UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES FACULTAD DE MEDICINA Departamento de Microbiología, Parasitología e Inmunología Control del Desarrollo Microbiano Pruebas de Sensibilidad antibiótica
Control del Desarrollo Microbiano Objetivos Conocer la diferencia entre esterilización y desinfección. Conocer qué métodos de esterilización y desinfección son los más adecuados según el material de trabajo. Conocer los niveles de bioseguridad.
INACTIVACION DE LA VIDA MICROBIANA ESTERILIZACION: proceso por el que se alcanza la muerte de todas las formas de vida microbianas, incluyendo bacterias y sus formas esporuladas altamente resistentes. DESINFECCION: es el proceso por el cual los microorganismos patógenos son destruidos a excepción de las esporas. Se realiza por métodos físicos y químicos. ANTISEPSIA: es el proceso que por su baja toxicidad, se utiliza para la destrucción de microorganismos presentes sobre la superficie cutaneomucosa.
Cinética de destrucción Factores: Concentración del agente Tiempo de exposición ph del medio Temperatura Presencia de materiales extraños Resistencia propia del microorganismo Número inicial de la población
Métodos de esterilización Físicos Incineración Calor húmedo Calor seco Filtración Radiación gamma Radiación UV Químicos Oxido de etileno Glutaraldehido Formaldehido
Métodos físicos de esterilización METODO DE ESTERILIZACION INCINERACION CALOR HUMEDO CALOR SECO FILTRACION RADIACION GAMMA RADIACION UV FUNDAMENTO El material se quema. Ej: eliminación de desechos infecciosos 121 C a 1 atmósfera 30 60 min (autoclave). Ej. Desechos de peligro biológico, objetos resistentes al calor 160 180 C por 1 a 3 hs (estufa). Ej: material de vidrio, aceites, etc. Pasaje de soluciones a través de membranas con vacío. Ej: antibióticos, químicos tóxicos, radioisótopos, vacunas, carbohidratos. Radiación ionizante de corta longitud de onda y alta energía. Ej: material descartable Radiación no ionizante de bajo poder de penetración. Ej: superficies y volúmenes pequeños de líquidos.
Metodos de desinfección Físicos Ebullición Pasteurización Radiación UV Químicos Nivel: alto medio - bajo
Niveles de desinfectantes NIVEL DEL DESINFECTANTE ALTO MEDIO BAJO COMPUESTO Glutaraldehido Formaldehido Peroxígenos Clorógenos Alcoholes Iodóforos Fenoles Compuestos de amonio cuaternario Compuestos anfóteros Compuestos mercuriales Sales de plata
La selección del agente desinfectante depende del tipo de objeto a desinfectar CRITICOS - catéteres, agujas hipodérmicas, equipos de hemodiálisis. SEMICRITICOS - termómetros (de uso rectal y oral), fibroscopios, tubos endotraqueales, broncoscopios. NO CRITICOS - Estetoscopios, máscaras faciales y humidificadores.
Bioseguridad (biosafety) Es la aplicación de conocimientos, técnicas y equipamientos para proteger a personas, laboratorios, áreas hospitalarias y medio ambiente de la exposición a agentes potencialmente infecciosos o considerados de riesgo biológico.
Bioseguridad (biosecurity) En el campo de la Microbiología es la aplicación de conocimientos y estrategias para prevenir la mala utilización (adrede o inadvertida) de microorganismos para causar daño al hombre, cultivos agrícolas, animales de importancia económica y al medio ambiente en general. Es muy importante introducir a los estudiantes y los científicos al concepto de darse cuenta del posible uso maligno de las ciencias. Adopción de códigos de ética.
Código de ética contra el mal uso del conocimiento, la investigación y los recursos científicos de la Unión Internacional de Sociedades de Microbiología (IUMS) La IUMS se opone al mal uso del conocimiento, investigación y recursos microbiológicos. En particular, la IUMS también se esfuerza en promover la conducta ética en la investigación y el entrenamiento en las áreas de bioseguridad (ambas, biosafety y biosecurity ) de manera tal de prevenir el uso de microorganismos como armas biológicas y así proteger la salud pública y proteger la paz mundial.
Principios de bioseguridad Universalidad Uso de barreras Medios de eliminación de material contaminado
Clasificación de los microorganismos infecciosos por grupos de riesgo GRUPO 1: Ej: Bacillus cereus, E. coli K12, Lactobacillus acidophilus, virus Distemper canino. GRUPO 2: Clostridium spp, Listeria monocytogenes, virus del sarampión, virus hepatitis, Salmonella typhi. GRUPO 3: Ej: M. tuberculosis, Brucella spp., Rickettsia spp., virus de la rabia. GRUPO 4: Ej: virus Junin, virus Lasa, virus de la fiebre aftosa, virus Machupo.
Pruebas de Sensibilidad antibiótica Objetivos Determinar la susceptibilidad de una cepa bacteriana a un determinado antibiótico. Determinar la eficacia de un antibiótico.
Determinar la susceptibilidad de una cepa bacteriana a un determinado antibiótico Difusión en agar Concentración inhibitoria mínima (CIM)
Antibiograma de difusión Método de Kirby & Bauer
Cuándo uso la técnica de Kirby & Bauer? DE RUTINA En qué especies bacterianas? Bacterias de crecimiento rápido Enterobacterias Staphylococcus spp. Pseudomonas aeruginosa Bacterias fastidiosas Neisseria gonorroheae frente a penicilina G, Streptococcus pneumoniae frente a oxacilina Haemophilus influenzae b frente a ampicilina
Significado clínico de la prueba de Kirby & Bauer Bacterias sensibles Bacterias de susceptibilidad intermedia Bacterias resistentes
Pruebas para medir sensibilidad de una cepa bacteriana a un determinado antibiótico CIM Concentración inhibitoria mínima Medio sólido (método patron) Medio líquido CBM
Fundamento de la CIM
Relevancia clínica de la CIM Para el tratamiento de las infecciones sistémicas la dosis del antibiótico en suero debe ser 3 a 5 veces el valor de la CIM
E-Test Gradiente de concentraciones en la tira (µg/ml) La diferencia con el disco, es que el disco contiene una única concentración del antibiótico
Cálculo de la CBM Concentración bactericida mínima
Qué información obtengo con los valores de la CIM y CBM? CBM/CIM CBM/CIM menor o igual a 2 CBM/CIM mayor a 2 ANTIBIOTICO BACTERICIDA ANTIBIOTICO BACTERIOSTATICO
Cuándo se pide una CBM? Meningitis Endocarditis Osteomielitis Por qué? Porque necesitamos eliminar a la bacteria
Para medir la eficacia bactericida de un antibiótico Curva de muerte
Se determina de rutina? NO Para qué se realiza? Para tener una estimación más dinámica de la acción bactericida de un antibiótico Qué información obtengo de una curva de muerte? Efecto sinérgico Efecto antagonista Indiferencia
Supongamos que Ud está suministrando un antibiótico a un paciente con osteomielitis pero Ud sospecha que la dosis no es la adecuada.
Poder Bactercida del Suero - PBS
Se necesitan 2 muestras de suero Para calcular la concentración MAXIMA Para calcular la concentración MINIMA IV: 30-45 min IM: 60 min VO: 90 min PICO VALLE 1/64-1/32 1/16-1/4 100 % CURACION
Utilidad del PBS Para evaluar la eficiencia de la terapéutica antibiótica en infecciones graves como endocarditis, osteomielitis y artritis supurativa. OBJETIVO: AJUSTAR DOSIS
Eficacia de un antibiótico Otros parámetros: Area bajo la curva (ABC) Tiempo por encima de la CIM Efecto post-antibiótico (EPA)
Eficacia de un antibiótico
EN RESUMEN. Si queremos medir SENSIBILIDAD Difusión en agar CIM Medio Sólido Medio líquido Si queremos medir ACCION BACTERICIDA CBM Curva de muerte Si queremos medir EFICACIA ABC/CIM PBS Tiempo por encima de la CIM
Pruebas de sensibilidad a los antifúngicos CIM anfotericina B fluocitosina fluconazol ketoconazol itraconazol voriconazol, posaconazol y ravuconazol (documento M27-A2, de la CLSI, y el estándar europeo EUCAST-AFST)
Pruebas de sensibilidad a los antifúngicos Método de difusión en disco: fluocitosina, fluconazol y voriconazol Etest : en levaduras y en hongos filamentosos y mide la CIM a anfotericina B, fluconazol, itraconazol, fluocitosina, voriconazol, posaconazol y caspofungina Métodos automatizados: Sensitre YeastOne (TREK Diagnostic Systems) Vitek 2 (Biomerieux)
Pruebas de sensibilidad para antivirales (PARA VIRUS INFLUENZA H1N1) METODO GENOTIPICO: Pirosecuencia METODO FENOTIPICO: Pruebas de inhibición enzimática
UNIVERSIDAD de BUENOS AIRES FACULTAD de MEDICINA Departamento de Microbiología, Parasitología e Inmunología MUCHAS GRACIAS marisaigomez@gmail.com