El presente documento describe el proceso microbiológico de toma de muestras en el área de microbiología.

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1 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 1 DE 11 I. INTRODUCCION El laboratorio de microbiología es un lugar convenientemente habilitado donde se pueden manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser llevado a cabo con una buena técnica aséptica, y por tanto se requiere un ambiente limpio y ordenado. Cuando manejamos cualquier tipo de muestra debemos evitar que microorganismos ajenos a nuestros cultivos y del medio ambiente se introduzcan o que microorganismos nos contaminen a nosotros. Por ello trabajamos siempre en condiciones de esterilidad. En el laboratorio de microbiología encontraremos estas condiciones en campanas de seguridad biológica o bien en la proximidad de un mechero de alcohol o de gas. 1. OBJETIVO El presente documento describe el proceso microbiológico de toma de muestras en el área de microbiología. 2. CAMPO DE APLICACIÓN Este manual se aplica al proceso microbiológico de toma de muestra de todas las muestras referidas a la unidad de bacteriología. 3. REQUISITOS GENERALES 3.1 Materiales Recipientes de vidrio o plástico. Tubos de ensayo. Placas Petri de cristal o plástico. Instrumentos de muestreo, asas y agujas de siembra de platino, níquel/cromo o material de plástico desechable. Porta objetos. Cubre objetos. Gradillas. Bandeja de acero inoxidable (sol. hipoclorito de sodio al 10%) o plástica. Material de protección (guantes de látex, barbijo, gorro, guardapolvo, lentes protectores). Ropa de trabajo. 4. OPERACIONES PRELIMINARES a) Desinfectar el mesón de trabajo (sol de hipoclorito de sodio al 1%). b) Preparar el área de trabajo con el material necesario a utilizar: papel absorbente, gradilla con tubos de ensayo, portaobjetos y cajas petri con medios de cultivo. c) Realizar Inspección física de los medios de cultivo. d) Verificar estado de las muestras, identificación y numeración que corresponda con orden medica.

2 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 2 DE 11 e) Proceder de acuerdo a normas de bioseguridad. 5. MUESTRAS Se requiere muestras de: Secreción faríngea. Secreción vaginal. Secreción uretral. Secreción bronquial o expectoración. Secreción nasal. Broncoaspirados. Líquidos: LCR, Articular, etc. Lavados gástrico, bronquial. Secreciones de heridas. Orina. Heces. Sangre. Raspado de lesiones dérmicas. 6. PROCEDIMIENTO PARA REALIZAR TOMA DE MUESTRA PARA CULTIVOS 6.1. Hemocultivo Frasco de hemocultico. Jeringa de 5 ml. Alcohol yodado. Mechero de alcohol. a) Desinfecte el tapón de caucho del frasco de hemocultivos con alcohol yodado. b) Asépticamente desinfecte el sitio de la venopunción con alcohol yodado en círculos concéntricos hacia fuera del sitio elegido. Espere que el yodo seque y realice la punción sin palpar de nuevo. c) Tomar la muestra de sangre a razón de ml para niños y 5-10 ml para adultos por frasco (según instrucción del fabricante). El volumen de sangre a cultivar es el factor más importante en la recuperación del microorganismo. d) Si se pide Hemocultivo seriado generalmente son tres muestras y se debe tomar la muestra de sangre cada media hora, en pico febril o a sugerencia del médico.

3 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 3 DE 11 a) No tomar sangre del catéter, a menos que se esté realizando un estudio epidemiológico. b) La sangre obtenida en neonatología no debe ser menos a 0.2 ml Urocultivo a) Frascos estériles de orina. Generalmente las muestras son tomadas de media micción, por el paciente y se deben obtener tomando en cuenta lo siguiente: b) Orinas que estén retenidas en vejiga por lo menos 4 horas. c) De preferencia la primera orina de la mañana y lleguen al laboratorio en el lapso de media hora en lo posible. d) Se recomendara al paciente que la muestra debe ser tomada media micción. e) En recipientes de plástico estériles de boca ancha con tapa hermética o rosca. f) En cantidad aproximada de 40 a 60 cc. g) Identificada con nombre y apellido. a) La muestra de orina no deberá estar contaminada con heces fecales. b) No deberá haber sufrido derrames, que contaminen toda la superficie exterior y así también la muestra. c) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente en procedimiento Coprocultivo a) Frascos de plástico con tapa rosca. a) Generalmente las muestras son tomadas por el paciente y se deben obtener tomando en cuenta lo siguiente: b) La muestra se obtiene directamente de la deposición diarreica recientemente emitida. c) En recipientes de plástico de boca ancha con tapa hermética o rosca. d) En cantidad aproximada de 40 a 60 gr.

4 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 4 DE 11 e) Identificada con nombre y apellido y que lleguen al laboratorio en el lapso de media hora en lo posible. a) Para que el cultivo sea positivo se aconseja que la muestra sea diarreica, caso contrario no es probable el desarrollo de ningún patógeno intestinal. b) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente Catéteres intravenosos a) Frascos estériles. a) Generalmente las muestras son tomadas por el médico. b) Colocadas en recipientes estériles. c) Previamente identificadas antes de su transporte al laboratorio. a) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente Cultivo otico a) Frascos estériles. a) Generalmente las muestras son tomadas por el médico especialista por timpanocentesis, solo en caso de que la secreción sea visible tomara el personal de la unidad de bacteriología. b) Colocadas en recipientes estériles. c) Previamente identificadas antes de su transporte al laboratorio. a) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente. b) No refrigerar la muestra.

5 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 5 DE Cultivo ocular a) Hisopos estériles. a) La muestra debe ser tomada de cada ojo con diferentes hisopos previamente humedecidos con solución salina estéril, rotando el algodón por la superficie de la conjuntiva. Esto es independiente de que solo un ojo esté infectado, ya que la muestra del ojo sano puede servir de control de la flora normal del paciente, y compararlo con el reporte del ojo infectado Cultivo Nasal a) Hisopos estériles. a) La muestra obtenida por el médico especialista y enviada inmediatamente al laboratorio, en cantidad apropiada. b) La muestra puede ser tomada en el laboratorio con la ayuda de un hisopo estéril, de cada fosa nasal raspando las paredes Líquidos corporales: Liquido peritoneal, ascítico, bilis, sinovial, pericardico, pleural y torácico a) Frascos estériles. a) Generalmente las muestras son tomadas por el médico especialista. b) Colocadas en recipientes estériles y en cantidad apropiada (mínimo 2 ml). c) Previamente identificadas antes de su transporte al laboratorio. a) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente.

6 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 6 DE 11 b) Nunca envíe la muestra en hisopo, el mismo puede absorber toda la humedad y llagar seco Secreción de glándula de Bartholino, Secreción vaginal, secreción prostática, uretral, Secreción Meato urinaria Varones, Secreción Balano prepucial Varones a) Frascos con hisopos estériles. a) Todas las muestras deben ser tomadas por el médico especialista. b) Colocadas en recipientes estériles y en cantidad apropiada. c) Las muestras tomadas con hisopo deben llegar inmediatamente al laboratorio, para evitar que la misma se seque o este en cantidad insuficiente. d) Previamente identificadas antes de su transporte al laboratorio. e) Las secreciones: vaginal, uretral, meato urinario y balano prepucial pueden ser también tomadas en el área de Bacteriología por el personal de la misma y/o personal de turno con la ayuda de un hisopo estéril del conducto de salida de la uretra y de la vagina respectivamente. f) En el caso de la muestra balano prepucial también se puede tomar la muestra en el laboratorio con la ayuda de un hisopo estéril del pene, glande y prepucio. a) Para las muestras tomadas en el laboratorio se recomendara al paciente que la muestra debe ser tomada sin previo aseo y debe venir sin orinar, para evitar la contaminación en caso de que presente infección urinaria, en muestras de secreción vaginal según el caso se prefiere tomar la muestra con abstinencia sexual de 48 horas, debido a que el espermatozoide pierde la cola y en el examen directo puede ser confundido con una espora de hongo. b) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente Espermocultivo a) Frascos estériles de plástico con tapa rosca. a) Generalmente las muestras son tomadas por el paciente y se deben obtener tomando en cuenta lo siguiente: b) La muestra debe ser semen.

7 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 7 DE 11 c) De preferencia obtener al levantarse en la mañana. d) En frasco estéril de plástico con tapa rosca, evitando acercar alguna parte de la piel al mismo, debido a que se puede contaminar con flora normal. a) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente Cultivo de Secreción Faríngea a) Hisopos estériles. a) Generalmente las muestras son tomadas en el laboratorio con la ayuda de un hisopo estéril y un depresor lingual (baja lenguas) presione la lengua hacia abajo y tome la muestra de cada amígdala o del fondo de las mismas, chocando con la pared de la faringe y teniendo el cuidado de no tomar muestra de la lengua o la saliva, debido a que se contaminaría con flora normal. a) Se recomendara al paciente que venga sin aseo bucal y en ayunas, en la hora especificada para toma de muestras, debido a que se considera que se puede ver afectada la flora residente de la misma. b) En caso de haber desayunado o haberse aseado, se recomienda que haya transcurrido el lapso de media hora por lo menos para la toma de muestra. c) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente Cultivo de espectoración o esputo a) Frascos estériles de plástico con tapa rosca. a) El esputo podría no ser la muestra apropiada para determinar el agente etiológico de neumonía bacteriana. La sangre, el lavado bronquial o el aspirado transtraqueal son más seguros. b) Es recomendable que la muestra sea tomada en la mañana al levantarse. c) Haga que el paciente se enjuague la boca con agua antes de expectorar, para remover la flora superficial oral.

8 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 8 DE 11 d) Si el paciente tiene dentadura postiza, se la debe quitar. e) Instruya al paciente para que tosa con fuerza y profundo, tal que obtenga un esputo que provenga del tracto respiratorio inferior. Explíquele que es el esputo. f) Depositarlo directamente en un envase estéril. No colecte saliva ni fluido post-nasal. g) Para pacientes pediátricos que no pueden producir la muestra apropiada, un terapista respiratorio puede colectar la muestra por succión. h) Para el diagnóstico de la tuberculosis recolectar 3 muestras en días consecutivos y realizar baciloscopia seriada de esputo. a) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente, o si la muestra es solo saliva Aspirado traqueal o bronquial a) Frascos estériles de plástico con tapa rosca. a) Muestra obtenida por el médico y enviada inmediatamente al laboratorio en frasco estéril. b) El mayor problema con el lavado bronquial, es la inhibición de las bacterias por la solución anestésica. c) El cepillado bronquial solamente obtiene ml de muestra, por lo que la brocha debe ser rápidamente colocada en el líquido de transporte para evitar la desecación. d) La muestra colectada vía broncoscopio puede ser fácilmente contaminada con la flora oral. a) Se debe tomar en cuenta lo anteriormente mencionado para la lectura e interpretación de resultados Cultivo de Líquido Cefalorraquídeo a) Frascos estériles de plástico con tapa rosca. a) La muestra obtenida por el médico especialista y enviada inmediatamente al laboratorio, en cantidad apropiada.

9 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 9 DE 11 b) Nunca envíe la muestra en hisopo, el mismo puede absorber toda la humedad y llagar seco. c) Es una muestra muy difícil de tomar, pero es importante debido a que es un líquido estéril, por lo que nos da una información excelente en el caso de hallazgos positivos. Por ese motivo es imprescindible no infectar la muestra al tomarla, ya que puede dar lugar a un falso positivo. Por otro lado, las bacterias que producen meningitis son muy lábiles, por lo que es necesario un transporte rápido de la muestra o conservarla a 37ºC. a) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente Baciloscopia de esputo a) Frascos estériles de plástico con tapa rosca. a) Para que el paciente obtenga la muestra se aconseja que sea al levantarse en la mañana, sin aseo bucal, y que escupa la flema a un frasco limpio o estéril con tapa rosca, evitando que la muestra tomada esté acompañada de saliva o que sea flema de la nariz. b) Este procedimiento lo debe realizar de preferencia al aire libre y no en un lugar cerrado, para evitar que las gotitas de saliva con el bacilo de Koch queden suspendidas en el ambiente. a) No se procesaran muestras que sean salivales y no se encuentren con lo establecido anteriormente. b) No se debe realizar baciloscopias de líquidos o muestras extra pulmonares. (Reglamentación de la Red Nacional de Tuberculosis) Examen Micologico Directo a) Cajas petri vacias. b) Bisturí o lima. c) Cortaúñas. d) Cinta adhesiva transparente. e) Portaobjetos.

10 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 10 DE 11 Obtener las muestras de la siguiente manera: a) Escaras o piel desprendiendo: por raspado de la lesión en una caja Petri vacía y limpia. b) Despigmentación o enrojecimiento de la piel: pegando una cinta adhesiva transparente que permita la visualización y pegando a un porta objetos. c) Para micologico de uñas se utiliza el raspado de las mismas, que se obtiene también en caja Petri. Criterios de rechazo a) Cada paciente debe llevar para la toma de muestra su propio cortaúñas con lima para evitar así el contagio o contaminación. b) No se procesaran muestras si el paciente está con uso de pomadas o cremas Citología de moco nasal o búsqueda de eosinofilos en moco nasal. a) Portaobjetos. b) Hisopos estériles. a) Obtener las muestras directamente de las fosas nasales por raspado o cepillado de las mismas, realizado con hisopos estériles y de ambas fosas nasales. Extender sobre un portaobjetos. a) No se procesaran muestras que no se encuentren con lo establecido anteriormente 7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Vullo D.L., Wachsman M.B., Alché L.E. Microbiología en Práctica. Editorial Atlante S.R.L. Buenos Aires, Instituto Nacional de Laboratorios de Salud Inlasa, Manual Técnico: Laboratorio de Nivel I, La Paz Bolivia INSTITUTO NACIONAL DE LABORATORIOS EN SALUD, Manual para la Vigilancia de Laboratorio del Haemophilus influenzae y del Streptococcus pneumoniae, La Paz Bolivia, Pag. 15.

11 SERVICIO LABORATORIO (BACTERIOLOGIA) 11 DE INSTITUTO NACIONAL DE SALUD, Taller sobre la Identificación Bioquímica y Serológica de Haemophilus influenzae y Streptococcus pneumoniae: Manual de Streptococcus pneumoniae, Santa Fe de Bogotá Colombia, Págs. 11, 15, 16, 19, 25, 30, 33, 34, Trigoso Ch. y colaboradores, BACTERIOLOGIA BASICA, Edit. Huellas, 1ª Edición, La Paz Bolivia, Págs URMENETA B.A. et.al, Manual Práctico de Microbiología, Ed. Masson S.A, Barcelona España, 2005.