1. FINALIDAD DEL ENSAYO

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1 DiaSorin S.p.A. Via Crescentino snc Saluggia (VC) - Italy Modificaciones: in LIAISON Control ACTH (REF ) 2 Supresiones: 1. FINALIDAD DEL ENSAYO El ensayo LIAISON ACTH emplea la tecnología de la quimioluminiscencia (CLIA) en un ensayo inmunológico para la determinación cuantitativa in vitro de la hormona adrenocorticotrófica (ACTH) en muestras de plasma humano tratado con EDTA (conservadas congeladas). La determinación de la ACTH, junto con otros análisis de laboratorio y resultados clínicos, es útil en el estudio de las patologías suprarrenales en el hombre. El ensayo debe realizarse en la serie de instrumentos LIAISON Analyzer. 2. RESUMEN Y EXPLICACIÓN DEL ENSAYO La hormona adrenocorticotrófica o corticotropina (ACTH) es un polipéptido formado por 39 residuos de aminoácidos, secretado por la hipófisis anterior (1, 2). La ACTH estimula la secreción de las hormonas glucocorticoides, como el cortisol, en la corteza suprarrenal y ejerce un cierto control sobre la secreción de la aldosterona, otra importante hormona esteroidea secretada también por la corteza suprarrenal. El hipotálamo controla la síntesis de ACTH hipofisaria mediante la CRH (hormona liberadora de corticotropina), un péptido formado por 41 residuos de aminoácidos secretado en respuesta al dolor, la ansiedad y el estrés con la mediación de neurotransmisores. La secreción de la CRH es inhibida por los glucocorticoides mediante un mecanismo clásico de feedback negativo (retroacción) (2). Por otro lado, el cortisol ejerce un feedback negativo sobre la secreción de ACTH a nivel hipofisario e hipotalámico. La secreción de ACTH sigue un ritmo circadiano controlado por diversos factores, entre los que encontramos la luz. Se ha demostrado que determinadas condiciones, como el síndrome de Cushing, la secreción de ACTH ectópica, el estrés fisiológico y las intervenciones quirúrgicas (3, 4), alteran el ritmo circadiano normal. Las variaciones de la secreción que se verifican durante el día son bien conocidas: la frecuencia de los picos secretores de ACTH aumenta después de tres a cinco horas de sueño y alcanza su nivel máximo antes de despertar y una hora después de despertar. A causa del ritmo circadiano, las muestras de plasma para el ensayo de la ACTH normalmente se recogen entre las 8:00 y las 10:00 de la mañana. La discriminación de los pacientes afectados por el síndrome de Cushing de los sujetos normales es máxima en muestras recogidas por la noche (entre las 22:00 h y medianoche) debido a la ausencia de ritmo circadiano en las personas que presentan dicho síndrome. La ACTH es sintetizada por la hipófisis con una vía que produce otras hormonas. El precursor de la ACTH es una proteína grande denominada propiomelanocortina (POMC), que se sintetiza y luego hidroliza por vía proteolítica en fragmentos, que incluyen la lipotropina (precursor de la beta-endorfina y de la meta-encefalina) y la hormona melanocito-estimulante (MSH). La determinación de la ACTH en el plasma es útil para el diagnóstico de las patologías del eje hipotálamo-hipófisis-glándulas suprarrenales. Se observa un aumento de los niveles de ACTH en Enfermedad de Cushing hipofisaria (hipercortisolismo secundario) Síndrome de Addison (hipocortisolismo) Tumores autónomos que secretan ACTH (síndrome de la ACTH ectópica) Se observa una disminución de los niveles de ACTH en Adenoma suprarrenal (síndrome de Cushing primario) Insuficiencia suprarrenal secundaria El síndrome más importante que implica las hormonas glucocorticoides es el síndrome de Cushing secundario o hiperadrenocorticismo, en el que los niveles de ACTH aumentan. Las causas más comunes del síndrome de Cushing, una vez excluido el suministro de glucocorticoides por razones terapéuticas, son la hiperplasia suprarrenal bilateral (debida a la hipersecreción de ACTH hipofisaria, llamada enfermedad de Cushing), el adenoma hipofisario o la hiperplasia corticotrófica. El diagnóstico de laboratorio de la enfermedad de Cushing se realiza con pruebas de estimulación o supresión como suministro de dosis elevadas de dexametasona (que tiene como resultado la supresión de la secreción de ACTH y el cortisol), suministro de dosis bajas de dexametasona, aumento de la respuesta del cortisol a la metirapona y niveles de ACTH normales o elevados. Otro caso en que los niveles de ACTH aumentan es el síndrome de Nelson, una enfermedad más bien rara que se da en el 15-25% de los pacientes sometidos a la eliminación de las glándulas suprarrenales como consecuencia de la enfermedad de Cushing. Se caracteriza por secreción hormonal anormal, engrosamiento de la hipófisis y desarrollo de grandes adenomas invasivos. Además de la hipersecreción de la corteza suprarrenal, los niveles de ACTH se pueden ver influenciados por la insuficiencia suprarrenal (hipocortisolismo). En estos casos, la determinación del cortisol por sí solo no permite diferenciar las causas primarias de la insuficiencia suprarrenal (debida al síndrome de Addison) de las secundarias. La determinación de la ACTH es útil en estos casos para comprender mejor el tipo real de patología. Enfermedad Nivel de cortisol Nivel de ACTH Enfermedad de Cushing (tumor hipofisario que secreta ACTH) alto alto ACTH ectópica (ACTH secretada por un tumor extrahipofisario) alto alto Tumor suprarrenal alto bajo Síndrome de Addison (lesión en la glándula suprarrenal) bajo alto Hipopituitarismo bajo bajo 1 / 8 ES - I

2 3. PRINCIPIO DEL ENSAYO El método para la determinación cuantitativa de la ACTH es un ensayo inmunológico de tipo sándwich basado en el principio de la quimioluminiscencia. Un anticuerpo monoclonal de ratón específico (dirigido contra el fragmento N-terminal) recubre las partículas magnéticas (fase sólida) y otro anticuerpo monoclonal (dirigido contra el fragmento C-terminal de la ACTH) está enlazado a un derivado del isoluminol (conjugado anticuerpo-isoluminol). Durante la incubación, la ACTH presente en los calibradores, en las muestras o en los controles se une al anticuerpo monoclonal en fase sólida, y el anticuerpo conjugado reacciona en seguida con la ACTH ya unida a la fase sólida. Después de la incubación, se elimina el material no enlazado mediante un ciclo de lavado. A continuación, se añaden los reactivos starter que inducen una reacción de quimioluminiscencia. La señal luminosa, y por lo tanto la cantidad de conjugado anticuerpo-isoluminol, se mide con un fotomultiplicador en unidades relativas de luz (RLU, relative light units) e indica la concentración de ACTH presente en los calibradores, en las muestras o en los controles. 4. MATERIALES SUMINISTRADOS El orden de los reactivos refleja el orden con el que se han ensamblado los contenedores en el integral de reactivos. Integral de reactivos para 100 determinaciones 2,3 ml [SORB] Fase sólida: contiene partículas magnéticas recubiertas con anticuerpo monoclonal anti-acth (ratón), azida sódica al 0,09%. 23,0 ml [CONJ] Conjugado: contiene anticuerpo monoclonal anti-acth (ratón) marcado con isoluminol, azida sódica al 0,09%. El conjugado y las partículas magnéticas se suministran listos para su uso. En el integral se incluyen 3 x 1,5 ml [CAL 1] Calibrador 1, bajo: contiene ACTH humana en solución de albúmina sérica humana, azida sódica al 0,09%, para uso exclusivo en el LIAISON Analyzer. 3 x 1,5 ml [CAL 2] Calibrador 2, alto: contiene ACTH humana en solución de albúmina sérica humana, azida sódica al 0,09%, para uso exclusivo en el LIAISON Analyzer. 8 x blanca [CAL 1] Etiqueta con código de barras, pequeña Para etiquetar los tubos con alícuotas de calibrador, para su uso exclusivo en el LIAISON Analyzer. 8 x blanca [CAL 2] Etiqueta con código de barras, pequeña Para etiquetar los tubos con alícuotas de calibrador, para su uso exclusivo en el LIAISON Analyzer. 3 x amarilla [CAL 1] Etiqueta con código de barras, grande Para cubrir la etiqueta del vial [CAL 1], para su uso exclusivo en el LIAISON XL Analyzer. 3 x amarilla [CAL 2] Etiqueta con código de barras, grande Para cubrir la etiqueta del vial [CAL 2], para su uso exclusivo en el LIAISON XL Analyzer. 8 x amarilla [CAL 1] Etiqueta con código de barras, pequeña Para etiquetar los tubos con alícuotas de calibrador, para su uso exclusivo en el LIAISON XL Analyzer. 8 x amarilla [CAL 2] Etiqueta con código de barras, pequeña Para etiquetar los tubos con alícuotas de calibrador, para su uso exclusivo en el LIAISON XL Analyzer. Los calibradores se suministran liofilizados. Materiales requeridos, pero no suministrados (relacionados con el sistema) LIAISON XL Analyzer LIAISON Analyzer LIAISON Wash/System Liquid (REF ) LIAISON Wash/System Liquid (REF ) LIAISON XL Waste Bags (REF X0025) LIAISON Waste Bags (REF ) LIAISON XL Cuvettes (REF X0016) LIAISON Module (REF ) LIAISON XL Starter Kit (REF ) LIAISON Starter Kit (REF ) o LIAISON XL Starter Kit (REF ) LIAISON XL Disposable Tips (REF X0015) LIAISON Cleaning Kit (REF ) LIAISON Light Check (REF ) Otros materiales requeridos LIAISON Control ACTH (REF ) LIAISON Endocrinology Diluent (REF ) 5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES Para uso diagnóstico in vitro. Todos los materiales de origen humano utilizados en la fabricación de los componentes de este kit se han analizado y se han encontrado no reactivos para la presencia de HBsAg, anti-vhc, anti-vih-1 y anti-vih-2. Sin embargo, puesto que ningún método de análisis puede asegurar la ausencia de agentes patógenos, todo el material de origen humano deberá considerarse potencialmente infeccioso y manipularse como tal. 2 / 8 ES - I

3 6. NORMAS DE SEGURIDAD No coma, beba, fume ni se maquille en el laboratorio donde se realiza el ensayo. No pipetee las soluciones con la boca. Evite el contacto directo con el material potencialmente infeccioso usando batas de laboratorio, gafas de protección y guantes desechables. Lávese cuidadosamente las manos al terminar el ensayo. Evite las salpicaduras o la formación de aerosoles. El reactivo vertido debe limpiarse con una solución de hipoclorito sódico al 5%, y eliminarse como si se tratase de material potencialmente infeccioso. Todas las muestras, los reactivos biológicos y los materiales usados en el ensayo deben considerarse posibles transmisores de agentes infecciosos. Por consiguiente, deben eliminarse de conformidad con las disposiciones y normas generales establecidas por las autoridades con jurisdicción sobre el laboratorio y con las leyes vigentes en cada país. 7. PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS 7.1. Integral de reactivos Para manipular los reactivos es preciso adoptar una serie de precauciones importantes: Resuspensión de las partículas magnéticas Las partículas magnéticas deben estar completamente resuspendidas antes de colocar el integral en el instrumento. Realice los pasos indicados a continuación para garantizar la suspensión completa de las partículas: Antes de quitar el precinto, gire la rueda pequeña del compartimento de partículas magnéticas hasta que la suspensión adopte un color marrón. Agite horizontalmente el integral de reactivos con delicadeza y sumo cuidado para favorecer la suspensión de las partículas magnéticas (evite la formación de espuma). Controle visualmente el fondo del vial de partículas magnéticas para cerciorarse de que no hayan quedado partículas magnéticas sedimentadas. Si es necesario, repita el procedimiento hasta la resuspensión completa de las partículas magnéticas. Después de quitar el precinto, seque con sumo cuidado la superficie de cada pared para eliminar el líquido residual si fuera necesario. Formación de espuma en los reactivos Para garantizar las mejores prestaciones del integral, se recomienda evitar la formación de espuma en los reactivos. Respete las recomendaciones siguientes: Antes de usar el integral, controle visualmente los reactivos, especialmente los calibradores, para descartar la presencia de espuma. Si se observa la presencia de espuma después de la resuspensión de las partículas magnéticas, coloque el integral en el instrumento y deje que se disuelva la espuma. El integral está listo para el uso una vez que se agita en el instrumento y que se disuelve la espuma. Instalación del integral en el área de reactivos LIAISON Analyzer Coloque el integral de reactivos en el área de reactivos del analizador con la etiqueta de los códigos de barras orientada a la izquierda y espere 30 minutos antes de usarlo. Las partículas magnéticas se agitan automáticamente y se resuspenden por completo en el analizador. Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo. LIAISON XL Analyzer El LIAISON XL Analyzer incorpora un dispositivo magnético de estado sólido que favorece la dispersión de las micropartículas antes de colocar un integral de reactivos en el área de reactivos del analizador. Consulte los detalles en el manual del usuario del analizador. Coloque el integral de reactivos en la ranura específica. Deje el integral de reactivos en el dispositivo magnético de estado sólido durante al menos 30 segundos (varios minutos como máximo). Si es necesario, repita la operación. Coloque el integral en el área de reactivos del analizador con la etiqueta orientada a la izquierda y espere 15 minutos antes de utilizarlo. Las partículas magnéticas se agitan automáticamente y se resuspenden por completo en el analizador. Consulte el manual del usuario del analizador para introducir las muestras y comenzar el ensayo Calibradores Los calibradores del kit LIAISON ACTH se suministran liofilizados. Reconstituya con 1,5 ml de agua desionizada o destilada. Deje los viales durante 15 minutos a aproximadamente C. Agite delicadamente los viales por inversión. Evite la formación de espuma. Los valores de calibrador asignados pueden variar según los diferentes instrumentos LIAISON Analyzer. Uso del LIAISON Analyzer: el calibrador reconstituido está listo para usar (con la etiqueta blanca original). Uso del LIAISON XL Analyzer: en el calibrador reconstituido se debe colocar la etiqueta amarilla incluida en el kit. Sitúe el código de barras de la etiqueta amarilla exactamente encima del código de barras de la etiqueta blanca. En la etiqueta amarilla figura la concentración de calibrador correcta para el uso en el LIAISON XL. En caso necesario, prepare las alícuotas de calibrador según lo indicado en el apartado 8 y etiquete los tubos del modo siguiente: LIAISON Analyzer: coloque la etiqueta blanca que se suministra. LIAISON XL Analyzer: coloque la etiqueta amarilla que se suministra. Consulte el manual de usuario del analizador para obtener detalles sobre el empleo de los calibradores. Consulte el apartado 8 para conservar los calibradores después de la reconstitución Controles Para preparar y manipular los controles correctamente, consulte las instrucciones incluidas con el juego de controles LIAISON ACTH. 3 / 8 ES - I

4 8. CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS 8.1. Integral de reactivos Sellado: estable a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. Abierto en el instrumento o a 2-8 C: estable durante 2 semanas (consulte 12). Después de este intervalo de tiempo, se puede seguir usando el integral de reactivos siempre que los controles permanezcan dentro de los rangos esperados. Use siempre el mismo LIAISON Analyzer con el integral de reactivos ya abierto. No lo congele. Mantenga el integral de reactivos en posición vertical mientras esté guardado para garantizar una adecuada resuspensión de las partículas magnéticas. Use las gradillas suministradas con la serie de instrumentos LIAISON Analyzer para guardar el integral de reactivos en posición vertical. Evite su exposición a luz directa Calibradores Liofilizados: estables a 2-8 C hasta la fecha de caducidad. Reconstituidos: estables durante 3 días si se conservan correctamente a 2-8 C. Congelados: las alícuotas se pueden conservar a -20 C durante 1 mes como máximo. La molécula de ACTH en solución líquida tiene estabilidad limitada al calor. No deje los calibradores reconstituidos a temperatura ambiente durante más tiempo del necesario para procesarlos en la serie de instrumentos LIAISON Analyzer. Inmediatamente después de completar la reconstitución, los calibradores se pueden conservar en alícuotas congeladas en tubos de ensayo de plástico o de vidrio con silicona. Los calibradores se deben usar completamente el mismo día de la descongelación. El volumen mínimo de una alícuota es 600 µl (450 µl de calibrador µl de volumen muerto). Cada alícuota solamente se puede congelar y descongelar 1 vez. Durante la manipulación de los calibradores, adopte las precauciones necesarias para evitar la contaminación bacteriana. 9. RECOGIDA Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS La molécula de ACTH se degrada rápidamente en la muestra. Siga escrupulosamente las siguientes recomendaciones para manipular las muestras. El único tipo de muestra que se puede usar es plasma humano tratado con EDTA y conservado congelado. Recoja la sangre extraída mediante punción venosa en un tubo de ensayo de vidrio con silicona, un tubo vacutainer (con tapón de color violeta) u otro tubo equivalente que contenga EDTA como anticoagulante. Evite la hemólisis. Ponga inmediatamente los tubos de ensayo en un baño de hielo y manténgalos en frío. Centrifugue en los 120 minutos posteriores a la extracción usando una centrífuga refrigerada y, a continuación, divida inmediatamente el sobrenadante en partes alícuotas y congélelo (a -20 C o menos) en tubos de plástico o de vidrio con silicona. El volumen mínimo de alícuota es de 300 µl. Antes de realizar el ensayo, descongele las muestras con cuidado, agite las muestras descongeladas y elimine las burbujas de aire que pudiera haber. Las muestras descongeladas deben mantenerse a una temperatura de entre 2-8 C y utilizarse en 6 horas. No use muestras fuertemente hemolizadas o lipémicas, ni muestras que contengan partículas o presenten evidente contaminación microbiana. No use muestras coaguladas. Evite los ciclos repetidos de congelación y descongelación. Elimine el volumen de alícuota sobrante. El volumen mínimo de muestra necesario para una determinación es 300 µl (150 µl de muestra µl de volumen muerto). 10. CALIBRACIÓN El análisis de los calibradores específicos del ensayo permite ajustar los valores RLU detectados a la curva maestra asignada. Es posible realizar un máximo de 6 calibraciones (en total). La recalibración por triplicado es obligatoria siempre que se dé al menos una de las siguientes situaciones: - Se usa un nuevo lote de integral de reactivos o de reactivos starter. - La calibración anterior se realizó hace más de 7 días. - El analizador se ha sometido a una intervención de asistencia técnica. - Los valores de los controles están fuera de los rangos esperados. Serie de instrumentos LIAISON Analyzer: los valores del calibrador se almacenan en los códigos de barras de las etiquetas externas del calibrador. 11. PROCEDIMIENTO OPERATIVO Para obtener unos resultados analíticos correctos hay que respetar estrictamente las instrucciones del manual del usuario del analizador. LIAISON Analyzer: cada parámetro del ensayo se identifica mediante el código de barras de la etiqueta del integral de reactivos. Si la etiqueta del código de barras no se puede leer, el cartucho no se debe utilizar y se tiene que tirar. Consulte el manual del usuario del analizador para obtener información detallada. LIAISON XL Analyzer: cada parámetro del ensayo se identifica mediante la información codificada en la etiqueta de identificación por radiofrecuencia (RFID) del integral de reactivos. Si la etiqueta RFID no se puede leer, el cartucho no se debe utilizar y se tiene que tirar. Consulte el manual del usuario del analizador para obtener información detallada. Si no es posible leer los códigos de barras externos del calibrador, los datos que figuran en las etiquetas externas del calibrador (debajo del código de barras) se pueden introducir manualmente en la serie de instrumentos LIAISON Analyzer. Consulte el manual del usuario del analizador para obtener información detallada. 4 / 8 ES - I

5 El LIAISON Analyzer realiza las operaciones siguientes: 1. Dispensa la muestra, el calibrador o los controles en el módulo de reacción. 2. Dispensa las partículas magnéticas revestidas (fase sólida) y el conjugado. 3. Incuba. 4. Lava con líquido de lavado/líquido del sistema. 5. Añade el reactivo starter y mide la luz emitida. El LIAISON XL Analyzer realiza las operaciones siguientes: 1. Dispensa las partículas magnéticas revestidas (fase sólida) y el conjugado en la cubeta de reacción. 2. Dispensa la muestra, el calibrador o los controles. 3. Incuba. 4. Lava con líquido de lavado/líquido del sistema. 5. Añade el reactivo starter y mide la luz emitida. 12. CONTROL DE CALIDAD Los controles LIAISON deben analizarse individualmente para determinar la eficacia del ensayo. El control de calidad puede efectuarse analizando los sueros de control LIAISON o controles comerciales específicos: - por lo menos una vez por cada día de trabajo, - cuando se usa un nuevo integral de reactivos, - cuando se calibra el kit, - cuando se usa un nuevo lote de reactivos starter, - cuando se determina la adecuación de las prestaciones del integral de reactivos abierto con más de 2 semanas de anterioridad, - o según las normas o los requisitos establecidos en los reglamentos locales o por entidades autorizadas. Los valores de los controles deben permanecer dentro de los rangos previstos. Cada vez que el valor de uno de los controles no coincida con el rango esperado, habrá que repetir la calibración y analizar de nuevo los controles. Si los valores de los controles siguen estando fuera de rango tras una calibración satisfactoria, será preciso repetir el ensayo usando un vial de control sin abrir. Los resultados de los pacientes no deben notificarse si los valores de control están fuera del rango previsto. Las prestaciones de otros controles se deben evaluar para asegurar su compatibilidad con este ensayo antes del uso. Es indispensable establecer rangos de valores adecuados para los materiales empleados en el control de calidad. 13. INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS El analizador calcula automáticamente las concentraciones de ACTH de las muestras y expresa el resultado en. Consulte el manual del usuario del analizador para obtener información detallada. Aunque los calibradores y los controles pueden generar resultados de RLU o dosis distintos en LIAISON y LIAISON XL, los resultados de los pacientes son equivalentes Intervalo de ensayo: El analizador calcula automáticamente las concentraciones de ACTH de hasta 1500 Factor de conversión: 1 x 0,2202 = 0,2202 pmol/l 1 pmol/l x 4,5413 = 4, Intervalo basal de referencia: Para determinar el intervalo de referencia de LIAISON ACTH, se realizó un estudio clínico en 589 muestras prospectivas de sujetos europeos que se enviaron al laboratorio para llevar a cabo el ensayo de la ACTH. Los sujetos (hombres = 270, mujeres = 313, desconocidos = 6) se catalogaron como normales en el ensayo realizado con un método de referencia. Los resultados del estudio arrojaron un valor promedio de 16,3 y valores basales de ACTH comprendidos entre 4,7 y 48,8 (percentil 5 y 95, respectivamente). Cada laboratorio deberá establecer su propio intervalo basal de referencia. Muestras clínicas: también se realizó un estudio clínico en 51 muestras patológicas. El análisis estadístico de las muestras normales y patológicas aparece ilustrado en la tabla siguiente. En el gráfico siguiente se muestra la correlación de los niveles clínicos obtenidos en un número total de 640 muestras procedentes de sujetos normales y de pacientes con enfermedades hipofisarias y suprarrenales. Condición clínica n* Media D.E.** Percentil 2,5 º Mediana percentil 50 º Percentil 97,5 º Valor mínimo Valor máximo Prueba de supresión con dexametasona (ST) 15 10,3 15,0 2,5 6,7 46,6 2,4 63,0 Síndrome de Addison (AD) 9 219,1 157,3 62,8 134,3 437,0 59,4 450,0 Síndrome de la ACTH ectópica (ES) 8 424,6 489,9 143,7 187,7 1381,0 139,0 1500,0 Síndrome de Cushing (CS) ,8 64,7 52,0 103,1 236,1 50,0 240,0 Síndrome de Nelson (NS) 4 729,8 625,9 165,2 632,1 1460,0 155,0 1500,0 Cateterismo del seno petroso (SPC) 3 298,1 67,7 225,9 337,1 337,3 220,0 337,0 Sujetos normales (N) ,3 14,6 3,6 16,3 60,5 1,4 106,1 * número de determinaciones ** D.E. desviación estándar 5 / 8 ES - I

6 Consulte las siglas (ST, AD, ES, CS, NS, SPC y N) en la tabla anterior. 14. LIMITACIONES DEL ENSAYO Los reactivos deben usarse solamente en la serie de instrumentos LIAISON Analyzer. Los componentes individuales del integral de reactivos no deben ser separados del integral. El kit no debe usarse después de la fecha de caducidad que figura en la etiqueta externa. Para obtener resultados fiables es necesario atenerse estrictamente a las instrucciones y poseer una adecuada técnica manual. La contaminación bacteriana de las muestras o la inactivación mediante calentamiento pueden modificar los resultados del análisis. Un resultado no patológico no siempre descarta la posibilidad de que exista una patología suprarrenal y se debe evaluar junto con otros procedimientos diagnósticos. Los resultados del ensayo se muestran de manera cuantitativa. Sin embargo, el diagnóstico de una patología suprarrenal no se debe basar en el resultado de un solo ensayo, sino que debe estar respaldado por otras pruebas clínicas y la opinión del médico. Cada decisión terapéutica debe ser tomada caso por caso. El LIAISON ACTH es un ensayo creado para la determinación del analito intacto en estado normal. La degradación de la molécula en fragmentos puede alterar las características de unión del anticuerpo e influir en los resultados finales. Estas muestras pueden proporcionar resultados contradictorios en distintos ensayos, porque los efectos de las alteraciones son exclusivos de cada reactivo de anticuerpos usado. Aunque se añadan agentes capaces de neutralizar los anticuerpos humanos anti-ratón (HAMA), las concentraciones de HAMA extremadamente elevadas podrían influir esporádicamente en los resultados del ensayo. Las muestras que contienen niveles de ACTH superiores al intervalo del ensayo se pueden diluir con el diluyente LIAISON Endocrinology Diluent (REF ). Los integrales no se deben intercambiar entre diferentes tipos de analizadores (LIAISON y LIAISON XL). Después de introducir un integral en un tipo de analizador determinado, deberá usarse siempre en él hasta que se haya acabado. Por motivos de trazabilidad relacionados con lo antes expuesto, es necesario terminar el seguimiento de los pacientes con el mismo tipo de analizador. En los seguimientos debe utilizarse un único tipo de analizador (LIAISON o LIAISON XL). Atención: el ensayo se ha creado para analizar muestras congeladas de plasma tratado con EDTA. El intervalo basal de referencia y todos los datos de rendimiento proporcionados se han obtenido usando muestras congeladas de plasma tratado con EDTA. En el caso de que se usen muestras frescas, cada laboratorio debe establecer su propio intervalo de los valores esperados. Como ejemplo, presentamos la correlación observada entre las muestras frescas y congeladas analizadas con el método LIAISON ACTH en el estudio en el que se han establecido los intervalos basales de referencia (consulte Interpretación de los resultados). Muestras frescas, Las muestras de sangre se han mantenido en frío durante 15 minutos. No se han analizado muestras clínicas con niveles muy elevados de ACTH, superiores a En la documentación (1) se recogen casos de síndrome de Nelson con concentraciones muy elevadas de ACTH, superiores a Si se sospecha la existencia de esta patología, habrá que evaluar con atención los valores hallados que coincidan con el intervalo del ensayo para excluir un efecto gancho (consulte 15.4). Se aconseja repetir el ensayo después de diluir la muestra. 6 / 8 ES - I

7 15. PRESTACIONES METODOLÓGICAS DEL KIT Especificidad analítica La especificidad analítica se define como la capacidad del ensayo para detectar analitos específicos en presencia de factores potencialmente interferentes en la matriz de la muestra (por ejemplo, hemólisis, lipemia, bilirrubinemia) Interferencia Estudios controlados de factores potencialmente interferentes han demostrado que la eficacia del ensayo no depende de las concentraciones de bilirrubina < 0,1 mg/ml, de hemoglobina < 500 mg/dl o de triglicéridos < 30 mg/ml Reacciones cruzadas La presencia de las siguientes moléculas que pueden ocasionar reacciones cruzadas no ha mostrado interferencias en el ensayo. Molécula Cantidad añadida a la muestra, % reactividad cruzada ACTH (1-10) no detectable ACTH (1-24) ,034 ACTH (18-39) ,2 ACTH (11-24) ,03 Alfa-MSH ,04 Beta-MSH ,06 Beta-Endorfina ,01 Somatostatina ,09 Neurotensina < 0,01 Encefalina < 0, Precisión con LIAISON Analyzer Para determinar la repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo (es decir, las variaciones intra-ensayo e inter-ensayo) se utilizaron muestras diferentes con distintas concentraciones de ACTH. Repetibilidad (Variación intra-ensayo). Para evaluar la repetibilidad se analizaron cuarenta réplicas en la misma sesión analítica. Reproducibilidad (Variación inter-ensayo). Para evaluar la reproducibilidad se analizaron veinte réplicas en días diferentes con dos lotes distintos de integrales. Variación intra-ensayo Variación inter-ensayo Valor medio CV (%) n* Valor medio CV (%) n* 20,4 4, ,3 8, ,2 2, ,8 5, ,7 2, ,1 7,9 20 * número de determinaciones Precisión con LIAISON XL Analyzer Para determinar la repetibilidad y la reproducibilidad del ensayo (es decir, las variaciones intra-ensayo e inter-ensayo) se utilizaron muestras diferentes con distintas concentraciones de ACTH. Repetibilidad (Variación intra-ensayo). Para evaluar la repetibilidad se analizaron veinte réplicas en la misma sesión analítica. Reproducibilidad (Variación inter-ensayo). Para evaluar la repetibilidad se analizaron veinte réplicas en 10 días diferentes. Valor medio Variación intra-ensayo CV (%) n* Valor medio Variación inter-ensayo CV (%) n* 33,7 4, ,6 5, ,8 2, ,2 2, ,2 2, ,2 3,2 20 * número de determinaciones Veracidad La veracidad del ensayo se ha comprobado mediante las pruebas de dilución y recuperación Prueba de dilución Se analizaron muestras de plasma con alta concentración de ACTH sin diluir y diluidas en serie con diluyente de muestras. Las concentraciones medidas de ACTH frente a las concentraciones esperadas se analizaron mediante regresión lineal. Los coeficientes de correlación (r) estuvieron comprendidos entre 0,993 y 1,000. Dilución Valor medido Valor esperado Recuperación (%) 1 : 2 180,0 168, : 4 87,2 84, : 8 46,3 42, : 16 23,9 21, / 8 ES - I

8 15.8. Prueba de recuperación Para determinar la recuperación del ensayo LIAISON ACTH, se analizaron muestras de plasma después de haberles añadido ACTH. Concentración original de la muestra 1: 6,76 y de la muestra 2: 60,73. Valor medido Muestra 1 Muestra 2 Valor esperado Recuperación (%) Valor medido Valor esperado Recuperación (%) 123,60 119, ,9 318, ,86 96, ,7 267, ,68 74, ,0 215, ,48 51, ,7 164, ,07 29, ,8 112, Efecto gancho El efecto gancho a dosis altas (High-dose hook, HDH) se determinó añadiendo ACTH a pools de plasma humano hasta obtener una concentración máxima de Cuando se analizan muestras que contienen concentraciones de analito sumamente elevadas, se pueden obtener concentraciones inferiores a las reales por el efecto gancho. La presencia de efecto gancho se determinó analizando 5 muestras a las que se habían añadido altas concentraciones de ACTH. Todas las muestras presentaron valores de concentración por encima del intervalo de medición, lo que indica que la clasificación de las muestras es correcta Sensibilidad analítica y funcional Sensibilidad analítica: La sensibilidad analítica se define como la dosis mínima detectable que puede distinguirse de cero con 2 desviaciones estándar. Sensibilidad funcional: La sensibilidad funcional (definida como la menor concentración de analito que puede determinarse con un CV inter-ensayo < 20%): Sensibilidad analítica Sensibilidad funcional Serie de instrumentos LIAISON Analyzer 1,6 3, Exactitud La exactitud del ensayo LIAISON ACTH se evaluó en 118 muestras con un método no isotópico elegido como referencia. La correlación obtenida fue la siguiente: LIAISON ACTH = 0,894 x método ACTH no isotópico 1,32 con coeficiente de correlación r = 0,935. Para reflejar los datos de exactitud, se asignaron los valores nominales de los calibradores LIAISON ACTH. Para convertir los valores de los calibradores en valores compatibles con el estándar Internacional de la OMS 74/555, se debe usar un factor de multiplicación de 1,85. 8 / 8 ES - I