Introducción Objetivo Procedimiento Resultados Trabajo Práctico Nº 5 INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AM- BIENTALES EN EL CRECIMIENTO MICRO- BIANO Conclusiones Bibliografía INTRODUCCIÓN Las diferentes especies de microorganismos pueden crecer en los más diversos ambientes. El tipo de microorganismo que se encuentra en un ambiente dado y la velocidad a la que ellos pueden crecer puede ser influenciada por una variedad de factores, tanto físicos como bioquímicos. En este trabajo práctico determinaremos la influencia que tienen los factores físicos, tales como: temperatura, oxígeno, ph y concentración de sales sobre el crecimiento de algunas especies de bacterias. OBJETIVO Al finalizar el trabajo práctico el estudiante estará en capacidad de: Comprender el efecto de la temperatura, el oxígeno, el ph y la concentración de sales sobre el crecimiento de los microorganismos.
TEMPERATURA La temperatura tiene un efecto muy importante sobre el crecimiento de los microorganismos. Cada microorganismo tiene una temperatura óptima a la cual su crecimiento es más rápido, una temperatura mínima por debajo de la cual no crece y una temperatura máxima por encima de la cual el crecimiento no es posible, a estas tres temperaturas se les denomina temperaturas cardinales y son características de cada microorganismo. En este trabajo práctico se determinará el rango de temperatura en que diferentes microorganismos pueden crecer y se hará una estimación de la temperatura óptima, para ello se le dará a cada estudiante un cultivo puro de un microorganismo. PROCEDIMIENTO 1. Inocular cuatro (4) tubos de agar nutritivo inclinado, utilizando el filamento y haciendo un solo trazo a lo largo del bisel, teniendo cuidado de que el inóculo no sea muy abundante porque dificultaría la interpretación de los resultados. 2. Incubar cada tubo a la temperatura correspondiente, por 24 horas: 4ºC 25ºC 32,5ºC 55ºC RESULTADOS Anotar el crecimiento y la abundancia relativa del mismo, colocando un signo negativo (-) para la ausencia de crecimiento y la presencia de crecimiento indicarla con un signo positivo (+). La abundancia relativa será indicada con el número de signos positivos por ejemplo; +++ para el máximo crecimiento, ++ para el crecimiento intermedio y + para el mínimo crecimiento. Microorganismo: Crecimiento 4 C 25ºC 32,5ºC 55ºC Resultado 5.2
Dibujar lo observado Comparar los resultados con los de otros estudiantes que hayan utilizado microorganismos diferentes. CONCLUSIONES REQUERIMIENTOS DE OXÍGENO Los requerimientos de oxígeno de las bacterias van desde los aerobios estrictos que no pueden vivir sin él, hasta los anaerobios estrictos que mueren en presencia de oxígeno, entre estos extremos están los facultativos, los aerotolerantes y los microaerofílicos. Cuando se quiere identificar una bacteria es importante determinar sus requerimientos de oxígeno, esto puede hacerse usando el medio líquido de tioglicolato ya que éste está diseñado de manera de permitir, a lo largo del tubo, diferentes concentraciones de oxígeno. Los microorganismos crecerán en el tubo de acuerdo con el nivel de oxígeno que requieran. El medio contiene tioglicolato y cisteína para bajar el potencial de óxido-reducción y el colorante resazurina para indicar la presencia de oxígeno (en presencia de oxígeno el colorante se vuelve rosado). Como la tensión de oxígeno es siempre mayor cerca de la superficie del medio, éste estará rosado en la parte de arriba y mantendrá el color original del medio de cultivo en la zona central y en el fondo del tubo. El medio contiene también una cierta cantidad de agar que lo hace más viscoso, ayuda a localizar los microorganismos y tiende a favorecer la anaerobiosis en el fondo del tubo. 5.3
PROCEDIMIENTO 1. Examinar los tubos de tioglicolato. Si más de un tercio del medio está rosado, colocar los tubos en un baño de agua hirviendo por unos minutos para expulsar el oxígeno disuelto, enfriarlos en un baño de agua fría. Evitar agitar los tubos después del calentamiento para prevenir la reabsorción de oxígeno. 2. Marcar los tubos con su número de equipo y la fecha e inocular con el asa, tomando una pequeña porción del cultivo que le suministre el profesor, hasta el fondo del tubo. Agitar cuidadosamente el tubo o rotarlo entre las palmas de las manos para obtener una buena dispersión del inóculo. 3. Incubar por 48 horas a 32,5 +/- 2,5ºC. 4. Después de la incubación, observar los tubos inoculados y comparar el crecimiento en los tubos con la figura siguiente. Aerobios estrictos Microaerofílicos Aerotolerantes y facultativos Anaerobios estrictos Zonas de crecimiento en medio de tioglicolato RESULTADOS Anotar los resultados 5.4
Dibujar lo observado Comparar los resultados obtenidos con los diferentes cultivos suministrados a los estudiantes y discutir los resultados CONCLUSIONES ph La acidez o alcalinidad de un medio de cultivo se expresa por su ph. Para la mayoría de las bacterias el ph óptimo de crecimiento está entre 6,5 y 7,5 aun cuando algunas pocas especies pueden crecer en los extremos del rango de ph. Las levaduras y los mohos pueden crecer a valores de ph más bajos. En este trabajo práctico se determinará el efecto que tiene el ph sobre el crecimiento de diferentes microorganismos. PROCEDIMIENTO 1. Inocular con el asa de platino, usando como inóculo el microorganismo que le suministre el profesor, cada uno de los medios siguientes: a. Caldo nutritivo ph 3.0 b. Caldo nutritivo ph 5.0 c. Caldo nutritivo ph 7.0 d. Caldo nutritivo ph 9.0 2. Incubar a 37 C por 24 horas. 5.5
RESULTADOS Anotar la presencia de turbidez en el medio como crecimiento + y la ausencia de turbidez como crecimiento - Microorganismo: Medio de cultivo Caldo nutritivo ph 3.0 Caldo nutritivo ph 5.0 Caldo nutritivo ph 7.0 Caldo nutritivo ph 9.0 Crecimiento Dibujar lo observado Comparar con los resultados obtenidos con los de otros estudiantes que hayan utilizado microorganismos diferentes. CONCLUSIONES 5.6
CONCENTRACIÓN DE SALES Los requerimientos o la tolerancia a diferentes concentraciones de sales varía en los diferentes microorganismos. En este trabajo práctico se determinará el efecto que tienen diferentes concentraciones de cloruro de sodio sobre el crecimiento de diferentes microorganismos. PROCEDIMIENTO 1. Inocular con el asa de platino, usando como inóculo el microorganismo que le suministre el profesor, cada uno de los medios siguientes: a. Agar nutritivo (normalmente contiene 0,8 % de NaCl) b. Agar nutritivo (suplementado con 1 % de NaCl) c. Agar nutritivo (suplementado con 5 % de NaCl) d. Agar nutritivo (suplementado con 10 % de NaCl) 2. Incubar a 32,5 +/- 2,5ºC por 24 horas. RESULTADOS Anotar el crecimiento como + o según el caso. Microorganismo: Medio de cultivo Agar nutritivo (normalmente contiene 0,8 % de NaCl) Agar nutritivo (suplementado con 1 % de NaCl) Agar nutritivo (suplementado con 5 % de NaCl) Agar nutritivo (suplementado con 10 % de NaCl) Crecimiento Dibujar lo observado 5.7
Comparar con los resultados obtenidos con los de otros estudiantes que hayan utilizado microorganismos diferentes. CONCLUSIONES BIBLIOGRAFÍA Benson H. J. 1979. Microbiological Application. A Laboratory Manual in General Microbiology. Third edition. Wm. C. Brown Company Publishers. Dubuque, Iowa Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos Generales. Segunda edición. Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela. Seeley, H.W.I, Jr and P.J. Van Demark 1972. Microbes in Action. W.H. Freeman and Company. Prof. Magaly Pedrique de Aulacio Prof. Sofía Gutiérrez de Gamboa Noviembre 2001 Revisión 2008 5.8