Procesado de muestras en el laboratorio de la clínica (II)

Transcripción

1 10.prevención de la salud Procesado de muestras en el laboratorio de la clínica (II) La citología consiste en el estudio microscópico de las células. Para poder realizar una adecuada interpretación de la citología es imprescindible que las técnicas de obtención y procesado de las muestras sean correctas. Toma de muestras En esta segunda parte del trabajo sobre toma de muestras hablaremos de la toma de muestras para citología. Os contamos como obtenerla, como procesarla y como enviarla a un laboratorio externo si fuese necesario. El estudio citológico se puede realizar sobre diversos tipos de muestras: lesiones cutáneas o subcutáneas, ganglios linfáticos, órganos, piel, médula ósea, líquidos orgánicos, etc. Existen cuatro tipos de técnicas para obtener muestras: a. Impronta. b. Raspado. c. Frotis. d. Punción-Aspiración con aguja fina (PAAF).

2 11 a. Impronta Esta técnica consiste en apoyar un portaobjetos sobre el tejido lesionado para que las células desprendidas de la lesión se adhieran al porta. Se puede realizar con fragmentos de tejido obtenidos por biopsia o bien en lesiones externas en animales vivos. Cuando utilizamos fragmentos de tejido es conveniente que apoyemos varias veces, sin presionar, la cara de la muestra sobre un papel secante, para eliminar la contaminación de sangre en la muestra. Posteriormente, apoyaremos la muestra varias veces sobre portas limpios hasta que obtengamos una capa uniforme y fi na de células. Si utilizamos esta técnica en lesiones externas del animal vivo, es importante realizar una impronta, apoyando ligeramente el porta sobre Para realizar un raspado echaremos una gota de aceite sobre la zona y sobre la hoja de bisturí para mejorar la adherencia de la muestra la zona afectada, antes de lavar la lesión. Después, lavaremos la lesión con una gasa y suero fi siológico, reavivaremos la lesión mediante raspado con una cuchilla de bisturí, secaremos con material absorbente, y volveremos a realizar otra impronta. b. Raspado Esta técnica consiste en el raspado con una cuchilla de bisturí de la superfi cie de una lesión. Su mayor utilidad es el estudio de lesiones externas. Primero lavaremos la lesión con suero fisiológico y secaremos la zona con papel absorbente. Echaremos una gota de aceite sobre la zona elegida y sobre la hoja de bisturí para que se adhiera el material que vamos a raspar. Posteriormente apoyaremos el filo de la cuchilla perpendicular a la superficie de la lesión y la desplazaremos varias veces sobre la misma, sin ejercer excesiva presión. El material obtenido se transfi ere al centro de un portaobjetos limpio y se extiende siguiendo cualquiera de las técnicas que comentaremos posteriormente en la preparación de extensiones. c. Frotis Esta técnica consiste en la obtención de células deslizando suavemente un hisopo o bastoncillo de algodón sobre una superfi cie orgánica. Conviene humedecer el bastoncillo con suero fi siológico para prevenir el daño en las células de la muestra. Se usa, fundamentalmente, cuando no es posible obtener muestras mediante impronta, raspado o aspiración con aguja fi na, por ejemplo en trayectos fi stulosos, citología vaginal, etc...

3 12 Una vez obtenida la muestra, deberemos apoyar y hacer rotar el hisopo sobre el porta, sin ejercer mucha presión y sin pasar dos veces por el mismo sitio. d. Punción-Aspiración con aguja fina (PAAF): Esta técnica está especialmente indicada para la obtención de muestras citológicas de órganos o lesiones sólidas, mediante la punción y/o aspiración de lesiones con una aguja y una jeringa. Para esta técnica se suelen utilizar agujas de 22 g (amarillas) y jeringas de 10 cc. Es importante preparar la zona donde se va a realizar la punción. Para muestras subcutáneas, bastará con limpiar la zona de piel con alcohol. Si la muestra se va a recoger por punción de la cavidad abdominal, torácica o articulaciones, la zona de piel deberá prepararse como un campo quirúrgico. Para realizar la punción aspiración, se debe sujetar firmemente la masa con los dedos, siempre que sea posible, con el fin de favorecer la penetración de la aguja en la piel y en el tejido, y el control de la dirección. La aguja, unida a la jeringa, se dirige hacia el centro de la masa y se ejerce una presión negativa (haciendo retroceder el émbolo de la jeringa hasta aproximadamente 3 4 partes del volumen de la jeringa). Se puede realizar aspiraciones de varias zonas de la masa, evitando en todo momento salirnos de la masa y que el material aspirado se contamine con sangre. Si la masa es grande, podemos mantener la presión negativa mientras redirigimos la aguja a otra zona. En masas pequeñas es más conveniente suspender la presión negativa mientras movemos la aguja. Una vez obtenido el material, se deja de ejercer la presión negativa y se extrae la aguja y la jeringa de la masa y de la piel. Posteriormente, separamos la aguja de la jeringa y llenamos de aire esta última, mediante una aspiración. Entonces, se vuelve a colocar la aguja en el cono de la jeringa y se expele el contenido en la parte central de un porta, intentando que quede en forma de gota. Existe una variante de esta técnica que es la punción con aguja fina sin aspiración. Se realiza de forma similar, pero sin ejercer presión negativa, con lo que está especialmente indicada en lesiones muy vascularizadas (con mucho sangre) y en los ganglios linfáticos. Realizaremos la punción de la lesión, moviendo varias veces la aguja dentro de la masa, hacia adelante y atrás, e intentando permanecer en el mismo trayecto. La recogida de células se realiza mediante el corte de la propia aguja, que se irá llenando con las células desprendidas. Luego acoplamos una jeringa de unos 10 cc que previamente habremos llenado de aire y expeleremos el material en un porta limpio. Debemos hacer esto lo antes posible para evitar que se seque la muestra. La punción se puede repetir varias veces en una misma masa siempre que no aparezca contaminación sanguínea. Finalmente, se realizará la extensión como comentaremos a continuación. Procesado de las Muestras 1. Extensión En el caso de las muestras obtenidas por raspado o por PAAF, el material obtenido debe ser extendido sobre el porta para formar una capa fina de células que permita una correcta visualización. Es muy importante realizar el manejo de la muestra con mucho cuidado, evitando ejercer excesiva presión para no dañar las células. Para evitar que la muestra se seque, deberemos realizar la extensión lo más rápi-

4 prevención de la salud.13 a. Técnica de aplastamiento (squash): Esta técnica de extensión consiste en los siguientes pasos: 1) Poner el material en forma de gota en uno de los extremos del porta 2) Apoyar sin ejercer mucha presión un segundo porta por una de sus caras y en sentido perpendicular al primero 3) Con un movimiento rápido, deslizar el segundo porta sobre el primero

5 14 b. Técnica de extensión sanguínea: Está técnica de extensión puede usarse cuando la muestra obtenida es muy fluida. Se utiliza sobre todo para extender las gotas de sangre para hacer un frotis. Utilizaremos dos portas, uno con la gota de muestra en un extremo, y el otro para realizar la extensión (Figura 2). El porta de arriba puede ser sustituido por un cubre. 1) Apoyaremos uno de los bordes cortos del porta de extensión (o un cubre), sobre el porta con la muestra, formando un ángulo de 30-40º 2) Deslizaremos el porta de extensión hasta contactar con la gota, con lo que el material se extenderá en forma de línea en el borde corto del porta de extensión 3) Con un movimiento rápido y suave deslizamos el porta de extensión, alejándonos de la gota, formándose una capa uniforme

6 prevención de la salud.15 damente posible una vez que coloquemos la gota de muestra en el portaobjetos. Todas las extensiones deben de ser marcadas con rotuladores indelebles al alcohol o con lapicero (en portas esmerilados) para su correcta identifi cación. Existen varías formas de realizar la extensión, aquí os desarrollamos dos de ellas la técnica de aplastamiento (squash) y la de extensión 2 Fijación y tinción Para que las células se adhieran al portaobjetos, y para evitar que se degeneren las células, hay que fi jar la muestra. Si la muestra se remite a un laboratorio especializado es mejor no teñirlas en la clínica, hay que fi jarlas y dejarlas sin teñir. El método de fi jación puede variar según la técnica de tinción que se vaya utilizar. Normalmente en la clínica o para el envío de muestras a otro laboratorio la muestra debe de secarse al aire y luego debe fi jarse con metanol. También puede utilizarse el primer reactivo de las técnicas rápidas. Cuando la preparación se tiñe en la clínica se usa normalmente la Técnica rápida Diff-Quik. Esta técnica de tinción es muy utilizada debido a su sencillez y rapidez, todos sus reactivos son comerciales y están ajustados para realizar la técnica en el menor tiempo posible. Muchas veces la tinción de las extensiones citológicas se hace en la propia clínica para realizar allí su interpretación pero otras veces se remite. Remisión de Muestras: Cuando se remitan muestras de citologías a un laboratorio especializado, estas deben ir en contenedores adecuados. todas las extensiones deben de ser marcadas con rotuladores indelebles al alcohol o con lapicero (en portas esmerilados) para su correcta identificación Las extensiones deben enviarse fi jadas (metanol) y colocadas en portapreparaciones de plástico. Si no disponemos de ellos pueden protegerse envolviéndolas con varias capas de papel adsorbente. Ante cualquier duda sobre el procesamiento de la muestra o forma de envío es aconsejable ponerse en contacto con el laboratorio de referencia.