Bioseguridad en el laboratorio: trabajo con muestras en condiciones BSL2 y BSL3

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1 Bioseguridad en el laboratorio: trabajo con muestras en condiciones BSL2 y BSL3 Maite Alvarez Banco de ADN de la UPV/EHU Servicios Generales de Investigación/Ikerkuntzarako Zerbitzu Orokorrek (SGIker) 6 Noviembre 2012

2 Muestras biológicas Muestras + habituales en BB normalmente pensamos en sangre Resto de muestras biológicas?? Materiales potencialmente infecciosos Sangre, tejidos y órganos humanos y de otros primates Secreciones vaginales y semen Fluido cerebroespinal Fluidos sinoviales, pleurales, peritoneales o amnióticos Saliva de procedimientos dentales (frecuentemente contienen sangre) Cualquier fluido visiblemente contaminado con sangre Todos los fluidos corporales en situaciones donde es difícil o imposible diferenciar entre ellos. Cualquier tejido u órgano humano no fijado (diferentes de la piel) vivo o muerto. Células, cultivos celulares o cultivos de órganos que contengan VIH, así como medios de cultivo u otras soluciones que contengan VIH o VHB. Sangre, órganos u otros tejidos de animales de experimentación infectados con VIH o VHB. Líneas celulares establecidas y cultivos primarios humanos y de otros primates. Cualquier tipo de muestra en la que exista incertidumbre sobre la presencia de agentes patógenos humanos.

3 Muestras biológicas Ser consciente de con que podemos estar trabajando Niveles de riesgo + actividad experimental nivel de bioseguridad Evaluación de riesgo Donde encontrar listados de los patógenos y su nivel de riesgo Todos 2-3, excepto virus que también hay de nivel 4 Nivel 3: No suelen corresponder a la mayoría de los biobancos y aquellos que sí entran dentro de estas características poseen formación específica. Bacterias: Bacillus anthracis Brucella E. coli, cepas verocitotóxicas* Mycobacterium africanum (V), tuberculosis,... Rickettsia Salmonella typhi*(v) Yersinia pestis (V) Virus: Fiebre Valle del Rift VHE*, VHB*, VHC* Asociados a las TSE (CJD, vcjd, BSE, GSS, Kuru)* VIH

4 Recepción muestra Cuando llega una muestra, que hacer?? Registro LIMs (trazabilidad) Comprobar estado del paquete. 1º- conocer que tipo de muestra es Guía sobre la reglamentación relativa al Transporte de sustancias infecciosas (OMS, 2009) 2º- conocida o no, abrir contenedor primario dentro de cabina de bioseguridad -Adoptar precauciones universales y usar EPIs - Prácticas y procedimientos de nivel 2 como mínimo -Transporte de muestras respetando normas y reglamentos nacionales o internacionales

5 Manipulación muestra Como llevarlo a la CBS Durante mucho tiempo has visto al personal hospitalario, químicos, biólogos, estudiantes, profesores, investigadores, médicos, transportando muestras biológicas de las formas más ridículas posibles? En un guante?, En la bolsillo de la bata?, En la mano sin guantes? Transporte interno Las muestras que contengan agentes biológicos, químicos o radiactivos se acondicionarán en contenedores adecuados para su transporte fuera de la zona de laboratorio. Para el transporte de botellas se sujetarán siempre por el fondo, nunca del cuello o el tapón. Se utilizaran medios de transporte (carros, bandejas con asa,...) para facilitar el transporte de varios recipientes o grandes volúmenes (> 10 litros). Entrada y salida del LCB3 SAS de materiales y/o dunk-tunk

6 Técnicas microbiológicas apropiadas Todos los procesos llevados a cabo en un BioBanco se deben de realizar cumpliendo las recomendaciones de los protocolos de bioseguridad. Recomendaciones generales: - Usar bata, gafas de seguridad y guantes. - No usar ropa corta, sandalias o zapatos descubiertos. - No llevar mascotas a los laboratorios. - Evitar pipetear con la boca. - Usar el cabello corto o recogerlo y no llevar complementos. - Evitar introducir y consumir alimentos en los laboratorios. - Lavar las manos y cambiar de guantes frecuentemente. - No trabajar sólo en el laboratorio. - Evitar usar el teléfono móvil y equipos de sonido en el laboratorio. - No usar la bata fuera de los laboratorios, ya que se puede dispersar cualquier contaminación. - Usar material de plástico - Mantener las áreas de trabajo ordenadas y limpias

7 Técnicas microbiológicas apropiadas BSL2-BSL3: Evitar el uso de elementos punzantes o cortantes. Recipientes roscados Procedimientos que eviten la formación de aerosoles Procedimientos que eviten las turbulencias en el interior de la CBS Descontaminación de las áreas de trabajo y de los materiales utilizados. Protocolos y procedimientos de actuación en caso de accidente o vertido. Infraestructuras y elementos protectores: Cabinas de seguridad biológica tipo II para el procesamiento de las muestras, centirífugas con tapas de seguridad, sistemas de filtración de vacio,

8 Trabajo en el laboratorio Equipos de Protección Individual (EPIs) BSL BSL mxtcmxf6evuqecuzgvs6evs6e

9 Cabinas de bioseguridad biológica (CBS) Como trabajar en una CBS: Antes - Encender 5 antes de comenzar - Desinfectar la superficie de trabajo Durante -Esperar al menos 1 después de meter las manos (ajuste del flujo de aire) - Reducir al mínimo nº de movimientos en su interior - Movimientos lentos -Correcta colocación del material en el interior: Lo mas en el interior posible (sin bloquear la rejilla) De lo limpio a lo sucio Recipientes de desechos dentro de la CBS Después - Desinfectar la superficie de trabajo - Apagar 5 después de terminar

10 Descontaminación Descontaminar: - superficies y material de trabajo (poyatas, pipetas,...) - Equipos: centrifugas, agitadores,... - CBS: antes y después Siempre previa limpieza??? Respetar los tiempos que dependen de: - Descontaminante - Microorganismo Desinfectantes - Hipoclorito de Sodio - Alcohol (etanol e isopropil 70-95%) - Peroximonosulfato de Potasio (Virkon S) Esterilizantes - Químicos: Perborato sódico (Perasafe) - Físicos: Autoclave de vapor

11 Residuos LCB2: Se recomienda descontaminar antes de esterilizar LCB3: Se descontaminan obligatoriamente antes de esterilizar. Esterilización en el propio laboratorio: Autoclave de doble puerta

12 Almacenamiento Conservación a -20ºC Conservación a -80ºC Conservación a -152ºC Conservación en N 2 líquido

13 Derrames Derrame dentro de la CBS Kit de derrames Derrame fuera de la CBS Llamar al responsable de bioseguridad del laboratorio elated

14 Conclusión Reflexión Mucho ojo y Sentido común Nivel 2 o nivel 3? Y la de los demás

15 Muchas gracias por vuestra atención. Campus de Álava Universidad del País Vasco /Euskal Herriko Unibertsitatea Avda. Miguel de Unamuno, Vitoria-Gasteiz Tfno: Banco de ADN de la UPV/EHU Servicios Generales de Investigación/Ikerkuntzarako Zerbitzu Orokorrek (SGIker)

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