan la supervivencia y su capacitación.

Capacitación in vitro La membrana sufre una serie de cambios importantes: - pérdida de colesterol - reordenación fosfolípidos Cambios en su movilidad : Hiperactivación espermática Estos van a permitir : - Unión del espermatozoide al ovocito - Inducción de la Reacción Acrosómica - Fecundación del ovocito

Principales Técnicas de Recuperación y Capacitación espermática SWIM-UP Centrifugación en Gradientes de Densidad

Gradientes de densidad Se basa en la separación de espermatozoides móviles en gradientes de distinta densidad en base a su motilidad progresiva. Los espermatozoides con movilidad adecuada penetran en los gradientes más densos cuando son centrifugados Gradientes densidad: - PureSperm (Nidacon, Suecia) - SpermGrad (Vitrolife, Suecia)

Gradientes de densidad Ventajas: Mejor recuperación de espermatozoides móviles Mejor recuperación en muestras: - oligozoospérmicas - astenozoospérmicas - con abundantes células y detritus Leucocitos y detritus son eliminados Muestras obtenidas más limpias Se reduce la presencia de ROS Método de recuperación más suave. Menor fragmentación del ADN.

Valoración de la Recuperación espermática REM ( Recuperación de Espermatozoides Móviles ) Se realiza en la muestra de semen capacitada [espermatozoides móviles] (mill / ml) X Volumen (ml) Total millones de espermatozoides móviles recuperados de toda de la muestra de semen

Seminograma normal TRA No normal Test de capacitación espermática REM TRA Morfología Estricta IA FIV ICSI

Nuestra Experiencia Valores Seminograma REM teórica calculada (muestra en fresco) Volumen [espermatozoides] Movilidad A+B Morfología estricta [esperm] X Movilidad (A+B) 130 X Volumen ( aproximada ) REM real obtenida (muestra capacitada) Aproximación a la TRA que podemos aplicar

Qué tratamiento debemos realizar? MORFOLOGIA ESPERMATICA ESTRICTA > 5 millones normal < =14 % IA (4) Fracaso REM 2-5 millones normal <= 14 % Respuesta ovárica Buena Mala FIV No Fecundación < 2 millones ICSI

Ejemplos V= 3 ml R= 3 mill. Mov. A+B= 15 % REMt= [(8x15)/130]x3= 2,76 millones Morfologia estricta > 14 % FIV Morfología estricta <= 14% ICSI V= 3 ml R= 8 mill. Mov. A+B= 50 % REMt= [(8x50)/130]x3= 9,23 millones Morfología estricta > 14 % IA Morfología estricta <= 14% FIV si fracaso ICSI V= 0.5 ml R= 8 mill. Mov. A+B= 35 % REMt= [(8x35)/130]x0.5= 1,07 millones ICSI