TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE VIRUS FITOPATÓGENOS

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Asunción Espinoza Cárdenas
hace 8 años
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1 TOMA Y ENVÍO DE MUESTRAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE VIRUS FITOPATÓGENOS OFICINA DE CENTROS DE DIAGNÓSTICO Y PRODUCCIÓN Unidad del Centro de Diagnóstico de Sanidad Vegetal Laboratorio de Virología

2 Los virus son agentes infecciosos submicroscópicos. Se caracterizan por ser biótrofos. Constituidos por ácido nucleico (ARN o ADN) de una sola hebra o doble hebra + una capa proteica. INTRODUCCION

3 TAMAÑOS COMPARATIVOS DE PATÓGENOS DE VEGETALES

4 CLASIFICACIÓN La mayoría de virus de plantas son ARN de cadena simple La taxonomía viral al inicio se basó en formas, hospederos y vectores. Hoy : FILOGENÉTICA= Según la secuencia del ácido nucleico Hospedero+ síntoma característico+ virus (en inglés) -Tobacco mosaic viruses -Barley Yellow Dwarf Virus -Wheat Streak Mosaic Virus -Peanut Clump Virus

Hoy : FILOGENÉTICA= Según la secuencia del ácido nucleico Hospedero+ síntoma

5 ENFERMEDAD Y SINTOMAS Un virus puede infectar a una especie de planta o a diferentes Familias de plantas. También una especie de planta puede estar atacada por uno o muchos virus distintos. Después de entrar en las células del huésped, los virus se replican, se trasladan a otras células y finalmente se acumulan en diversos tejidos de la planta. Durante este proceso, los virus usan el proceso metaboliconormal y causan alteraciones, dando lugar a reacciones del huésped, que se denominan síntomas.

Después de entrar en las células del huésped, los virus se replican, se trasladan a otras células y finalmente se acumulan

6 MOSAICO SEVERO

7 I. SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS A. Mosaico Alternancia de distintos colores en forma irregular. El patrón se ve como áreas claras y oscuras, o amarillo y verde sobre las hojas y las áreas pueden ser angulares o internervales. Cala y lilium con mosaico.

El patrón se ve como áreas claras y oscuras, o amarillo y verde

8 DIFERENTES GRADOS DE MOSAICO

9 I. SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS B. Amarillamiento Se caracteriza por clorosis distribuida uniformemente en toda la hoja o parcialmente, o sólo en los márgenes secundarias o en áreas situadas entre las nervaduras.

10 I. SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS C. Manchas anulares Constituidas de un centro clorótico o necrótico rodeado por anillos simples o concéntricos cloróticos o necróticos. Blueberry necrotic ring blotch

11 AMARILLAMIENTO Sólo en los márgenes secundarios y otras empiezan en las nervaduras.

12 Síntoma : Cálico Causado Virus del mosaico de la alfalfa (AMV)

13 SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS D. Necrosis Manchas foliares regulares o irregulares, estrías en peciolos y tallos. A veces generalizada y otras veces puede quedar restringida a las nervaduras. INSV en Cineraria

14 SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS E. Anormalidades del crecimiento Crecimiento desigual de hojas, tallos, hojas, flores y frutos. Comprenden las ampollas o levantamiento de áreas del limbo de color verde normal en hojas con mosaico, encrespamiento u ondulaciones del limbo.

15 SINTOMAS PRODUCIDOS POR VIRUS F. Estrías o bandas Producidas principalmente por virus. Las manchas de los tejidos de hojas infectadas se alargan a lo largo de las venas para formar rayas o bandas cloróticas o amarillas o rojas que se tornan marrones o negras.

Las manchas de los tejidos de hojas infectadas se alargan a lo

16 II. SINTOMAS PRODUCIDOS por Agentes Cuarentenarios EJ: ARANDANO 4.1. Hojas de arándano infectado con Blueberry Leaf Mottle Virus(BLMoV) mostrando moteado y necrosis

17 4.2. Manchas circularesrojassobreel tallode arándanode un año infectado con Blueberry Red Ringspot virus (BRRV)

18 4.3. Hoja de arándano con líneas necróticas típicas (quemados) de infección con Blueberry Scorch Virus (BlScV).

19 4.4. Hojas de arándano con clorosis y manchas Causado por infección con Blueberry Shock Virus (BlShV).

20 4.5. Arándano con síntomas de tiras rojas sobre el tallo Causado por Blueberry Shoe String Virus (BSSV).

21 4.8 Otro cultivo Hojas de Camberries con síntomas de la enfermedad de manchas anulares (atribuído al agente causal Blueberry red ringspot virus).

22 4.6. Arándano con distorción de hojas Causado por Peach Rosette Mosaic Virus - PRMV

23 4.7. OTROS VIRUS (Ar.) Los brotes de un arándano infectados con ToRSV, mostrando lesiones cloróticos y necróticos de hojas y tallos

24 3. Coloración verde oscura y púrpura de hojas de arándano debido a la deficiencia de fósforo(p).

25 V. OBSERVACIONES DE ASPECTOS FISIOLOGICOS 1. Clorosis y enrojecimiento de hojas de arándano con deficiencia de nitrógeno

26 2. Crecimiento Reducido Enrojecimiento anormal del tallo, hojas y márgenes de hojas causada por deficienciade nitrógeno(n). Deficiencia de potasio(k) y fósforo(p) causa síntomas similares.

27 II. MUESTREO DE MATERIAL VEGETAL PARA LA DETECCIÓN DE VIRUS Métodos de muestreo Son esenciales para la detección e identificación de agentes patógenos (distribución en las plantas hospederas pueden ser irregulares o heterogéneas)

28 ELECCION DE LA MUESTRA Arboles Asintomáticos Secolectan4ramasconhojas(de10a15cmdelargo). Lasramasnodebenserviejas,perotampocodebenserdelos brotes recién formados o nuevos.

29 Si no hay ramas disponibles (ejem: plantinespequeños de viveros) Se colectan 15 a 20 hojas completamente expandidas y endurecidas de cada una

30 ENVÍO ENVIO DE MUESTRAS DE SEMILLAS VEGETALES

31 ENVÍO DE MUESTRAS VEGETALES IMPORTANTE Envío de las muestras se realice en corto tiempo y sobre todo, es necesario proteger las muestras de la temperatura (4 C) Si no es así: Las hojas comenzarán a oxidarse (NO es recomendable procesar ese tejido para hacer el diagnóstico) RECOMENDACIÓN: Envíen ramas con hojas (sintomáticas o asintomáticas).

32 ENVÍO DE MUESTRAS VEGETALES 1. Colocar las muestras de ramas con hojas (u hojas solamente) en papel toalla o bien en bolsa de papel

33 ENVÍO DE MUESTRAS 2. Introducir cada muestra en una bolsa de plástico. 3. Colocar sobre la bolsa el número de identificación de la muestra (se sugiere asignar un número consecutivo y garantizar que la etiqueta no se borre). 4.Sacarelairedelabolsaycerrarla.

34 ENVÍO DE MUESTRAS 5. Colocar las muestras en hielera con refrigerantes para protegerlas de la temperatura oscilante y evitar la oxidación de las hojas. 6. Las muestras deberán enviarse preferentemente el mismo día de su colecta, si esto no es posible, es necesario mantenerlas en refrigeración (4 C) para enviarlas el día siguiente. 7.Elenvíodelasmuestrasdeberá acompañarse de una solicitud de diagnóstico llenada correctamente. 8. Notificar el envío de muestras al laboratorio y considerar los días laborales.

35 Toma y envío de muestras para descarte de ASBVd Se recomienda tomar muestras de tres partes de la planta, las hojas deben ser jóvenes de aproximadamente 1 a 2 meses de desarrollo, de color verdoso brillante. Se tomaran de3 a 5 hojas por cada sector, formándose una muestra por árbol la cual contara con 15 hojas de plato, 5 apicales, 5 media y 5 basales. Las muestras deberán ser colocadas en papel toalla y envueltas en una bolsa plástica, si la toma de muestras demora mas de un día es recomendable que las muestras sean refrigeradas a 4 grados centígrados, teniendo siempre en cuenta que la bolsa debe estar cerrada sino se desecara la muestra y no se podrá hacer el análisis. No congelar el material ya que provoca daño en el tejido. Lo ideal es enviar la muestra el mismo día de la toma de muestra en el campo, caso contrario acompañar las muestras con geles refrigerantes dentro de una caja tecnopor.

36 II. MUESTRAS RECHAZADAS A) Muestras deshidratadas enviadas solo en bolsas de plástico

37 MUESTRAS RECHAZADAS B) Muestras deshidratadas, enviadas solo en bolsas de papel toalla y papel kraft.

38 MUESTRAS RECHAZADAS C) Muestras oxidadas o deterioradas, a pesar de estar en papel toalla y bolsas de plástico debido a que la muestra tenía exceso de humedad.

39 Otros causales de rechazo Los datos de la solicitud no corresponden a la muestra. Cantidad insuficiente de muestra Parte vegetal no adecuada para el ensayo etc

40 Gracias

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