Instituto de Salud Carlos III, laboratorio de Patógenos Especiales. Asociaciones ganaderas (LORRA, ELE, SERGAL)

Transcripción

1 Informe final de proyecto Estudio del ciclo domestico y silvestre de Coxiella burnetii en la CAPV. Plan piloto de control de la Fiebre Q Centro: NEIKER Participantes: Ana L. García-Pérez (agarcia@neiker.net) Ana Hurtado, Inés Povedano, Gloria Rubio, Gorka Aduriz, Raquel Atxaerandio, Marta Barral, Ramón Juste. Entidades participantes: Instituto de Salud Carlos III, laboratorio de Patógenos Especiales. Asociaciones ganaderas (LORRA, ELE, SERGAL) Año

2 Estudio del ciclo domestico y silvestre de Coxiella burnetii en la CAPV. Plan piloto de control de la Fiebre Q 1.- Introducción El objetivo principal del proyecto era actualizar la información sobre la prevalencia de la Fiebre Q en el ganado ovino de la CAPV, mediante un estudio amplio con técnicas más sensibles que las actualmente disponibles así como la puesta en marcha de un plan de control. Para ello, se plantearon dos objetivos más específicos: 1 - Actualizar la información sobre la difusión de la fiebre Q en el ganado ovino de la CAPV, mediante un estudio con técnicas más sensibles (ELISA y PCR). 2 - Poner en marcha un plan de control en 5 de los rebaños ovinos en los que se demuestre una infección reciente por FQ. 2.- Actualización de la prevalencia de la Fiebre Q en el ganado ovino Seroprevalencia individual Se han analizado un total de 1011 sueros pertenecientes a 34 explotaciones ovinas de raza Latxa, y distribuidos en los 3 territorios de la siguiente forma: 16 rebaños en Gipuzkoa, 5 en Alava y 13 rebaños en Bizkaia. En cada rebaño se tomaron 30 muestras de sueros a 10 corderas, 10 primalas y 10 ovejas mayores de 2 años. En el momento de la toma de muestras de suero se preguntaba al ganadero si había problemas de abortos en su explotación. Las muestras se analizaron mediante la técnica de ELISA (LSI, Francia) utilizando un antígeno de procedencia ovina. Antes de comenzar el procesado de muestras los resultados del ELISA se validaron con una serie de sueros positivos y negativos a Fiebre Q mediante la técnica de Fijación de complemento (técnica de referencia, OIE), procedentes del Servicio de Diagnostico de NEIKER. La mayor seroprevalencia se observó en Alava (16.6%), en contraposición a lo observado en Bizkaia, que presentó la seroprevalencia más baja (5.5%). Por grupos de edad se observaron diferencias significativas (P=0.0034), siendo las ovejas >2 años las que presentaron una seroprevalencia más alta (17.5%) respecto a las primalas (7.5%) y corderas (1.5%). La seroprevalencia media para el conjunto de la población estudiada fue del 8.9%. Seroprevalencia por rebaños El 67% de los rebaños (23) tuvo al menos un animal positivo a la presencia de anticuerpos, si bien seroprevalencias moderadas-altas, superiores o iguales al 25%, se hallaron en un 15% de los rebaños estudiados (5). Los rebaños que habían denunciado problemas de abortos mostraron una seroprevalencia media más alta (14.2%) que los que no padecían problemas (6%). Al realizar un análisis de regresión logística para relacionar el grado de seroprevalencia con el historial de abortos del rebaño, y realizando una distribución de los rebaños en 3 2

3 terciles en función de la seroprevalencia (baja, media y alta), se comprobó que el grupo de seropositividad alta tendría 10 veces más riesgo de tener problemas de abortos que los grupos de seropositividad baja. No se observó ningún tipo de correlación entre el tamaño del rebaño y el nivel de seroprevalencia en el mismo. Comparación con estudios previos realizados en la CAPV Los datos de prevalencia en sueros ovinos, nos han permitido actualizar la situación actual de la distribución de C. burnetii en los rebaños ovinos latxos. La última encuesta serológica realizada en la CAPV data de 1987 (Saez de Okariz et al., 1987), en que se analizó un total de 1500 sueros procedentes de 50 rebaños ovinos. La técnica utilizada en aquel momento fue la Fijación de Complemento. La técnica utilizada en 2006 ha sido la técnica de ELISA y los resultados de seroprevalencia tanto a nivel individual como a nivel de rebaño son ligeramente más altos en la actualidad, si bien en Alava el número de rebaños estudiados ha sido limitado y podrían no ser representativos de la situación actual. En Gipuzkoa se observa un incremento especialmente importante en el número de rebaños positivos, ya que se pasa de un 13.3% en 1987 a un 62.5% de rebaños positivos en Respecto a Bizkaia, es la provincia con un mayor porcentaje de rebaños positivos en ambos estudios. La amplia distribución observada en Bizkaia coincide con lo observado en los diagnósticos hospitalarios, ya que según datos facilitados por el Servicio de Epidemiología del Gobierno Vasco, en 2005 se han diagnosticado 4,2 casos de Fiebre Q en humana en Bizkaia, 2.7 en Alava y 1.8 en Gipuzkoa (datos por habitantes). En las pruebas de validación que se realizaron antes de iniciar el procesado de los 1011 sueros, se compararon ambas técnicas con un lote de sueros negativos bovinos (96) y positivos ovinos y bovinos (81) con la técnica de FC y procedentes del Servicio de Diagnóstico de NEIKER. La especificidad del ELISA respecto a la FC fue del 97.9, por lo que se consideró que ambas técnicas eran equivalentes. Sin embargo, al analizar la concordancia, se observó que el índice kappa era de solo ( ), esto es, que la concordancia entre las dos técnicas era moderada-baja. Al comparar la sensibilidad de ambas técnicas, resulto que el ELISA utilizado arrojaba una sensibilidad complementaria del 18%, mientras que la FC daba un valor del 23%. Esta falta de concordancia con una sensibilidad relativa superior de la FC fue algo inesperado ya que el fabricante del ELISA aseguraba que este método es más sensible que la FC. En consecuencia, se realizó una segunda validación con los sueros de la propia encuesta que cambió radicalmente las estimaciones de sensibilidad relativa, poniendo de manifiesto una muchísimo mayor sensibilidad del ELISA (Sensibilidad Complementaria: 355%). Este cambio de sensibilidad en la técnica de diagnóstico implica que la mayor prevalencia en la actual encuesta se deba en gran parte a la mejora de la técnica de detección. Por lo tanto, con la reserva mencionada, se puede concluir que entre la encuesta de 1986 (6.4%) y la actual (8.9%), se ha producido un incremento de un 50% en la detección animales altamente significativo (p=0.0087). Igualmente, la proporción de rebaños con al menos un reaccionante positivo habría aumentado gracias al ELISA desde un 36% a un 68% (p=0.0044). Por provincias, Alava habría aumentado de forma significativa la proporción de ovejas positivas desde un 9.3% a un 16.6% (p=0.0135), Bizkaia habría disminuido de un 5.9% a un 5.5% sin que esto represente un cambio estadísticamente significativo y Gipuzkoa habría triplicado su prevalencia desde 3

4 un 3.3% a un 9.2% (p=0.0002). En términos de rebaños, se reproducen las diferencias en el mismo sentido con un incremento en el numero de rebaños positivos desde un 40% a un 60% en Alava (N.S.), de un 50% a un 77% en Bizkaia (N.S.) y de un 13% a un 63% en Gipuzkoa (p=0.0050). Si, con el fin de estimar la evolución de la prevalencia se revisasen los datos de la encuesta de 1986 mediante el cálculo de los positivos adicionales que se hubiesen detectado si se hubiese aplicado la técnica ELISA en lugar de la de FC, la prevalencia individual corregida para 1986 sería de un 29%. Esto quiere decir que, haciendo abstracción de factores no controlados en ambos estudios, como p.e., variaciones estacionales o sesgos en la muestra investigada, la seroprevalencia habría disminuido en los 20 años transcurridos entre ambas encuestas. En definitiva, se puede concluir que la Fiebre Q en la cabaña ovina de la CAPV no se encuentra con unas condiciones favorables para su extensión y que las cifras de animales infectados se encuentran dentro de límites numéricamente abordables desde una perspectiva de saneamiento. Prevalencia de Coxiella burnetii en leche de tanque Se han aprovechado las muestras recogidas por las Asociaciones ganaderas para el proyecto SEC (BORDER) tomadas en 154 explotaciones latxas entre los meses de marzo y abril de Se han analizado por PCR las células somáticas, y los resultados indican que en el 22% de los rebaños se detecta la presencia de DNA de C. burnetii. Gipuzkoa y Alava mostraron unos resultados similares, con prevalencias en torno al 25%, mientras que en Bizkaia se observó una prevalencia más baja, del 14%. La interpretación de estos resultados debería tomarse con cautela, ya que la detección de DNA no implica necesariamente que exista una infección activa en el rebaño y que sean bacterias viables. Por otro lado, debido a la metodología utilizada para la extracción de DNA y al efecto de dilución de la leche de tanque, no puede descartarse que se hayan producido algunos resultados falsamente negativos. Se observó una correlación significativa entre el tamaño del rebaño y la positividad de la PCR. El análisis de la relación entre seroprevalencia y detección de C. burnetti en leche de tanque puso de manifiesto una polarización difícil de explicar ya que, en la muestra de 34 rebaños en los que se realizaron ambas técnicas, los positivos por PCR en leche de tanque se concentran en los extremos de la distribución de seroprevalencias: 75% de los rebaños con seroprevalencias inferiores a 10% y 66% de los de prevalencias superiores al 30%. La presencia de C. burnetti en leche ovina por lo tanto alcanza unas proporciones altas, pero, con la metodología utilizada, no superiores a las determinadas en el estudio de seroprevalencia, lo cual confirmaría la conclusión anterior de que la infección por esta bacteria no se encuentra en expansión. 3.- Plan de control de la FQ en rebaños afectados Este objetivo se llevará a cabo en 2007, pero dentro de un nuevo proyecto financiado por INIA y que ha sido recientemente concedido. Este proyecto se cierra un año antes de lo previsto, ya que sus objetivos coinciden plenamente con un proyecto del INIA. 4

5 4.- Otros resultados de proyectos relacionados con la epidemiologia de la fiebre q en la CAV Epidemiología molecular de Coxiella burnetii El conocimiento de las variantes de Coxiella burnetii que circulan en España es escaso. Esto es debido a la dificultad y biopeligrosidad del cultivo de este patógeno. Sin embargo, sabemos que existen diferentes manifestaciones clínicas asociadas a la Fiebre Q, que van desde un cuadro subclínico hasta formas graves de curso crónico, pasando por cuadros agudos respiratorios o alteraciones hepáticas. Por ello uno de los objetivos de la colaboración entre NEIKER y el Instituto de Salud Carlos III-Centro Nacional de Microbiología (CNM) (Lab. De Patógenos Especiales, Dr. Pedro Anda) ha sido el estudiar las variantes de C. burnetii que circulan en España y su asociación con las diferentes manifestaciones clínicas de la enfermedad. Se estudiaron las muestras clínicas humanas enviadas al CNM para su diagnóstico, así como muestras de garrapatas, micromamíferos y muestras de ganado ovino y bovino. Las zonas del estudio incluyeron la región norte (País Vasco), centro (Madrid) y sur (Andalucía e Islas Canarias). Para el estudio se realizó el cultivo en células Vero y la detección molecular de la transposasa IS1111 y del gen adaa. En el análisis preliminar realizado en el CNM, se ha observado que en nuestra zona, el País Vasco, donde la manifestación clínica mayoritaria en la especie humana es la respiratoria, y existe abundancia de ganado ovino, las cepas estudiadas fueron adaa PCR positiva. Estos datos representan el primer estudio realizado sobre las cepas/variantes de C. burnetii que circulan en nuestro entorno y contribuye a un mejor conocimiento de la epidemiología molecular de este patógeno en España. Estudio de los reservorios silvestres También se han obtenido los primeros resultados de prevalencia de Coxiella burnetii en fauna silvestre de nuestra zona, en concreto en las poblaciones de micromamíferos. En capturas realizadas en el entorno de 4 explotaciones ovinas de Gipuzkoa y en 10 áreas recreativas distribuidas en los 3 territorios, se detectó la presencia de C. burnetii en las especies Mus domesticus (ratón doméstico) y Apodemus sylvaticus (ratón de campo) recogidos en una de las explotaciones ovinas. El general la prevalencia observada fue del 1.2% (3 ratones positivos de 253 ratones analizados), y en particular, el 0.6% y el 7% de los ratones de campo y los ratones domésticos respectivamente, mostraron tener DNA de C. burnetii. Haciendo un estudio retrospectivo en la explotación donde se capturaron los ejemplares positivos, el ganadero si bien en el momento del estudio no manifestó tener problemas de abortos en las ovejas, si que los había tenido con anterioridad, y disponía de resultados serológicos de ovejas abortadas en las que se observaban títulos de anticuerpos frente a fiebre Q (1/264), lo que indica el potencial de estas especies como reservorio de esta bacteria en el medio natural y en el entorno humano. 5

6 5.- Información científica generada Publicaciones Científicas Internacionales OPORTO, B., BARANDIKA, J.F., HURTADO, A., MORENO, B., ADURIZ, G., GARCÍA-PÉREZ, A.L. Incidence of ovine abortion by Coxiella burnetii in Northern Spain. Annals in the New York Academy of Science, 1078: BARANDIKA J. F., HURTADO, A., GIL, H, GARCIA ESTEBAN, C., ESCUDERO, R. BARRAL, M, JADO I., JUSTE R.A., ANDA P., GARCÍA-PÉREZ, A. L. Tickborne zoonotic bacteria in wild and domestic small mammals in Northern Spain. Applied and Environmental Microbiology, (en prensa)