UNIVERSIDAD VERACRUZANA

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1 UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA IDENTIFICACION Y FRECUENCIA DE NOSEMOSIS EN COLMENAS DE ABEJAS Apis mellifera EN LA REGION APICOLA GOLFO CENTRO DE MEXICO TRABAJO RECEPCIONAL EN LA MODALIDAD DE: TESINA COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL TITULO DE: MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA PRESENTA: ANDRÉS GUERRERO SÁNCHEZ ASESOR M en C. Sóstenes Rafael Rodríguez Dehaibes H. VERACRUZ, VER. JULIO 2010

2 INDICE GENERAL Página 1.0 Introducción Antecedentes Apicultura en México Nosemosis Historia de la nosemosis Epizootiología Ciclo biológico de Nosema spp Patogenia Diagnostico Tratamiento Situación actual de nosemosis en México Justificación Objetivos Objetivo general Objetivos específicos 15 ii

3 6.0 Materiales y métodos Área de estudio Material y equipo Obtención de las muestras Colecta de muestras Período de estudio Metodología Resultados y discusión Conclusión Bibliografía 25 iii

4 ÍNDICE DE CUADROS Página Cuadro 1. Determinación del grado y nivel de infestación de Nosema spp. 20 Cuadro 2. Número de muestras y grado de infestación.. 22 iv

5 ÍNDICE DE FIGURAS Pagina Figura 1. Esporos de Nosema apis Zander observados al microscopio óptico a 40 x 7 Figura 2. Ciclo biológico de Nosema spp.. 8 Figura 3. Ubicación de la empresa Citrofrut S.A. de C.V. carretera Perote-Nautla Km 120.5, Paso Largo Martínez de la Torre, Ver.. 16 v

6 DEDICATORIA A mis padres la Sra. Matilde Sánchez Galicia y el Sr. Amado Guerrero Molina, porque me han dado su amor y apoyo incondicional a lo largo de la vida, inculcándome valores para poder triunfar; los quiero muchísimo. A mí cuñado Ciro y a mi hermana Pati a quienes quiero mucho y han sido mis segundos padres, que pese a sus dificultades siempre me han dado su apoyo incondicional, motivándome para llegar hacer una persona exitosa. A mis queridos hermanos, Amado, Ramiro, Lili, Héctor, Erick, Mau y Magda quienes me han dado todo su cariño y apoyo cuando más lo he necesitado, estoy orgulloso de ellos y agradezco a Dios por darme unos excelentes hermanos. A mi amigo Agustín por el apoyo incondicional que me ha brindado en el último año de la carrera. Muchas gracias. vi

7 AGRADECIMIENTOS Agradezco al M en C. Sostenes Rafael Rodríguez Dehaibes por dedicar parte de su tiempo para la asesoría de este trabajo así como también a la empresa Citrofrut ApiZano por el apoyo y las comodidades brindadas. A mis sinodales el Dr. Álvaro E. de J. Peniche Cardeña y al M en C Genaro Cocom Euan por dedicar parte de su tiempo para la revisión de este trabajo. A mis compañeros, Víctor Balderrama, Juan Crispín, Erick Fuentes, Fernando González, Raúl Galván, Emmanuel Jiménez y Gustavo Vela por el apoyo y los momentos que compartimos a lo largo de la carrera. vii

8 La vida me ha enseñado, que al tratar de agradecer a las personas que han contribuido a mi existencia, así como a mi desarrollo profesional, podría ser injusto si olvidara a alguien, tratando de mencionar uno por uno. Es por eso que las personas que tendría que mencionar individualmente, saben que al decir que Dedico este trabajo de titulación a todos, están incluidos. Y estarán de acuerdo que a la persona que no puedo dejar de agradecer y mencionar, es a Dios y a la Virgen María, quien agradezco diciéndole: Padre Nuestro Dios te salve María... viii

9 RESUMEN Guerrero Sánchez Andrés, 2010, Identificación y frecuencia de Nosemosis en colmenas de abejas Apis mellífera en la Región Apícola Golfo Centro de México. Tesina, Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Veracruz, Ver; México. Asesor: M en C. Sóstenes Rafael Rodríguez Dehaibes. Los pocos casos reportados de nosemosis en abejas Apis mellifera en la región ha ocasionado que no se realice un monitoreo continuo para conocer la presencia y nivel de infestación. Se realizó un muestreo en la Región Apícola Golfo Centro de México para determinar la presencia, el nivel y grado de infestación mediante la técnica descrita por Cornejo y Rossi basada en el conteo de esporos mediante la cámara de Neubauer. Los resultados obtenidos fueron menores a 1 o nivel de infestación muy leve para la localidad de Misantla, mientras que las localidades de Tlapacoyan, Veracruz y Mtz. de la Torre no presentan la enfermedad. Palabras Clave: nosemosis, infestación, Apis mellífera, técnica Cornejo y Rossi, esporos. ix

10 1.0 INTRODUCCIÓN Uno de los factores más importantes para la obtención de un alto rendimiento en apicultura, está dado fundamentalmente por la sanidad apícola, debido a las diversas enfermedades que atacan a las abejas, traduciéndose así en una disminución de las poblaciones existentes en las colmenas (Chen et al., 2009). Un patógeno particular puede ser letal para las abejas, pero la colonia puede ser capaz de compensar su pérdida. El síndrome de despoblación de las abejas ha sido recientemente el foco de muchos reportes donde se ha tratado de determinar el porqué las colonias fuertes, han llegado a debilitarse y ocasionalmente han muerto (Higes et al., 2008). La Nosemosis es una enfermedad parasitaria, la cual causa pérdidas económicas considerables en la industria apícola mundial (Sagarpa 1997). Esta parasitosis genera una grave desnutrición en la abeja productora de miel y, como consecuencia, la muerte prematura de éstas. La colonia (al menos en los climas templados) sufre esta enfermedad principalmente en el otoño y primavera, siendo en el ámbito productivo generadora de importantes pérdidas (Higes et al., 2008). Hasta el año 1993 y publicado en 1995, el organismo causal de esta patología eran Nosema apis, microsporidio y parásito específico del tracto intestinal de las abejas melíferas europeas Apis mellífera (Sarlo et al., 2009). Este concepto se mantuvo hasta el año 1996, cuando se publica la descripción de otro agente causal Nosema ceranae, en la abeja melífera asiática Apis ceranae. 1

11 Se realizaron infestaciones cruzadas demostraron que N. ceranae no solo se multiplicaba en la abeja europea sino que también lo realiza con una mayor virulencia. Para el año 2007, se presenta una situación a nivel mundial de la presencia de este parásito en colonias de A. mellifera destinadas a la producción con registros para Europa, España, Francia, Italia, Alemania, Dinamarca, Finlandia, Suiza, Serbia y Grecia; para Asia y Oceanía; Vietnam y Nueva Zelanda. Para América 3 registros: Estados Unidos, Argentina y Brasil (San Paulo). Desde el año 1999 el Laboratorio de Artrópodos de la Universidad Nacional de Mar del Plata cuenta con registros de esta patología que no concordaban exactamente con los síntomas a nivel de colonia descriptos para N. apis, pero sí con los presentados recientemente para N. ceranae, mortalidad sin deyecciones y desabejados masivos (Sarlo,2008). 2

12 2.0 ANTECEDENTES 2.1 APICULTURA EN MÉXICO La miel de abeja en México es uno de los productos naturales de mayor importancia. Nuestro país cuenta con una gran tradición en la producción de miel de abeja desde hace más de dos siglos (Sagarpa, 2007). En 2008 se exportaron 30,866 toneladas de miel, de las 55,271 toneladas producidas en el país, con un valor de 83.8 millones de dólares, cifra record en los últimos 15 años, siendo sus principales destinos: Alemania, Gran Bretaña, Arabia Saudita, Suiza, EE.UU. y Japón. México ocupa el tercer lugar como exportador mundial de miel de abeja y es el quinto productor, después de China, Argentina, EE.UU y Turquía. El año pasado, de acuerdo con la FAO, la producción fue de 1, 073,017 toneladas en todo el mundo (Álvarez, 2009). La apicultura mexicana se ubica entre los primeros lugares en el sector pecuario nacional como generadora de divisas, sobre todo porque el dulce que se produce en el país es una de las mieles de mejor calidad y más cotizadas en el mundo (SAGARPA, 2007). 2.2 NOSEMOSIS La Nosemosis también es conocida como Nosemiasis o Enfermedad de la desaparición espontánea, es una parasitosis del tracto digestivo de las abejas adultas, causada por el protozoario Nosema apis Zander y descubierto recientemente Nosema ceranae que a partir del 2005 fue detectado en las abejas 3

13 Apis mellifera. La enfermedad es altamente contagiosa y los daños que ocasiona pueden ser muy graves cuando el nivel de infección es elevado (Sagarpa, 2002). 2.3 HISTORIA DE LA NOSEMOSIS Las primeras noticias sobre las enfermedades de las abejas, las reportan algunos sabios de la antigüedad como Aristóteles, Virgilio, Plinio entre otros, quienes se ocuparon del problema indicando enfermedades como la nosemosis, la acariosis y las diarreas (Cornejo y Rossi, 1975). En la historia de la patología apícola, Pasteur marco un verdadero descubrimiento, al estudiar la enfermedad del gusano de seda (Bombix mori).estos estudios dieron la base a numerosos investigadores en el campo de la Nosemosis de las abejas, causada por un protozoario de la misma familia y género del que originaba el mal del gusano de seda (Cornejo y Rossi, 1975). El primero en observar las esporas del Nosema apis, fue Donhoff en 1857, y en 1909 Zander demostró que las esporas eran la causa de una enfermedad enzoótica de las abejas a la que denominó nosemiasis (Sagarpa, 1997). Posteriormente en 1912 se describe la existencia de un protozoario parásito del tracto intestinal de la abeja adulta y lo denominaron Nosema apis Zander, ello en honor de este investigador alemán quién en 1909, había ya descrito este parasito (Sarlo 2008). 4

14 Poco después en la Universidad de Wisconsin se realizaron importantes investigaciones, principalmente el estudio de la correlación entre la esporulación de Nosema apis Zander y los agentes climáticos. En 1972 en Brasil se inicio el primer curso de profilaxis y prevención de enfermedades de las abejas adultas y se realizó la primer curva de esporulación de Nosema apis Zander para esa zona determinándose la incidencia principal en primavera (Cornejo y Rossi, 1975). En cuanto a Nosema ceranae originario de Apis cerana, miembro de los microsporidios descubiertos por Pasteur, fue descrita por primera vez de las colonias de la abeja melífera de Asia, Apis cerana, causante de la enfermedad denominada Nosemosis que ataca las abejas adultas. Desde su descubrimiento en China se ha presentado una distribución mundial muy rápida y al parecer compite con N. apis, debido a que en la mayoría de los estudios realizados se encuentra que las abejas están parasitadas por N. ceranae o bien por el conjunto de N. ceranae y N. apis. Este nuevo parásito produce en las abejas signos muy parecidos a los que desencadena N. apis aunque se sospecha la posibilidad de que sea responsable de la sintomatología conocida como "despoblamiento" o "desabejamiento" de las colmenas (Chen et al., 2009). Hasta hace unos años se conocía a N. apis como el único agente causal de Nosemosis en A. mellifera. Pero a partir del año 2005 es detectada Nosema ceranae en Apis mellifera en Taiwán, España Alemania y E.E.U.U (Sarlo et al., 2009). 5

15 La característica de Nosema ceranae es despoblamientos de colmenas, esta característica ya se presentaba en Argentina, por lo que el Laboratorio de Artrópodos de la Universidad Nacional de Mar del Plata, decidió iniciar investigaciones en búsqueda de determinar la presencia de este nuevo parasito en las abejas argentinas. Los resultados preliminares indicaron la posibilidad de tener este patógeno en Argentina. Poco después el mismo laboratorio realizó un estudio para la determinación de Nosema ceranae por la técnica de biología molecular y los resultados obtenidos determinaron que N. ceranae se encuentra ampliamente distribuido en la región Sudeste de la Provincia de Buenos Aires (Sarlo et al., 2009). 2.4 EPIZOOTIOLOGÍA La Nosemiasis se considera la enfermedad de las abejas más diseminada en el mundo, por lo que se ha encontrado en todos los países donde se practica la apicultura. Esta enfermedad es exclusiva de abejas adultas. Se encuentra latente durante todo el año dentro de las colmenas, y se hace aparente después de períodos de confinamiento de las abejas dentro de su colmena (lluvias, fríos, vientos, nevadas, etc.); entre más largo sea el período de encierro, más grave es la manifestación de la enfermedad. Los apiarios ubicados en lugares húmedos, fríos o con mucha sombra, suelen tener niveles de infección más altos que los situados en lugares secos y soleados (SAGARPA 2002). 6

16 2.5 CICLO BIOLÓGICO DE Nosema spp. La fase larvaria inicial y final están constituidas por la espora que sirve para la diseminación de la enfermedad (Figura 1). Figura 1.Esporos de Nosema apis Zander observados al microscopio óptico a 40 x. La infestación se produce por vía oral y el ciclo biológico comienza cuando una abeja adulta ingiere las esporas de Nosema spp. Al llegar las esporas al ventrículo (o estómago de las abejas), y debido entre otras causas a que los jugos estomacales tienen un ph básico, el casquete polar de las esporas se digiere. Al digerirse el casquete polar comienzan a entrar líquidos en la espora ejerciendo presiones que causan que el filamento polar se dispare y salga al exterior perforando las células epiteliales del tubo digestivo. Posteriormente y como causa de estas presiones, el contenido de la espora se inyectará en las células epiteliales del ventrículo de la abeja. 7

17 En el citoplasma de la célula epitelial de la abeja crecerá el esporoplasma de Nosema spp. y se fusionaran los dos núcleos, transformándose en meronte (célula madre) que se dividirá asexualmente, originando merozoitos (células hijas), este proceso se conoce como merogonia. Los merozoitos en un momento determinado se diferencian en esporontes, donde cada esporonte dará origen a dos esporoblastos, que una vez maduros darán lugar a una espora. Las esporas serán vertidas al lumen del tubo digestivo, con lo cual pueden infectar otras células epiteliales y aumentar la infección de esa abeja o salir al exterior con las heces (Figura 2). Figura 2. Ciclo biológico de Nosema spp. Fuente: Pacheco

18 Si la infestación de las células epiteliales no es detenida (por mejoría del tiempo o por medio de un tratamiento), las funciones digestivas de la abeja son inhibidas en dos ó tres semanas, lo que acarrea un debilitamiento progresivo y una muerte prematura del insecto huésped. El parásito también pasa del tracto digestivo a otros órganos como los túbulos de Malpighi, tejido adiposo, músculos torácicos, glándulas hipofaríngeas y ovarios, causando disfunciones en todos estos órganos (IICA, 2009). Las obreras nodrizas infectadas producen poca jalea real o dejan de producirla, mientras que las reinas ponen menos y sus huevos y crías son menos viables. Todos estos daños provocan una reducción de la población de la colonia, una baja productividad y cuando el caso es severo, la perdida de la colonia. El ciclo biológico de Nosema ceranae es similar con la diferencia que no se produce diarrea en las abejas (Sarlo 2008). 2.6 PATOGENIA Cuando las abejas no pueden salir de su colmena por varias semanas o meses, se ven obligadas a defecar sobre los panales contaminándolos con esporas cuando están enfermas. Los panales son limpiados por las obreras jóvenes, las cuales adquieren la enfermedad. Las reinas la adquieren con la jalea real proporcionada por abejas nodrizas enfermas; los zánganos se infectan cuando reciben alimentos de las obreras por medio de la trofalaxia (de boca a boca). 9

19 Efectos nocivos sobre las abejas: Altera el metabolismo: hay menor digestión de las proteínas (polen), disminuyen así las energías (sustancias de reserva) y se reduce su longevidad. Se produce atrofia de las glándulas hipofaríngeas, que degeneran y atrofian prematuramente. Sobre la reina: se atrofian los ovarios hasta producir esterilidad (recambio frecuente de la reina). Anemia: se manifiesta como una parálisis, al no tener fuerza para mover las alas y volar (Tanús 2008). 2.7 DIAGNÓSTICO Entre las diferentes técnicas de diagnóstico se tienen: 1. Laboratorio. Se diagnostica visualizando esporos ya sea de Nosema apis Zander o Nosema ceranae en preparación microscópica. Dado que la Nosemiasis puede confundirse con otras enfermedades, la ayuda del laboratorio es fundamental para establecer el diagnóstico. El laboratorio debe reportar si existe la enfermedad y a qué niveles de infección. Los niveles de infección se establecen de acuerdo con el número de esporas que se hayan encontrado por abeja analizada. Por lo que la severidad de la enfermedad se estima como sigue: 10

20 Intensidad de la Infección No. de Esporas (millones/abeja) Muy ligera 0,01-1,00 Ligera 1,00-5,00 Regular 5,00-10,00 Semisevera 10,00-20,00 Severa Más de 20,00 Fuente: Cornejo y Rossi (1975). 2. Biología molecular. Caracterización por PCR para diferenciación entre N. ceranae y N. apis (IICA, 2009). 2.8 TRATAMIENTO Se han probado muchos fármacos para el tratamiento de la Nosemiasis, pero pocas han dado resultado. No hay duda de que la mejor opción es el uso de la fumagilina, pudiendo ser una segunda opción el uso de sulfas (aunque su efectividad es menor al 60% comparada con la fumagilina). Sin embargo, estos medicamentos afectan a la salud humana por su residualidad en la miel, por lo que ha sido prohibido el uso de los mismos. Los tratamientos también implican medidas de manejo y fumigación del equipo, por lo que resultan costosos; por ello, sólo se recomienda tratar a las colonias cuando los niveles de infección sean de 5 millones de esporas por abeja (infección regular) o superiores. Fumagilina: Es un antibiótico que se obtiene del hongo Aspergillus fumigatus, es un producto de importación que se vende comercialmente como Fumidil B o como 11

21 Nosema-X. La fumagilina es 100% eficaz contra la forma vegetativa de Nosema, pero no destruye las esporas del parásito, razón por la que la infección no puede ser del todo eliminada, pero sí controlada. Se recomienda administrar un jarabe de agua y azúcar que contenga 25 mg del producto activo por cada litro. Se deben proporcionar 4 litros de jarabe a cada colonia (100 mg en total) (Sarlo 2005). Fumigación del equipo.- Los panales procedentes de colonias infectadas, pueden tratarse con los gases liberados por una dilución de ácido acético al 80% (4 partes de ácido acético glacial por 1 de agua), los gases de este producto destruyen las esporas del Nosema apis. El procedimiento consiste en apilar cubos con su paneles y depositar un trapo empapado con 150 cc (ml) del producto sobre los cabezales de los bastidores de cada cuerpo de colmena. Luego de una semana los panales estarán libres de esporas. Estas fumigaciones también controlan las polillas. Es importante mencionar que tanto el uso de quimioterápicos como la fumigación del equipo no tendrán los efectos deseados si no se llevan buenas prácticas de manejo. Los tratamientos, fumigaciones y medidas de manejo deben ser continuos en los criaderos de reinas donde el problema sea enzoótico. El muestreo y diagnóstico anual de todos y cada uno de los apiarios debe ser una práctica de rutina mientras exista la enfermedad. 12

22 3.0 SITUACIÓN ACTUAL DE NOSEMOSIS EN MÉXICO En México el primer reporte de nosemosis se realizo en 1965, 15 años después se realizo otro estudio donde se obtuvo una prevalencia a nivel nacional de 3.8 % por lo que no se consideraba una problemática para la apicultura, sin embargo, estudios realizados en 1990 revelaron una prevalencia de un 7.2 % cifra que se elevó a un 14.8 % en 1992 y a un 81.8 % en el 2006 (Martínez y Medina, 2009). La principal problemática que causa la elevada prevalencia de nosemosis es la presencia del acaro V. destructor, debido a que provoca el debilitamiento de la colmena (Cisneros 2010). Reportes de la elevada prevalencia de N. apis en Yucatán, podrían deberse a la presencia de Nosema ceranae ya que se ha reportado que se encuentra parasitando a las abejas A. mellifera en gran parte del mundo. En Yucatán la elevada prevalencia de Nosemosis tiene un comportamiento similar al descrito en España, aunque aun no existen reportes relacionados con el despoblamiento de las colonias, lo cual posiblemente se deba a que se cuenta con la presencia de la abeja africanizada la cual presenta diversos mecanismos de resistencia a diversas enfermedades (Martínez y Medina, 2009). 13

23 4.0 JUSTIFICACIÒN Como sabemos, la sanidad es uno de los tres pilares más importantes para tener una apicultura rentable. Debido a una falta en el monitoreo de las enfermedades de las abejas no es posible conocer e identificar las enfermedades que afectan a dicha especie. Como la nosemosis es una enfermedad que necesita diagnóstico de laboratorio y no se encuentran datos suficientes para determinar si se hace o no tratamiento, la realización de esta investigación tiene como principio el identificar y conocer la frecuencia de nosemosis (N. ceranae o N. apis) en la Región Apícola Golfo Centro de México. 14

24 5.0 OBJETIVOS 5.1 OBJETIVOS GENERAL Identificar y conocer la frecuencia de Nosemosis en abejas Apis mellifera en la región Apícola Golfo centro de México. 5.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS Identificación y conteo de esporos de Nosema mediante la técnica Cornejo- Rossi basado en la cámara de Neubauer. Determinar del nivel y grado de infestación de acuerdo a la escala a partir de la técnica Cornejo y Rossi. 15

25 6.0 MATERIALES Y MÉTODOS 6.1 Área de estudio El estudio se realizo en el Laboratorio de ApiZano de la empresa Citrofrut S.A de C.V donde se realizarán los análisis correspondientes para la identificación de nosemosis. La empresa Citrofrut S.A de C.V se encuentra ubicada en el estado de Veracruz, carretera Perote-Nautla km 120.5, Paso Largo Martínez de la Torre, Veracruz, con las coordenadas geográficas de 20º Latitud Norte y 96º Longitud Oeste. Presenta un clima tropical con una temperatura durante el verano de 35ºC y durante el invierno de 18ºC (Figura 3). APIZANO CITROFRUT Figura 3.Ubicación de la empresa Citrofrut S.A. de C.V. carretera Perote-Nautla Km 120.5, Paso Largo Martínez de la Torre, Ver. 16

26 6.2 MATERIAL Y EQUIPO Los materiales utilizados se dividen en implementos de laboratorio, equipos y material biológico. Implementos de laboratorio y equipo fueron los siguientes: Pinzas de disección de punta fina. Pipeta de 0.5 ml. Mortero de porcelana de 15 cm. De diámetro. Pistilo. Cámara de Neubauer. Porta objetos. Cubre objetos. Vaso de precipitado de 100 cc. Microscopio óptico binocular. Material biológico. El material utilizado fue: Muestras de 750 abejas adultas, particularmente abejas pecoreadoras. 17

27 6.3 OBTENCION DE LAS MUESTRAS Para la realización de dicho estudio se colectaron 735 abejas obtenidas de colmenas de 5 apiarios. Se considero que 35 abejas conformarían una muestra por lo que en total se obtuvieron 21 muestras. Los cinco apiarios se encuentran localizados en las regiones de, Tlapacoyan, Misantla, Martínez de la Torre y Veracruz, pertenecientes a la región apícola Golfo Centro de México. 6.4 COLECTA DE MUESTRA Para la toma de muestra se debe utilizar frascos de plástico con cierre hermético de 250 ml. Para la conservación de las muestras se utilizo formol al 4%. Inicialmente se tapo la piquera con la finalidad de colectar la muestra de abejas retornantes del pecoreo, ya que estas son las abejas más viejas o de más edad en donde podemos encontrar con mayor precisión la presencia de este protozoario. Se sugirió que 35 abejas conformarían una muestra, esto con la finalidad de que el análisis resulte representativo. Las abejas colectadas se conservaron en 100 ml. de formol al 4 % para su análisis. 6.5 PERIODO DE ESTUDIO Las muestras colectadas se obtuvieron durante el periodo comprendido entre mayo y junio del

28 6.6 METODOLOGÍA Ya colectadas las muestras, se comenzaron a analizar en el Laboratorio de ApiZano. Se sacan las 35 abejas del frasco, posteriormente con las pinzas de disección de punta fina se va separando el abdomen del tórax de cada abeja, los cuales se fueron depositando en un mortero de porcelana previamente lavado y enjuagado con agua destilada. Una vez obtenidos los 35 abdómenes y colocados en el mortero, se procedió a realizar el macerado con el pistilo, agregando 7 cc. de agua destilada. Posteriormente el macerado se filtro en un colador de malla metálica de 1 mm por 1 mm. El filtrado obtenido del macerado se guardo en un frasco de 40 ml. Se realizo el mismo procedimiento para las 20 muestras restantes. Para la identificación de las esporas se utilizo la cámara de Neubauer y un cubreobjetos, la observación se realizo directamente en la cámara. La cámara debe estar bien limpia, debe ser enjuagada con agua destilada y secarla. Se homogeniza el filtrado que se obtuvo del macerado; con la pipeta de 0.5 ml se toma un poco del filtrado y se coloca una gota sobre los retículos de la cámara y se coloca un portaobjetos. Todas las muestras se observaron al microscopio optico a 10 x y posteriormente a 40 x para la identificación de esporos. 19

29 Para realizar la cuantificación se procede a contar la cuadricula de la cámara de Neubauer de la siguiente forma. Se debe primero comentar que cada retículo, es un cuadrado de 1 mm², el cual se halla dividido en 16 cuadros más pequeños. Según Cornejo Y Rossi (1975) se contaràn los esporos que se observan en 40 cuadritos de los mas pequeños, los cuales corresponden a 2 ½ cuadrados de los grandes. Se recomienda no hacer menos de 3 recuentos para sacar el promedio y disminuir así el error. El resultado se multiplicará por 10,000 y esta será la cantidad de esporos por mm³ obtenidos (Cuadro 1). No se cuentan los esporos encontrados en la línea inferior e izquierda de los cuadros ni los que están en las líneas que separan los recuadros. Cuadro 1. Determinación del grado y nivel de infestación de Nosema spp. VALORACIÓN EN GRADO DE INFECCION Nº DE ESPORAS/MM3 NIVEL DE INFESTACIÓN a MUY LEVE a LEVE a MEDIO a GRAVE 5 Superior a MUY GRAVE 20

30 7.0 RESULTADOS Y DISCUSIÓN De acuerdo al análisis realizado en laboratorio solo se identificaron esporos en 1 de las 21 muestras obtenidas. (Cuadro 2). La muestra positiva pertenece al apiario muestreado en la localidad de Misantla. Una vez identificado los esporos se procedió al conteo para conocer el grado de infestación. De acuerdo a la técnica de conteo de esporos según Cornejo Rossi (1975), el número de esporos contados fue de 6.000/mm³. Obtenido este resultado el grado de nosemosis encontrados en la muestra no fue superior a 1, que equivale a un nivel de infección muy leve (dentro de una escala de 1 a 5, basada en la valoración establecida por Cornejo y Rossi (1975). Esto nos indica que la muestra positiva representa el 4.6 % del total de las muestras analizadas. Mientras que en el 95 % de las muestras no hay presencia de la enfermedad. El 95 % de las muestras negativas observadas al microscopio solo se observaron granos de polen. Pacheco (2008) menciona que dentro de los múltiples factores predisponentes a la esporulación las condiciones ambientales y el manejo de las colmenas son las principales causas de la enfermedad. 21

31 Cuadro 2. Numero de muestras y grado de infestación. Municipio Numero de apiarios muestreados Numero de muestras Numero de muestras positivas Grado de infestación Nivel de infestación Veracruz Tlapacoyán MIsantla Muy leve Martínez de la torre Otro factor preventivo muy importante es el recambio de reinas en cada colmena, es una actividad periódica que va modificando los patrones fenotípicos, así también, como medio para evitar la caída en la efectividad de postura de huevos. Los apicultores de estos apiarios realizan una revisión constante de sus colmenas y realizan tratamientos periódicos contra la varroasis. (Martínez y Medina, 2009) nos dicen que la principal problemática que causa la elevada prevalencia de nosemosis es la presencia del acaro V. destructor, debido a que provoca el debilitamiento de la colmena. Molina et al. (1990),citado por Pacheco (2008) señala que la tendencia estacional de la infección exhibe niveles bajos durante el verano, una pequeña presencia en otoño y una subida lenta de la infección durante el invierno, aumentando en primavera, debido a una mayor esporulación. 22

32 Es importante realizar un monitoreo periódico sobre la nosemosis ya que recientemente se ha detectado Nosema ceranae y esta ha estado parasitando a Apis mellifera en gran parte del mundo. Pese a que no existe un programa de monitoreo para diagnosticar la nosemosis en esta región, las constantes asesorías que reciben los apicultores por parte de los médicos veterinarios de la empresa ApiZano sobre la importancia de la sanidad, el manejo adecuado, la genética y la nutrición en las colmenas le ha ayudado al apicultor a mantener colmenas fuertes y en bajos niveles de incidencia de enfermedades. Otro factor importante es el clima de esta región ya que los efectos de nosemosis se consideran poco importantes en los climas tropicales y subtropicales, a diferencia de los países con climas templados, donde la esporulación se ve estimulada por las temperaturas y humedad predominantes. Además FRIES et al. (2003) citado por Pacheco (2008) señalan que no hay suficiente información disponible para evaluar el impacto de este parásito en climas cálidos. La época de muestreo es otra variante importante para conocer el nivel de infestación de Nosema ya que el muestreo se realizo a finales de primavera y principios de verano, siendo que los mayores índices de la enfermedad se presentan al inicio de la primavera después del confinamiento de invierno. 23

33 8.0 CONCLUSION Se logró identificar la nosemosis solo en colmenas pertenecientes a la localidad de Misantla, aunque su nivel de infestación se clasificó como muy leve. 24

34 9.0 BIBLIOGRAFIA Álvarez, R Exporta México en el 2008 miel con valor de http// marzo 2010). Chen Y,.Jay D.E., Liang Z, Boncristiani H.,Kimura K.,Xiao T Asymmetrical coexistence of Nosema ceranae and Nosema apis in honey bees. Journal of Invertebrate Pathology.101: Cisneros, C.M.L., 2010.Indices de Resistencia de Varroa destructor a dos plaguicidas usados para su control en la Región Apícola, Golfo Norte de México. Tesis de licenciatura, Universidad Veracruzana, Veracruz Ver.p 13. Cornejo, G, L,.Rossi, O, C, 1975.Enfermedades de las abejas, Editorial Hemisferio Sur, Pp Higes M.; Martín.H. R.; Garrido.B.E. Meana A How natural infection by Nosema ceranae causes honey bee colony collapse. Journal Environmental Microbiology. 13: IICA (2009).Instituto Interamericano De Cooperación Para La agricultura. Manual de enfermedades apícolas. /Manual%20de%20Enfermedades%20Apicolas.pdf. (Consultado Marzo 2010) Martínez, P.J.F., Medina, M.L.A., Situación actual de las principales parasitosis en abejas africanizadas en el estado de Yucatán In: Memorias del XXIII Seminario Americano de Apicultura Tampico P Pacheco, A.L.B Niveles de infección de Nosema apis Zander (Microspora Nosematidae) en abejas adultas (Apis mellifera L.) y su relación con características del apicultor. Tesis de licenciatura. Universidad Austral de Chile. Valdivia- Chile p. SAGARPA NORMA Oficial Mexicana NOM-056-ZOO-1995, Especificaciones técnicas para las pruebas diagnósticas que realicen los laboratorios de pruebas aprobados en materia zoosanitaria. Secretaría de Agricultura, Ganadería y Desarrollo Rural, publicada en el diario oficial de la federación el 13 de octubre de SAGARPA México tercer lugar como exportador de miel de abeja.deleg. Reg. Mayo (7): Pp

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