HISTORIA DE LAS ENFERMEDADES EN EL CULTIVO DE CAMARÓN EN EL NOROESTE DE MÉXICO VII Simposio Internacional de Sanidad e Inocuidad Acuícola

Transcripción

1 HISTORIA DE LAS ENFERMEDADES EN EL CULTIVO DE CAMARÓN EN EL NOROESTE DE MÉXICO VII Simposio Internacional de Sanidad e Inocuidad Acuícola DR. JOSÉ CUAUHTÉMOC IBARRA GÁMEZ 29 Y 30 DE SEPTIEMBRE, ENSENADA BAJA CALIFORNIA

2 INSTITUTO TECNOLOGICO DE SONORA Departamento de Ciencias Agronómicas y Veterinarias LABORATORIO DE ANÁLISIS DE SANIDAD ACUÍCOLA EDIFICIO DE ACUACULTURA CENTRO DE INVESTIGACIÓN E INNOVACIÓN EN BIOTECNOLOGÍA AGROPECUARIA Y AMBIENTAL (CIIBAA)

3 EQUIPO DE TRABAJO CUERPO ACADÉMICO: BIOSISTEMAS ACUÁTICOS. LGAC: BIOTECNOLOGÍA ACUÍCOLA Y SANIDAD ACUÍCOLA. Dr. Fernando Lares Villa. Dr. Ramón Casillas Hernández. Dr. José Cuauhtémoc Ibarra Gámez. COLABORADORES. M.A.A. CECILIA GUADALUPE LUNA BADILLO MVZ. MARTHA ELENA QUIROZ MACIAS QBP. JOSE REYES GONZALEZ GALAVIZ. PROGRAMAS ACADÉMICOS VINCULADOS: INGENIERO EN BIOSISTEMAS. MAESTRÍA EN RECURSOS NATURALES. DOCTORADO EN BIOTECNOLOGÍA. TESISTAS: DOCTORADO: OCHO ESTUDIANTES. MAESTRÍA: DIEZ ESTUDIANTES. LICENCIATURA: DOCE ESTUDIANTES

4 ACREDITACIÓN EMA APROBACIÓN SENASICA

5 Servicios Muestreos para detección de patógenos en organismos acuaticos. Análisis en fresco, bacteriológico y microbiológico Diagnóstico molecular por PCR: virus y bacterias Histopatología Identificación de bacterias y antibiogramas Bioensayos (dietas, probióticos, desafíos)

6 TEMAS A TRATAR INTRODUCCIÓN: Camaronicultura en el Mundo Camaronicultura en México Camaronicultura en Sonora HISTORÍA DE LAS ENFERMEDADES EN SONORA Ciclos (L. stylirostris / IHHNV) Ciclos (L. vannamei / TSV) Ciclos (L. stylirostris / IHHNV) Ciclos (L. vannamei / WSSV) Enfermedades recurrentes en los diferentes ciclos de cultivo (TSV, IHHNV, NHP, Vibriosis) CASO DE VIBRIOSIS CICLO

7 PRINCIPALES PAÍSES PRODUCTORES DE CAMARÓN CHINA MÉXICO TAILANDIA ECUADOR INDONESIA BRASIL

8 CAMARONICULTURA EN MÉXICO Los estados productores de más del 80% de camarón de cultivo en México son: Sinaloa, Sonora, Tamaulipas y Nayarit. 2013,53,000 Ton. 2014,80,000 Ton.

9 LA CAMARONICULTURA EN SONORA A fines de la década de los 80 s, inició el cultivo de camarón con un enfoque comercial, mediante la creación de un programa de apoyo al sector social. Terrenos considerados no aptos para actividades agrícolas y pecuarias de la región, fueron utilizados para el cultivo de camarón. Inicia la construcción de los Parques Acuícolas de: LA ATANASIA EL TOBARI EL SIARI

10 LA CAMARONICULTURA EN SONORA Durante la década de los 90 s empieza a incorporarse poco a poco la iniciativa privada y la actividad camaronícola en Sonora empieza a desarrollarse. Hasta el 2009, Sonora tenía el primer lugar nacional en producción de camarón de cultivo. CABORCA Grandes perdidas de producción por enfermedades virales (WSSV). BAHÌA DE KINO CARDONAL TASTIOTA GUAYMAS CRUZ DE PIEDRA LOBOS MELAGOS ATANASIA TOBARI SIARI AQUIROPO SANTA BÁRBARA RIITO AGIABAMPO

11 El Siari 5 / 520 Has El Tóbari 19 / 1,550 Has La Atanasia 22 / 2,980 Has Los Mélagos 25 / 2,200 Has

12 Cruz de Piedra 6 / 400 Has Aquiropo 6 / 460 Has El Riito 10 / 950 Has Agiabampo 6 / 505 Has

13 Tastiota 13 / 4,400 Has Guaymas 1 / 45 Has Bahía de Kino 18 / 3,900 Has El Cardonal 7 / 13,300 Has

14 CICLOS Especie cultivada: Litopenaeus stylirostris Patógeno: Virus de la necrosis hipodérmica y hematopoyética infecciosa (IHHNV). SIGNOS CLÍNICOS : En L. stylirostris, causa severas epizootias, de curso agudo en juveniles de cultivos, semintensivos. Altas mortalidades (>90%).

15

16 CICLOS Especie cultivada: Litopenaeus vannamei. Patógeno: Virus de Síndrome de Taura (TSV). Signos clínicos : Camarones moribundos. cromatóforos expandidos. Urópodos rojos. Necrosis multifocal del epitelio. Cutícula suave. Intestino vacío. Mortalidades del 70 al 90% en fase aguda.

17

18 CICLOS Especie cultivada: L. stylirostris Patógeno: Virus de la necrosis hipodérmica y hematopoyética infecciosa (IHHNV). SIGNOS CLÍNICOS : Altas mortalidades. Decisión: cambiar nuevamente los cultivos a L. vannamei

19 CICLOS Especie cultivada: Litopenaeus vannamei. Patógenos: Virus del Síndrome de Mancha Blanca (WSSV). Altas mortalidades en los ciclos 2000, 2005 y 2010.

20 Incrustaciones Calcáreas en Cutícula del Cefalotórax

21 Mortalidad Ocasionada por WSSV

22 Mortalidad ocasionada por WSSV

23 Enfermedades recurrentes en los diferentes ciclos de cultivo (TSV, IHHNV, NHP, Vibriosis)

24 CICLOS Especie cultivada: Litopenaeus vannamei. Patógenos: TSV. (Presencia en los ciclos , 2006 y 2007) Fuente: COSAES

25 CICLOS Especie cultivada: Litopenaeus vannamei. Patógenos: IHHNV. (Presencia en los ciclos ) Granjas afectadas por disparidad de tallas. Fuente: COSAES

26 CICLOS Especie cultivada: Litopenaeus vannamei. Patógenos: Necrosis Hepatopancreática (NHP-B). (Mortalidades en ciclos) varios Fuente: COSAES

27 Signos clínicos de NHP Daños internos en hepatopáncreas (necrosis)

28 HISTORIA DE LAS ENFERMEDADES DEL CAMARÓN EN SONORA, MÉXICO. AÑO AREA (HA) PRODUCCIÓN (TON) NÚMERO DE GRANJA ESPECIE PATÓGENOS MORTALIDAD APROXIMADA (%) L. stylirostris IHHNV, VIBRIOSIS ,461 1, L. vannamei TAURA, VIBRIOSIS ,600 6, L. stylirostris IHHNV, VIBRIOSIS ,200 12, L. vannamei WSSV, VIBRIOSIS ,200 23, L. vannamei WSSV, VIBRIOSIS ,000 24, L. vannamei WSSV, NHP, VIBRIOSIS ,373 36, L. vannamei NHP, VIBRIOSIS ,824 50, L. vannamei NHP, TSV, VIBRIOSIS ,192 55, L. vannamei WSSV, NHP, TSV, VIBRIOSIS ,713 66, L. vannamei WSSV, NHP, TSV, VIBRIOSIS ,208 68, L. vannamei WSSV, NHP, IHHNV, TSV, VIBRIOSIS ,898 81, L. vannamei WSSV, IHHNV, NHP, VIBRIOSIS ,066 81, L. vannamei WSSV, NHP, IHHNV, TSV, VIBRIOSIS ,605 49, L. vannamei WSSV, NHP, IHHNV, VIBRIOSIS ,462 40, L. vannamei WSSV, NHP, IHHNV, TSV, VIBRIOSIS ,780 35, L. vannamei WSSV, IHHNV, NHP, VIBRIOSIS ,800 13, L. vannamei WSSV, IHHNV, NHP, enfermedad atípica >80 L. vannamei ,900 27, IHHNV, NHP, enfermedad atípica 60

29 CICLOS Especie cultivada: Litopenaeus vannamei. Patógeno: Vibriosis. Vibrios involucrados en enfermedades del camarón: V. harveyi V. parahaemolyticus V. vulnificus V. alginolyticus V. damsela (Fotobacterium damselae) V. penaeicida V. aguillarum V. nereis V. campbellii V. tubiashi V. fluvialis CEPAS IDENTIFICADAS CICLO 2003 CICLO 2008 CICLO 2013 PORCENTAJE (%) V. parahaemolyticus V. vulnificus V. alginolyticus 11 N.D 8 V. damsela V. fluviales Vibrio sp N.D V. hollisae N.D N.D 8 V. cholerae N.D 30 8 V. mimicus N.D N.D 3 V. cambellii N.D N.D 3 N.D = No Identificada Cepas de los ciclos 2003 y 2013 identificadas en INSTITUTO TECNOLÓGICO DE SONORA. Cepas del ciclo 2008 identificadas en la UNIVERSIDAD DE ARIZONA.

30 Daños externos causados por vibriosis

31 Daños internos en hepatopáncreas (necrosis)

32 Mortalidades atípicas en cultivos de camarón de México Comienzan en Marzo-Abril de 2013 en cultivos de Nayarit; para Abril se reporta en Sinaloa y Sonora. Muy parecida al EMS/AHPND reportado en Asia (FAO, 2013). Caída del 70% de la producción ($3 mil millones de pesos). Reantaso y Gómez Gil, 2013

33 Perdidas en producción nacional Reantaso y Gómez Gil, 2013

34

35

36

37 Investigaciones Caracterización e identificación de bacterias asociadas a cultivos de camarón. Montaje de nuevas técnicas de diagnóstico: virus y bacterias. Seguimiento en calidad de agua de maternidades o granjas. Análisis de componentes celulares en hemolinfa (evaluación de dietas y desafíos). Evaluación de antivirales contra WSSV Variaciones genotípicas de virus (WSSV, IHHNV) y bacterias (V. parahaemolyticus).

38 Estudios con V. parahaemolyticus Aislamiento, caracterización e identificación Antibiogramas Criopreservación Bioensayos (dietas-desafío) con Pl, juveniles y adultos, copépodos Antagonismo con bacterias marinas y extractos de algas Identificación por métodos moleculares Análisis de genes de distintos aislados Secuenciación 16S rarn

39 Tipo de Muestra Aislamiento, caracterización e identificación Toma de Muestra De muestras silvestres y camarón de cultivo. 280 cepas; 60 presuntivas. Antibiogramas Oxitetraciclina, Enrofloxacina, Florfenicol Criopreservación Ultracongelación de cepas para resguardo (-80 o C)

40 Aislamiento de bacterias

41 Desafíos de patógenos

42

43

44 Diagnóstico molecular Primer Secuencia blanco Autor TLH TDH, TRH IQ2000EMS Hemolisina termolábil (marcados especifico de Vph) H. directa termoestable; H. relacionada termoestable. 1 plásmido de virulencia (PCR, RTPCR, PockIt) Ribeiro, 2011 Lightner, 2013 AP1, AP2 2 plásmidos de virulencia Flegel y Fang, 2013 AP3 Gen que produce toxina Sirikharin et al., 2014 LAMP 1 plásmido de virulencia (AP2) Suebsing et al., 2013 Multilocus 7 genes de la especie (2 cromosomas) Gonzales-Escalona et al., 2008

45 ESTUDIOS EN DESARROLLO

46 Identificación Bacteriológica Ciclo 2014 Durante el ciclo 2014 se realizaron 202 análisis en fresco, bacteriológico, microbiológico y de PCR de granjas productoras de camarón del estado de Sonora con el apoyo de COSAES. Se realizaron 362 aislados bacteriológicos de agua, sedimento y camarón. En la mayoría de las granjas se encontraron signos clínicos anormales, se realizaron análisis bacteriológicos y PCR para obtener un mejor diagnostico.

47 En la gráfica se observa el porcentaje de las cepas según su tipo de muestra, se obtuvo mayor cantidad de asilados y de cepas positivas de hepatopáncreas.

48 Muestreos esteros sur de Sonora PROYECTO ITSON Objetivo: Monitorear los cuerpos de agua (esteros) del sur de Sonora mediante bacteriología de agua, sedimento y camarón silvestre para la determinación y confirmación de la presencia del agente causal de las mortalidades que se presentaron en Sonora en ciclo Se muestrearon 3 esteros del sur de Sonora: Atanasia, Melagos y El Riito. Tipo de muestras: Camarón silvestre, agua y sedimento. Tipos de análisis: Análisis en fresco, bacteriología, histopatología y Biología molecular.

49 Resultados de bacteriología en Esteros Localidad (JLSA) Agua Sedimento Estómago Hepatopáncreas Total de aislados Atanasia Mélagos Riito Total Identificación No. Cepas V. vulnificus 34 V. parahaemolyticus 31 Chromobacterium violaceum 6 V. damsela 5 Chromobacterium menigno 3 V. cholerae 2 Aeromona hydrophila 1 Ninguna cepa positiva para EMS/AHPND

50 Muestreo de sedimento en estanques Seguimiento a un estanque afectado por la mortalidad atípica del ciclo 2013 Muestreo de sedimento para análisis bacteriológico en diferentes partes de un estanque afectado por la mortalidad atípica. Objetivo: Determinar la presencia de la bacteria después de las actividades preoperativas en un estanque afectado y determinar si el agente es viable e infectivo.

51 Se muestrearon en distintos puntos del estanque y a diferente profundidad, las muestras se tomaron en bolsas estériles Whirl-pack para transportarlo al laboratorio inmediatamente. Puntos de muestreo: E-12 (Entrada 10 cm) M-3 (Salida 10 cm) M-1 (E-12 35cm) E-12 (Entrada 45 cm) M2 (E cm) E-12 (45 cm) E-12 (Dren salida)

52 Se realizaron análisis bacteriológicos para cada muestra de sedimento del estanque en Agar TCBS. Resultados (UFC/g): E-12 (Entrada 10 cm) 0 UFC/g M-3 (Salida 10 cm) M-1 (E-12 35cm) E-12 (Entrada 45 cm) M2 (E cm) E-12 (45 cm) E-12 (Dren salida) 0 UFC/g 0 UFC/g 0 UFC/g 0 UFC/g 1,300 UFC/g amarillas y 200 UFC/g verdes* 9,400 UFC/g amarillas y 5,800 verdes* *Colonias aisladas se analizaron por PCR con el Kit IQ2000 TM AHPND/EMS. Resultados: positiva E-12 dren de salida para EMS/AHPND

53 Muestreo de zooplancton Muestreo de copépodos para análisis bacteriológico en el cárcamo de bombeo de la Junta local Atanasia (Sonora). Objetivo 1: Determinar la presencia de agentes patógenos bacterianos y virales en copépodos mediante técnicas de microbiología y biología molecular para obtener el estatus sanitario. Objetivo 2: Obtener organismos silvestres (Copépodos) para monitorearlos en el laboratorio.

54 Desafíos con copépodos Se desafiaron los copépodos con una cepa de V. parahaemolyticus (EMS/AHPND) positiva por PCR (IQ2000 TM AHPND/EMS) provenientes de aislados de camarón del ciclo Se instalaron peceras con un volumen de 20 litros de agua marina filtrada y previamente clorada. La densidad fue de 1650 copépodos/litro. Inóculo fue de 1X10 6 UFC/ml. Resultados: positivos para EMS/AHPND.

55 Bioensayo desafío bacteriano (EMS/AHPND) Se realizó un bioensayo preliminar con los aislados positivos por PCR a EMS/AHPND, en la cual se desafiaron camarones con la metodología de Tran (2013) modificada en la cual el inóculo se aplicó directo a las peceras con camarón. Se realizaron muestras para análisis bacteriológico de hepatopáncreas y estómago. Se fijaron en solución Davidson órganos y camarón entero para histopatología. Se fijaron hepatopáncreas en OH al 96% para PCR.

56 Resultados: Cepa 1: 100% de mortalidad a las 24 horas. Análisis de PCR e Histopatológicos positivos a EMS/AHPND.

57 Recomendaciones Ante la situación mundial con AHPND se generan medidas de control. El EMS puede ser transmitido verticalmente (reproductorespostlarvas), en agua, canibalismo, aves y biopeliculas (GAA - Julio- Agosto, 2014). Los antibióticos pueden ser utilizados de manera responsable. SGIC, 2014

58 RECOMENDACIONES Bi-cultivo camarón con tilapia y biofloc: con la maduración microbiológica las bacterias benéficas compiten con las patógenas. Biofloc: floculos de bacterias, microalgas, protozoarios, materia orgánica (heces y alimento) y zooplancton. Equilibrio en la calidad del agua y producción de nutrientes (Hargreaves, 2013; Boonsirm, 2014).

59 Reproductores libres de patógenos (EMS/AHPND) Mejorar las practicas acuícolas Maternidades Infraestructura y Bioseguridad Aditivos en alimento PREVENSION Recomendaciones Obtener postlarva fuerte y saludable Balance del ambiente, alimentación, manejo en calidad de agua y fondos Organismos robustos y con talla mas grande Estanques con plástico, filtrados, redes, etc. Alimentos funcionales que protejan a los camarones GAA - Julio-Agosto, 2014

60 GRACIAS